一种负载治疗肾缺血再灌注损伤药物纳米粒子的制备方法技术

本发明专利技术一种负载治疗肾缺血再灌注损伤药物纳米粒子的制备方法，该方法由以下步骤组成：将肾缺血再灌注损伤治疗药物、乳化剂、叶酸修饰的嵌段物加入到有机溶剂中，得到有机相溶液；将有机相溶液通过旋转蒸发除掉有机溶剂，形成聚合物薄膜，再加入水溶液，乳化后，在水浴加热搅拌后，离心，固相产物经洗涤，得到负载治疗肾缺血再灌注损伤药物的纳米粒子。本发明专利技术所述方法所制备的纳米粒子能够将药物特异性靶向到肾脏部位并缓慢释放，可显著提高疗效。

Preparation of drug nanoparticles loaded for renal ischemia-reperfusion injury

The preparation method of nanoparticles loaded with drugs for treating renal ischemia-reperfusion injury consists of the following steps: adding blocks of drugs, emulsifiers and folic acid modified for renal ischemia-reperfusion injury treatment into organic solvents to obtain organic phase solutions; removing organic solvents by rotating evaporation, forming polymer films, and adding aqueous solutions. After emulsification, heating and stirring in water bath, centrifugation and washing of solid products, nanoparticles loaded with drugs for renal ischemia-reperfusion injury were obtained. The nanoparticles prepared by the method of the invention can target the drug specifically to the kidney and release slowly, and can significantly improve the curative effect.

【技术实现步骤摘要】
一种负载治疗肾缺血再灌注损伤药物纳米粒子的制备方法
本专利技术涉及医药配制品，具体涉及负载治疗肾缺血再灌注损伤药物高分子化合物的制备方法。
技术介绍
急性肾损伤是一种常见的临床综合征，严重影响着人类的生命和健康。急性肾损伤患者死亡率较高，在没有得到有效治疗的情况下更有可能转变为慢性肾脏疾病。而肾缺血再灌注损伤被认为是引起急性肾损伤的主要原因，通常发生在肾移植、心肺复苏或主动脉旁路手术、创伤、出血、低血压和烧伤过程中。肾缺血再灌注损伤常伴有高的发病率和死亡率，已经成为全球公共健康的沉重负担之一。因此，肾缺血再灌注损伤在急性肾损伤治疗中具有十分关键的地位。然而，目前治疗肾缺血再灌注损伤的药物普遍存在着细胞摄取效率低、体内保留时间短、肾脏浓度不足、疗效差的问题。因此，提高细胞对药物摄取效率，延长药物在体内的保留时间和实现药物的特异性肾脏靶向是实现高效治疗肾缺血再灌注损伤的关键。但是，要实现药物的高效运载并延长药物在病灶部位的停留时间，进而有效地治疗肾缺血再灌注损伤仍然面临着巨大的挑战。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种负载治疗肾缺血再灌注损伤药物纳米粒子的制备方法，该方法所制备的纳米粒子能够将药物特异性靶向到肾脏部位并缓慢释放，可显著提高疗效。本专利技术要解决问题的技术方案如下：一种负载治疗肾缺血再灌注损伤药物纳米粒子的制备方法，该方法由以下步骤组成：(1)将叶酸溶于二甲基亚砜，按N,N'-羰基二咪唑︰叶酸＝1.5摩尔比的比例加入N,N'-羰基二咪唑，避光搅拌1天后，按普朗尼克类似物︰叶酸＝1.5摩尔比的比例加入普朗尼克类似物，继续在避光反应1天后，将反应溶液转移到透析袋中透析3天，且每6小时换一次透析液；透析结束后，冷冻干燥，得到叶酸-普朗尼克嵌段物；(2)将治疗肾缺血再灌注损伤药物、乳化剂和所述叶酸-普朗尼克嵌段物加入到有机溶剂中，并使得所述肾缺血再灌注损伤治疗药物的浓度为0.1～0.6mg/mL，所述乳化剂的浓度为10～30mg/mL，所述叶酸-普朗尼克嵌段物的浓度为10～30mg/mL，得到有机相溶液；(3)挥去所得到的有机相溶液中的有机溶剂形成聚合物薄膜后，加入步骤(2)所用有机相溶剂同体积的水进行乳化，然后水浴加热搅拌，离心，收集固相产物，去离子水洗涤，得到所述负载治疗肾缺血再灌注损伤药物的纳米粒子；上述步骤中，所述治疗肾缺血再灌注损伤药物为雷公藤甲素；所述乳化剂为聚乙烯吡咯烷酮、泊洛沙姆188、聚乙烯醇、D-α-生育酚聚乙二醇(1000)琥珀酸酯、普朗尼克L101、聚乙二醇或普朗尼克P105；所述普朗尼克类似物为普朗尼克F127、普朗尼克L121、普朗尼克F68或普朗尼克P123；所述有机溶剂为丙酮、乙腈、二氯甲烷、四氢呋喃或甲醇。上述方法中，步骤(3)中所述水浴的温度为30-50℃，搅拌的时间为3-6h。上述方法中，步骤(3)中所述的乳化的方法为超声乳化或均质乳化。本专利技术的制备方法具有如下有益效果：(1)本专利技术利用薄膜水合法制得的负载治疗肾缺血再灌注损伤药物的纳米粒子是利用药物、乳化剂、叶酸-普朗尼克嵌段物之间的亲疏水相互作用自组装得到，所得的纳米粒子的粒径均在90nm左右，且能够增加药物的水溶性并且使药物具有缓释的效果。(2)本专利技术制备的纳米粒子具有暴露在表面的叶酸配体，能够特异性靶向到肾脏部位，并且高效地将药物摄取进入细胞，延长药物在肾脏的停留，从而实现对肾缺血再灌注损伤的高效治疗。附图说明图1为实施例1中所得负载治疗肾缺血再灌注损伤药物的纳米粒子的扫描电镜图。图2为实施例1中所得负载治疗肾缺血再灌注损伤药物的纳米粒子体外药物释放曲线图。图3为实施例1中所得的负载治疗肾缺血再灌注损伤药物的纳米粒子将药物摄取进入细胞效率的条形图。图4为实施例1中所得的负载肾缺血再灌注治疗药物的纳米粒子静脉注射进入小鼠后器官分布情况的条形图和药代动力学曲线图。图5为实施例1中所得的负载肾缺血再灌注治疗药物的纳米粒子静脉注射进入小鼠后的肾脏H&E染色图。图6为实施例1中所得的负载肾缺血再灌注治疗药物的纳米粒子静脉注射进入小鼠后的肾功能指标的条形图。图7为实施例1中所得的负载肾缺血再灌注治疗药物的纳米粒子静脉注射进入小鼠后蛋白p-ERK表达的电泳图。具体实施方式实施例1(1)将1.00g叶酸溶于二甲基亚砜，加入0.55gN,N'-羰基二咪唑，避光搅拌1天后，加入42.86g普朗尼克F127，继续在避光反应1天后，将反应溶液转移到透析袋中透析3天，且每6小时换一次透析液；透析结束后，冷冻干燥，得到叶酸-普朗尼克嵌段物；(2)将2mg雷公藤甲素、50mg普朗尼克P123和100mg叶酸修饰的普朗尼克F127嵌段物加入到5mL甲醇中，得到有机相溶液；(3)在50℃旋转蒸发下挥去所得到的有机相溶液中的有机溶剂，形成聚合物薄膜，再加入5mL去离子水，超声(功率250W，频率40kHz)乳化5min，然后在50℃水浴搅拌下沉化6h。固体产物离心洗涤三次，即得到负载肾缺血再灌注治疗药物的纳米粒子。实施例2(1)将1.00g叶酸溶于二甲基亚砜，加入0.55gN,N'-羰基二咪唑，避光搅拌1天后，加入19.56g普朗尼克P123，继续在避光反应1天后，将反应溶液转移到透析袋中透析3天，且每6小时换一次透析液；透析结束后，冷冻干燥，得到叶酸-普朗尼克嵌段物；(2)将0.8mg雷公藤甲素、160mg聚乙二醇和160mg叶酸修饰的普朗尼克P123嵌段物加入到8mL丙酮中，得到有机相溶液；(3)在50℃旋转蒸发下挥去所得到的有机相溶液中的有机溶剂，形成聚合物薄膜，再加入8mL去离子水，均质(15000rpm)乳化5min，然后在30℃水浴搅拌下沉化3h。固体产物离心洗涤三次，即得到负载肾缺血再灌注治疗药物的纳米粒子。实施例3(1)将1.00g叶酸溶于二甲基亚砜，加入0.55gN,N'-羰基二咪唑，避光搅拌1天后，加入15.12g普朗尼克L121，继续在避光反应1天后，将反应溶液转移到透析袋中透析3天，且每6小时换一次透析液；透析结束后，冷冻干燥，得到叶酸-普朗尼克嵌段物；(2)将2mg雷公藤甲素、300mg泊洛沙姆188和100mg叶酸修饰的普朗尼克L121嵌段物加入到10mL乙腈中，得到有机相溶液；(3)在50℃旋转蒸发下挥去所得到的有机相溶液中的有机溶剂，形成聚合物薄膜，再加入10mL去离子水，超声(功率250W，频率40kHz)乳化5min，然后在40℃水浴搅拌下沉化4h。固体产物离心洗涤三次，即得到负载肾缺血再灌注治疗药物的纳米粒子。实施例4(1)将1.00g叶酸溶于二甲基亚砜，加入0.55gN,N'-羰基二咪唑，避光搅拌1天后，加入28.40g普朗尼克F68，继续在避光反应1天后，将反应溶液转移到透析袋中透析3天，且每6小时换一次透析液；透析结束后，冷冻干燥，得到叶酸-普朗尼克嵌段物；(2)将3mg雷公藤甲素、50mg聚乙烯吡咯烷酮和150mg叶酸修饰的普朗尼克F68嵌段物加入到5mL二氯甲烷中，得到有机相溶液；(3)在50℃旋转蒸发下挥去所得到的有机相溶液中的有机溶剂，形成聚合物薄膜，再加入5mL去离子水，均质(15000rpm)乳化5min，然后在50℃水浴搅拌下沉化5h。固体产物离心洗涤三次，即本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种负载治疗肾缺血再灌注损伤药物纳米粒子的制备方法，该方法由以下步骤组成：(1)将叶酸溶于二甲基亚砜，按N,N'‑羰基二咪唑︰叶酸＝1.5摩尔比的比例加入N,N'‑羰基二咪唑，避光搅拌1天后，按普朗尼克类似物︰叶酸＝1.5摩尔比的比例加入普朗尼克类似物，使得，继续在避光反应1天后，将反应溶液转移到透析袋中透析3天，且每6小时换一次透析液；透析结束后，冷冻干燥，得到叶酸‑普朗尼克嵌段物；(2)将治疗肾缺血再灌注损伤药物、乳化剂和所述叶酸‑普朗尼克嵌段物加入到有机溶剂中，并使得所述肾缺血再灌注损伤治疗药物的浓度为0.1～0.6mg/mL，所述乳化剂的浓度为10～30mg/mL，所述叶酸‑普朗尼克嵌段物的浓度为10～30mg/mL，得到有机相溶液；(3)挥去所得到的有机相溶液中的有机溶剂形成聚合物薄膜后，加入步骤(2)所用有机相溶剂同体积的水进行乳化，然后水浴加热搅拌，离心，收集固相产物，去离子水洗涤，得到所述负载治疗肾缺血再灌注损伤药物纳米粒子；上述步骤中，所述治疗肾缺血再灌注损伤药物为雷公藤甲素；所述乳化剂为聚乙烯吡咯烷酮、泊洛沙姆188、聚乙烯醇、D‑α‑生育酚聚乙二醇(1000)琥珀酸酯、普朗尼克L101、聚乙二醇或普朗尼克P105；所述普朗尼克类似物为普朗尼克F127、普朗尼克L121、普朗尼克F68或普朗尼克P123；所述有机溶剂为丙酮、乙腈、二氯甲烷、四氢呋喃或甲醇。...

【技术特征摘要】
1.一种负载治疗肾缺血再灌注损伤药物纳米粒子的制备方法，该方法由以下步骤组成：(1)将叶酸溶于二甲基亚砜，按N,N'-羰基二咪唑︰叶酸＝1.5摩尔比的比例加入N,N'-羰基二咪唑，避光搅拌1天后，按普朗尼克类似物︰叶酸＝1.5摩尔比的比例加入普朗尼克类似物，使得，继续在避光反应1天后，将反应溶液转移到透析袋中透析3天，且每6小时换一次透析液；透析结束后，冷冻干燥，得到叶酸-普朗尼克嵌段物；(2)将治疗肾缺血再灌注损伤药物、乳化剂和所述叶酸-普朗尼克嵌段物加入到有机溶剂中，并使得所述肾缺血再灌注损伤治疗药物的浓度为0.1～0.6mg/mL，所述乳化剂的浓度为10～30mg/mL，所述叶酸-普朗尼克嵌段物的浓度为10～30mg/mL，得到有机相溶液；(3)挥去所得到的有机相溶液中的有机溶剂形成聚合物薄膜后，加入步骤(2)所用有机相溶剂同体积...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾涛，李嘉文，李爱青，
申请(专利权)人：南方医科大学，
类型：发明
国别省市：广东,44