一种杏鲍菇多糖的提取分离方法技术

一种杏鲍菇多糖的提取分离方法，它涉及食用菌多糖提取。本发明专利技术为了解决现有以热提为基础的提取方法会破坏糖蛋白结构，而多数起免疫活性作用的结构多为糖蛋白，且多为传统醇沉一次提取，多糖利用率相对不高的问题；本发明专利技术采用水提+复合酶法(纤维素酶+果胶酶)+分级醇沉提取杏鲍菇多糖，进一步使用Sevage法，去除蛋白质；再使用分级醇沉得到不同乙醇浓度下沉淀的多糖，研究出针对提升免疫活性方向性更强的杏鲍菇多糖，提升杏鲍菇深加工利用率，对杏鲍菇提取出的多糖活性功能进行评价；本发明专利技术应用于食用菌深加工领域。

Extraction and Separation of Polysaccharide from Pleurotus eryngii

A method for extracting and separating polysaccharides from Pleurotus eryngii relates to the extraction of Polysaccharides from edible fungi. In order to solve the problem that the existing extraction methods based on heat extraction can destroy the structure of glycoprotein, and most of the structures with immunological activity are glycoproteins, and most of them are extracted by traditional alcohol precipitation at one time, and the utilization rate of polysaccharides is relatively low, the present invention adopts water extraction + composite enzyme method (cellulase + pectinase) + fractional alcohol precipitation to extract polysaccharides from Pleurotus eryngii, and further uses Sevage method to remove them. Protein; then the polysaccharides precipitated under different ethanol concentration are obtained by graded alcohol precipitation, and the polysaccharides extracted from Pleurotus eryngii are evaluated to enhance the directional immune activity and the utilization rate of Pleurotus eryngii for further processing; the present invention is applied to the field of edible fungi deep processing.

【技术实现步骤摘要】
一种杏鲍菇多糖的提取分离方法
本专利技术属于食用菌多糖领域，具体涉及杏鲍菇多糖的提取分离。
技术介绍
食物成分和健康的影响一直受到世界范围内的关注。膳食多糖在促进人类健康方面显示出巨大的前景，因为它们揭示出许多营养物质和药物的作用。食用菌多糖是近年来科学研究的热点之一，国际上食药用真菌多糖享有“生物反应调节剂”的美誉，用作非特异性生物免疫促进剂，具有抗肿瘤、抗病毒、延缓衰老、降血脂、护肝排毒、促进核酸和蛋白质生物合成等多种生物功效。杏鲍菇是一种蛋白质含量高、脂肪含量低，并含有丰富的膳食纤维和多糖等功能成分的绿色健康食品。据报道，烘干的杏鲍菇(含水量3.24％)中总糖含量39.41％(其中粗多糖含量13.18％，海藻糖含量11.64％)，蛋白质含量18.61％，粗纤维含量12.74％，灰分含量5.38％，粗脂肪含量1.52％，相比于香菇等其他菌类干品，杏鲍菇富含游离脂肪酸和蛋白质，且必需氨基酸占总氨基酸含量的37.53％，适宜老年人食用。杏鲍菇中还含有含量丰富的矿物元素钙(248.42mg/100g)、铁(6.38mg/100g)、锌(4.28mg/100g))、碘(3.084mg/100g)和硒(0.074mg/100g)。杏鲍菇多糖具有抗氧化性，能够增强免疫力，抗肿瘤，降血脂，抗疲劳等功能。虽然目前国内杏鲍菇已经产量化，但是产品价格却无法提升，主要问题之一在于杏鲍菇产品只提升了量产而在其深加工方面探索不足，其潜在价值并未得到充分利用；而杏鲍菇已知具有多种免疫活性，可对人体起到免疫提升、抗癌等作用，目前杏鲍菇产品主要形式为未深加工的杏鲍菇直接出售，而对于将杏鲍菇深加工提取其多糖形成各种保健品的产品形式并不多见，如果能将提取出的杏鲍菇多糖深加工利用，其价值必将提升。现有食用菌多糖提取方法为：浸提法、酶法、超声波辅助提取、微波辅助提取等。上述方法提取的粗多糖，含有蛋白、色素等杂质，因此并不能满足研究的要求，需要进一步的分离纯化。现有，食用菌多糖的提取方法由于提取方法和特点的不同，多糖的提取率也各不相同，杏鲍菇多糖的提取率多在8％～20％之间。而且，传统以热提为基础的提取方法会破坏糖蛋白结构，而多数起免疫活性作用的结构多为糖的蛋白，且多为传统醇沉一次提取，多糖利用率相对不高。因此，急需一种杏鲍菇多糖的提取工艺，能更利于杏鲍菇多糖的产业应用。
技术实现思路
本专利技术旨在解决现有以热提为基础的提取方法会破坏糖蛋白结构，而多数起免疫活性作用的结构多为糖的蛋白，且多为传统醇沉一次提取，多糖利用率相对不高的问题。而提供一种改进杏鲍菇多糖提取方法，将传统的以热提为基础配合其他方法一次提取多糖的方法改为低温配合其他方法，利用分级醇沉多次提取多糖，探究不同浓度醇沉出的不同多糖组分分别对提升免疫活性的能力，以研究出针对提升免疫活性方向性更强的杏鲍菇多糖，提升杏鲍菇深加工利用率，对杏鲍菇提取出的多糖活性功能进行评价。本专利技术的一种杏鲍菇多糖的提取分离方法，它包以下步骤：一、取新鲜成熟的杏鲍菇，清洗后进行切片，将杏鲍菇片烘干之后，粉碎，过筛，烘干备用；二、将步骤一烘干后得到的杏鲍菇干粉按料液比1:5～15的比例加入蒸馏水，再加入纤维素酶和果胶酶，在酶解温度为54℃的条件下酶解时间2.5h，待反应结束后,升温至100℃灭酶，过滤去除沉淀，得杏鲍菇总糖的提取液；其中，加入的纤维素酶占杏鲍菇溶液质量的0.01～0.1％，加入的果胶酶占杏鲍菇溶液质量的5～15％；三、对杏鮑菇多糖提取物进行梯度酒精沉淀：1)将步骤二得到的提取液定容至300mL后加入75mL无水乙醇，放入4℃冰箱静置12h后取出，在6000r/min的条件下离心15min，收集沉淀为R1组分；2)取步骤1)离心后的上清液加入125mL无水乙醇，放入4℃冰箱静置12h后取出，在6000r/min的条件下离心15min，收集沉淀为R2组分；3)取步骤2)离心后的上清液加入250mL无水乙醇，放入4℃冰箱静置12h后取出，在6000r/min的条件下离心15min，收集沉淀为R3组分；4)取步骤3)离心后的上清液加入750mL无水乙醇，放入4℃冰箱静置12h后取出，在5000r/min的条件下离心15min，收集沉淀为R4组分；四、将步骤三收集到的R1-R4组分混合后加水复溶，放烘箱55℃干燥，干燥12h，即得杏鲍菇多糖。由于，杏鲍茹多糖是存在于杏鲍茹中的主要功能性成分，目前国内的研究还处于基本的初级的阶段，而要研究多糖的理化性质、生物活性、构效关系等，首先需要研究如何取得多糖，即多糖的提取。从真菌中提取多糖，主要是根据其相似相容的性质，选择一种极性适合的溶剂作为提取溶液，再加上在其他一些条件的辅助(如微波、超声等)来进行提取。不同极性的溶液有水、稀碱、稀酸及其他溶剂，在多糖的众多提取方法中，水提醇沉法是使用较为广泛的方法，其原理是利用多糖溶于水却不溶于离浓度有机溶剂乙醇的性质来对它进行提取。基于此，本专利技术采用水提+复合酶法(纤维素酶+果胶酶)+分级醇沉提取杏鲍菇多糖，进一步使用Sevage法，去除蛋白质；再使用分级醇沉得到不同乙醇浓度下沉淀的多糖，进行加和算出此方案多糖提取率。本专利技术方法与现有杏鲍茹多糖提取方法相比，优势在于：1)传统提取方法提取都是以热提为基础，或许会将多糖内活性物质破坏，进而降低多糖价值；而本专利技术的方法低温复合酶提取是用两种酶破坏杏鲍菇细胞壁中的纤维素和果胶进而达到破坏细胞壁释放多糖的目的，这样最大程度保证了杏鲍菇多糖不会因为高温结构发生变化进而防止影响其活性2)传统提取方法都是用传统醇沉，而本专利技术的提取方法使用分级醇沉，这样一组组分通过分级醇沉不同的乙醇浓度被醇沉成多组，进而通过对各组醇沉多糖进行试验，就能有效发现各组组分对抗氧化、人体的免疫、肠道菌群作用效果强弱，进而可以更有效的将对应组分用于对用产品开发和发现各组多糖组成的变化对各个指标的影响，进而进一步为探究各组分多糖组成和含量与人体免疫活性、肠道菌群的关系。附图说明图1为实施例1的多糖标准曲线图；图2为实施例1的样品的高效液相色谱图；图3为实施例1的杏鲍菇多糖羟基自由基的清除率图；图4为杏鲍菇多糖对超氧阴离子的清除率图；图5为杏鲍菇多糖对DPPH自由基的清除率图。具体实施方式具体实施方式一：本实施方式的一种杏鲍菇多糖的提取分离方法，它包以下步骤：一、取新鲜成熟的杏鲍菇，清洗后进行切片，将杏鲍菇片烘干之后，粉碎，过筛，烘干备用；二、将步骤一烘干后得到的杏鲍菇干粉按料液比1:5～15的比例加入蒸馏水，再加入纤维素酶和果胶酶，在酶解温度为54℃的条件下酶解时间2.5h，待反应结束后,升温至100℃灭酶，过滤去除沉淀，得杏鲍菇总糖的提取液；其中，加入的纤维素酶占杏鲍菇溶液质量的0.01～0.1％，加入的果胶酶占杏鲍菇溶液质量的5～15％；三、对杏鮑菇多糖提取物进行梯度酒精沉淀：1)将步骤二得到的提取液定容至300mL后加入75mL无水乙醇，放入4℃冰箱静置12h后取出，在6000r/min的条件下离心15min，收集沉淀为R1组分；2)取步骤1)离心后的上清液加入125mL无水乙醇，放入4℃冰箱静置12h后取出，在6000r/min的条件下离心15min，收集沉淀为R2组分；3)取步骤2)离心后的上清液本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种杏鲍菇多糖的提取分离方法，其特征在于它包以下步骤：一、取新鲜的杏鲍菇，清洗后进行切片，将杏鲍菇片烘干之后，粉碎，过筛，烘干备用；二、将步骤一烘干后得到的杏鲍菇干粉按料液比1:5～15的比例加入蒸馏水，再加入纤维素酶和果胶酶，在酶解温度为54℃的条件下酶解时间2.5h，待反应结束后，升温至100℃灭酶，过滤去除沉淀，得杏鲍菇总糖的提取液；其中，加入的纤维素酶占杏鲍菇溶液质量的0.01～0.1％，加入的果胶酶占杏鲍菇溶液质量的5～15％；三、对杏鮑菇多糖提取物进行梯度酒精沉淀：1)将步骤二得到的提取液定容至300mL后加入75mL无水乙醇，放入4℃冰箱静置12h后取出，在6000r/min的条件下离心15min，收集沉淀为R1组分；2)取步骤1)离心后的上清液加入125mL无水乙醇，放入4℃冰箱静置12h后取出，在6000r/min的条件下离心15min，收集沉淀为R2组分；3)取步骤2)离心后的上清液加入250mL无水乙醇，放入4℃冰箱静置12h后取出，在6000r/min的条件下离心15min，收集沉淀为R3组分；4)取步骤3)离心后的上清液加入750mL无水乙醇，放入4℃冰箱静置12h后取出，在5000r/min的条件下离心15min，收集沉淀为R4组分；四、将步骤三收集到的R1‑R4组分混合后加水复溶，放烘箱55℃干燥，干燥12h，即得杏鲍菇多糖。...

【技术特征摘要】
1.一种杏鲍菇多糖的提取分离方法，其特征在于它包以下步骤：一、取新鲜的杏鲍菇，清洗后进行切片，将杏鲍菇片烘干之后，粉碎，过筛，烘干备用；二、将步骤一烘干后得到的杏鲍菇干粉按料液比1:5～15的比例加入蒸馏水，再加入纤维素酶和果胶酶，在酶解温度为54℃的条件下酶解时间2.5h，待反应结束后，升温至100℃灭酶，过滤去除沉淀，得杏鲍菇总糖的提取液；其中，加入的纤维素酶占杏鲍菇溶液质量的0.01～0.1％，加入的果胶酶占杏鲍菇溶液质量的5～15％；三、对杏鮑菇多糖提取物进行梯度酒精沉淀：1)将步骤二得到的提取液定容至300mL后加入75mL无水乙醇，放入4℃冰箱静置12h后取出，在6000r/min的条件下离心15min，收集沉淀为R1组分；2)取步骤1)离心后的上清液加入125mL无水乙醇，放入4℃冰箱静置12h后取出，在6000r/min的条件下离心15min，收集沉淀为R2组分；3)取步骤2)离心后的上清液加入250mL无水乙醇，放入4℃冰箱静置12h后取出，在6000r/min的条件下离心15...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙庆申，王鑫，韩晓云，
申请(专利权)人：黑龙江大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23