一种包载YGLF纳脂体的制备方法技术

一种包载YGLF纳脂体的制备方法，涉及降血压肽YGLF。将YGLF溶解在氨水溶液中作为水相；油相为丙酮和二氯甲烷混合物，将水相放入油相中超声，在超声压力下水相通过超声，进入到油相中，得初乳液；将乳化剂与初乳液混合，搅拌超声后形成乳状液，再搅拌后得乳白色复乳状液；将脂质膜材料溶于有机溶剂中，减压，旋转蒸发挥去有机溶剂，得薄膜；将薄膜与乳白色复乳状液混合，高温水化脱膜，超声后均质或挤出，得到包载YGLF纳脂体。以PLGA为内核，以大豆卵磷脂、胆固醇和PEG化胆固醇为壁材，采用薄膜水化法制备包载YGLF纳脂体，并对纳脂体的形态结构及稳定性，体内降压情况进行了分析。

Preparation of YGLF nanoliposomes

The invention relates to a preparation method of YGLF nanoliposomes, which relates to the antihypertensive peptide YGLF. YGLF was dissolved in ammonia solution as the water phase; the oil phase was a mixture of acetone and dichloromethane, and the water phase was injected into the oil phase. The ultrasonic phase was injected into the oil phase under ultrasonic pressure, and the initial emulsion was obtained. After mixing the emulsifier with the initial emulsion, the emulsion was stirred up after ultrasonic, and then the milky white complex emulsion was obtained after mixing. The lipid membrane material was dissolved in organic solvent and decompressed. YGLF nanoliposomes were prepared by mixing the film with milky white compound emulsion, removing the film by high temperature hydration, homogenizing or extruding after ultrasound. YGLF nanoliposomes were prepared with PLGA as the core and soybean lecithin, cholesterol and PEG-cholesterol as wall materials by film hydration method. The morphological structure, stability and blood pressure reduction of YGLF nanoliposomes were analyzed.

【技术实现步骤摘要】
一种包载YGLF纳脂体的制备方法
本专利技术涉及降血压肽YGLF，尤其是涉及一种包载YGLF纳脂体的制备方法。
技术介绍
YF4(Tyr-Gly-Leu-Phe，YGLF)是一种从动物体内提取出的小分子血管紧张素转化酶抑制多肽，体外研究表明，其血管紧张素转化酶抑制活性良好，然而自发性高血压大鼠(SHR)灌胃给药后，降压药效甚微。主要原因可能为：YF4作为蛋白多肽类药物，口服给药时，极易被胃肠道中广泛存在的酶类降解失活，使得其口服生物利用度极低；此外，吸收入血后，由于药物半衰期较短，尚未进入血液循环就已失活，因而无法发挥理想的降压作用。核壳型纳米脂质体(纳脂体)，用于装载降压肽YF4(YF4-LNPs)，可以克服胃肠道的恶劣环境且可以对其起到保护作用，极大地保持YF4的生理特性，提高其稳定性。纳脂体是目前提高蛋白质以及多肽类药物体内稳定性以及实现肠道靶向释放的重要方法。纳脂体是通过混合油性组分和表面活性剂/助表面活性剂以适当的比例，使用高能过程(均化器，微流化器，或超声波发生器)来制造乳剂。这一方法成功地避免了高温，保护了肽的生物活性。脂质包衣PLGA纳米微粒系统(脂质纳米粒、LNPs)不仅结合了高分子纳米粒子和脂质体的优点,而且避免了它们的缺陷。微粒和纳米粒的双重好处使它成为一个优秀口服药物载体，用以增强制剂的生物相容性和可持续的释放。在这个系统中,药物可以有效地包裹在纳米粒子的核心和/或脂质双层,导致药物负荷能力的增加。聚合物芯也可以延缓药物扩散速率。另外，LNPs的稳定性可以由脂壳进一步增加。纳脂体乳剂是由脂质膜水化纳米乳剂进一步得来。纳米乳剂是由于内部存在不同极性的单相溶液，可以促进溶解亲水或亲脂性材料。通过形成将亲水性肽封入微/纳米乳液中简单的W/O乳液或多种W/O/W乳液得到。此外，通常也是水相用于乳液中，以促进溶解和包封的亲水性药物。纳脂体乳剂最后通过超声或挤出均质的方法获得，可实现乳液的尺寸均一性和可控性、微球表面功能的可控性和稳定性；实现均一乳液大规模制备的可行性等。SPG膜乳化法制备的微球，粒径范围为2～300μm，在药学领域可以作为控制药物释放的载体，将水溶性的抗高血压药物包埋制备成微球，提高生物利用率等。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种包载YGLF纳脂体的制备方法。本专利技术包括以下步骤：1)将YGLF溶解在氨水溶液中作为水相；油相为丙酮和二氯甲烷混合物，将水相放入油相中超声，在超声压力下水相通过超声，进入到油相中，得初乳液；2)将乳化剂与步骤1)中的初乳液混合，搅拌超声后形成乳状液，再搅拌后得乳白色复乳状液；3)将脂质膜材料溶于有机溶剂中，减压，旋转蒸发挥去有机溶剂，得薄膜；4)将步骤3)得到的薄膜与步骤2)得到的乳白色复乳状液混合，高温水化脱膜，超声后均质或挤出，得到包载YGLF纳脂体。在步骤1)中，所述将YGLF溶解在氨水溶液中作为水相，YGLF按体积百分比为氨水溶液的1.5％，氨水溶液的pH可为13；所述油相中丙酮和二氯甲烷的体积比可为1∶5；所述超声的时间可为1.5min；所述初乳液为W/O/W型乳状液，在初乳液中初乳体积与水相的体积比可为1∶3。在步骤2)中，所述乳化剂可采用PVA乳化剂，所述乳化剂的含量按质量百分比可为初乳液的1％；所述超声的时间可为0.75min；所述乳白色复乳状液为W/O/W型乳状液。在步骤3)中，所述脂质膜材料可选自胆固醇、大豆卵磷脂和PEG化的胆固醇；所述胆固醇与大豆卵磷脂的质量比可为1∶4；PEG化的胆固醇加入的质量百分比可为胆固醇和大豆卵磷脂混合物的1％；所述有机溶剂可采用氯仿等；所述旋转蒸发挥去有机溶剂的条件可为50rmp下旋转2h。在步骤4)中，所述高温水化脱膜的条件可为60℃下水化1h，高温水化脱膜的方法可采用旋转蒸发仪恒速100rpm；所述超声后均质或挤出的功率可为100W。本专利技术以PLGA为内核，以大豆卵磷脂、胆固醇和PEG化胆固醇为壁材，采用薄膜水化法制备包载YGLF纳脂体，并对纳脂体的形态结构及稳定性，体内降压情况进行了分析。附图说明图1为包载YGLF纳脂体粒径图。图2为YGLF纳脂体的Zeta电位图。图3为YGLF纳脂体的丁达尔效应图。图4为YGLF纳脂体的透射电镜图。图5为包载YGLF纳脂体的稳定性图。图6为YGLF纳脂体的体外释放图。图7为YGLF纳脂体的差示量热扫描图。图8为YGLF与阳性药卡托普利对比在SHR大鼠体内的药效图。图9为YGLF纳脂体的在SHR大鼠体内的药效图。具体实施方式以下实施例将结合附图对本专利技术作进一步的说明。1、包载YGLF纳脂体的制备采用乳化溶剂挥发法制备YF4-NPs复乳：取适量体积的YF4溶液作为内水相(W1)、适量浓度的PLGA的二氯甲烷/丙酮溶液作为油相(O)，将内水相快速加入至PLGA油相中，冰水浴下，细胞破碎仪探头超声，得到W1/O初乳；然后将W1/O初乳缓慢滴加入外水相溶液(W2)中，冰水浴下探头超声得到W1/O/W2复乳；37℃水浴条件下，减压旋蒸(75rpm)除尽有机溶剂，所得胶体溶液即为YF4-NPs。在YF4-NPs乳剂的基础上，采用薄膜水化-超声分散法对YF4-NPs进行脂质材料包衣，制得纳脂体(FA-YF4-LNPs)。首先薄膜法制备磷脂膜，然后用上述最优工艺制备的YF4-NPs胶体溶液对磷脂膜进行水化，最后用超声进行破碎分散，得到YF4纳脂体(YF4-LNPs)。具体操作如下：称取大豆卵磷脂、胆固醇(Chol)和PEG-Chol适量于250mL茄形瓶中，加入氯仿使材料充分溶解，混匀，37℃减压旋蒸成膜(50rpm，2h)，缓慢除尽有机溶剂，制得一层均匀的薄膜；然后加入3ml已制备好的YF4-NPs，60℃水化(100rpm)1h。水化完成后的样品在冰水浴条件下超声，超声3s停3s。所得胶体溶液即为YF4-LNPs。2、YGLF纳脂体包埋率的测定2.1、YGLF标准曲线的绘制用高效液相色谱法绘制YF4标准曲线，具体步骤如下：精密称取25.60mgYF4对照品，置于25mL容量瓶中，加入纯化水溶解并定容，即得浓度为1.10mg/mL的YF4储备液。YF4系列标准溶液的配制：精密量取YF4储备液0.01、0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分别置于10mL容量瓶中，用纯化水定容至10mL，制得浓度为1.01、25.05、50.25、100.50、203.00、300.50、400.00、501.00μg/mL的系列标准溶液，过0.22μm滤膜后按照如下方法进行测定，记录峰面积。以浓度为横坐标、峰面积为纵坐标，进行线性回归。YF4检测的HPLC色谱条件如下：色谱柱：(SymmetryC18色谱柱，250×4.6mm，4μm)；流动相：0.1％三氟乙酸水溶液：乙腈(70︰30，v/v)；流速：1mL/min；检测波长：210nm；柱温：30℃；进样量：20μL。2.2YGLF包埋率及载药量的测定采用超滤离心法(截留分子量为30000Da)操作分离未被包载的药物和纳脂体，测定YF4-LNPs的包封率。下清13000rpm离心10min，取离下来的200μL按照“2.2色谱条件”项下的方法进行测定，测定未被包载的YF4的量，根据下述公式计算FA-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种包载YGLF纳脂体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1)将YGLF溶解在氨水溶液中作为水相；油相为丙酮和二氯甲烷混合物，将水相放入油相中超声，在超声压力下水相通过超声，进入到油相中，得初乳液；2)将乳化剂与步骤1)中的初乳液混合，搅拌超声后形成乳状液，再搅拌后得乳白色复乳状液；3)将脂质膜材料溶于有机溶剂中，减压，旋转蒸发挥去有机溶剂，得薄膜；4)将步骤3)得到的薄膜与步骤2)得到的乳白色复乳状液混合，高温水化脱膜，超声后均质或挤出，得到包载YGLF纳脂体。

【技术特征摘要】
1.一种包载YGLF纳脂体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1)将YGLF溶解在氨水溶液中作为水相；油相为丙酮和二氯甲烷混合物，将水相放入油相中超声，在超声压力下水相通过超声，进入到油相中，得初乳液；2)将乳化剂与步骤1)中的初乳液混合，搅拌超声后形成乳状液，再搅拌后得乳白色复乳状液；3)将脂质膜材料溶于有机溶剂中，减压，旋转蒸发挥去有机溶剂，得薄膜；4)将步骤3)得到的薄膜与步骤2)得到的乳白色复乳状液混合，高温水化脱膜，超声后均质或挤出，得到包载YGLF纳脂体。2.如权利要求1所述一种包载YGLF纳脂体的制备方法，其特征在于在步骤1)中，所述将YGLF溶解在氨水溶液中作为水相，YGLF按体积百分比为氨水溶液的1.5％，氨水溶液的pH为13。3.如权利要求1所述一种包载YGLF纳脂体的制备方法，其特征在于在步骤1)中，所述油相中丙酮和二氯甲烷的体积比为1∶5。4.如权利要求1所述一种包载YGLF纳脂体的制备方法，其特征在于在步骤1)中，所述超声的时间为1.5min；所述初乳液为W/O/W型乳状液，在初乳液中初乳体积与水相的体积比为1∶3。5.如权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨剑，宋相容，赵胜楠，
申请(专利权)人：深圳职业技术学院，
类型：发明
国别省市：广东,44