一种温郁金优良种苗选育方法技术

本发明专利技术涉及一种温郁金优良种苗选育方法，包括以下步骤：（1）建立温郁金种质资源圃；（2）施加PGRP菌株；（3）种质特性评比；（4）采收；（5）复种；（6）优良种苗选择。本发明专利技术在引进温郁金种质种植过程中，通过施加当地温郁金种植地区所种植温郁金根系土壤中得到的PGRP菌株混合物，使种质资源圃土壤环境的特质放大，加速外地优质种质资源的驯化和观察试验，从而使更加适应当地的优质种质在植物特性和产品特性与不适应当地的优质种质之间差异更大，便于进行选育。

A Breeding Method of Excellent Seedlings of Tulip wenyujin

The present invention relates to a method for selecting and breeding excellent seeds and seedlings of Curcuma wenyujin, which includes the following steps: (1) establishing germplasm resource nursery of Curcuma wenyujin; (2) applying PGRP strains; (3) evaluating germplasm characteristics; (4) harvesting; (5) multiple cropping; (6) selecting good seeds and seedlings. In the process of introducing warm tulip germplasm, the PGRP strain mixture obtained from the root soil of warm tulip planted in the local warm tulip planting area is applied to enlarge the characteristics of soil environment in the germplasm resource nursery, accelerate the domestication and observation test of foreign high-quality germplasm resources, so as to make it more suitable for local high-quality Germplasm in plant characteristics and product characteristics and not suitable for local conditions. The difference of high quality germplasm is bigger, which is convenient for breeding.

【技术实现步骤摘要】
一种温郁金优良种苗选育方法
本专利技术涉及一种温郁金优良种苗选育方法。
技术介绍
温郁金(Curcumawenyujin)系姜科姜黄属植物，其块根、根茎可供药用，块根加工成的药材温郁金是浙江省著名道地药材“浙八味”之一。为浙江南部地区种植的一种姜科药用植物,野生种已罕见,以人工栽培为主，温郁金喜温暖湿润、阳光充足的气候，耐旱抗涝，但怕霜冻。适宜在土质疏松、排水良好、土层深厚的冲积土、砂壤土中生长。温郁金开花很少，种子多不充实，栽培上用种姜根茎繁殖。温郁金年生长周期约250天左右，一般4月上旬(清明前后)种植，12月中上旬收获。经研究发现，温郁金由于长期的无性繁殖及种源的自繁、自留，导致了植株的混杂、老化，无种子质量标准，未进行过优良品种选育研究，再加上连作现象十分普遍，导致种质退化、抗逆性差、植株病毒化严重，引起减产现象。植株间良莠不齐、品质变异较大，导致药材质量不稳定，严重影响了临床用药的有效性和安全性。外地引进优质种质资源是一种方法，但是如何确定外地优质种质资源是否适合当地生长，从而选育郁金优良种苗是一个难点。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有技术存在的缺点和不足，而提供一种温郁金优良种苗选育方法。本专利技术所采取的技术方案如下：一种温郁金优良种苗选育方法，包括以下步骤：（1）建立温郁金种质资源圃：搜集、引进温郁金种质材料，集中分区域种植于种质资源圃，插牌标记；（2）施加PGRP菌株：种植期间，每隔20-40天，施加温莪术特异性PGRP菌株混合物，所述温莪术特异性PGRP菌株是从当地温郁金种植地区所种植温郁金根系土壤中收集、筛选、培养、繁育得到；（3）种质特性评比：在当年11月1~5日，在温郁金种质资源圃中，针对不同种质个体和小群体进行形态特性评比，选择株高在70～120cm、叶片长×宽在51～60cm×16～22cm的植株，进行标记；（4）收获：在当年11月4-6日，将全株挖起，抖掉泥土，摘下块根，保留根须，计算霉败率、除去霉败品后的单株产量、平均单株产量、标准偏差；（5）复种：在第二年的3月下旬～4月中旬温度达到13℃以上时下种，采用穴栽，栽种前取出上年贮存的种茎，除去须根，每穴放入种茎2～4个，芽眼向上栽种，均匀摆放，放种时种茎与土壤密接，栽后覆盖细土，厚3～5厘米；（6）优良种苗选择：重复步骤（2）-（4），进行评比，选出连续两年株高在70～120cm、叶片长×宽在51～60cm×16～22cm的植株，再综合评估霉败率、除去霉败品后的单株产量、平均单株产量、标准偏差，得到优良种苗。步骤（2）中，PGRP（植物根际促生细菌）是指自由生活在土壤或附生于植物根际的一类可促进植物生长、防治病害、增加作物产量的有益菌类，一般具有固氮、解磷、释钾、产生植物激素和分泌抗生素等能力或至少具有其中之一能力的特性。PGPR对土壤中有害病原微生物与非寄生性根际有害微生物都有生防作用，可促进植物吸收利用矿物质营养，并可产生有益植物生长的代谢产物，从而促进植物的生长发育。温莪术特异性PGRP菌株混合物通过以下方法得到：a)采集当地温郁金种植地区温郁金根系土壤，置于液体培养基中，避光摇床培养，隔数天转接培养液至新鲜的液体培养基富集培养；b)将步骤a得到的富集培养液与温莪术凝集素粗品或温莪术凝集素纯品混合，摇床反应1-2h，在0-8℃、1000-2500r/min下离心5-10min，得到沉淀物；c)在沉淀物中加入含有200mm乳糖的缓冲溶液，摇床反应1-2h，在0-8℃、3000-4000r/min下离心15-30min，沉淀为温莪术特异性PGRP菌株混合物。所述的温莪术凝集素粗品通过以下方法得到：a)取新鲜的温莪术，切片，粉碎打浆，得到浆状原料，在0-8℃、8000-10000r/min下离心20-45min，弃上清液，得第一次沉淀物；b)在pH为5.5~6.5的缓冲溶液中加入1~3%的复合酶溶液，所述复合酶溶液为纤维素酶:果胶酶=2-3:1，与第一次沉淀物以体积比5-7:1混合，混合后在常温下，低速搅拌4-6h，然后在0-8℃、2000r/min下离心10-15min，取上清液，然后在0-8℃、8000-10000r/min下离心20-45min，弃上清液，得第二次沉淀物；c)在第二次沉淀物中按1:1-2的体积比加入预冷石油醚，在0-8℃下，低速搅拌10-30min，抽滤，按1:0.5-1的体积比加入预冷丙酮，静置1-2min，抽滤，晾干，得第三次沉淀物；d)在第三次沉淀物中按1:8-10的体积比加入PH为5.5-6.5的缓冲液，在0-8℃下，低速搅拌2-4h，在0-8℃、8000-10000r/min下离心20-45min，弃沉淀物，按1:0.1-0.3的体积比在上清液中加入饱和硫酸铵，在0-8℃下，低速搅拌1-2min，在0-8℃、2000-3000r/min下离心2-4min，弃沉淀物，按1：2.5-2.9的体积比在上清液中加入饱和硫酸铵，在0-8℃下，低速搅拌3-5min，在0-8℃、8000-10000r/min下离心25-35min，得到第四次沉淀物；e)将第四次沉淀物溶于水中，置于透析袋中进行透析至透析液中无硫酸根，冷冻干燥得到温莪术凝集素粗品；所得到的温莪术凝集素粗品与富集培养液以浓度0.1-0.2g/L混合。步骤（5）中，复种所用种茎为上年度株高在70～120cm、叶片长×宽在51～60cm×16～22cm之间的植株上采集的长度70～80mm一级二头、三头的根茎。本专利技术的有益效果如下：本专利技术在引进温郁金种质种植过程中，通过施加当地温郁金种植地区所种植温郁金根系土壤中得到的PGRP菌株混合物，使种质资源圃土壤环境的特质放大，加速外地优质种质资源的驯化和观察试验，从而使更加适应当地的优质种质在植物特性和产品特性与不适应当地的优质种质之间差异更大，便于进行选育。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，根据这些附图获得其他的附图仍属于本专利技术的范畴。图1为温郁金种质资源圃分布图。具体实施方式为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本专利技术作进一步地详细描述。实施例1温莪术凝集素粗品的制备：（1）取新鲜的温莪术10kg，切片，粉碎打浆，得到浆状原料，在4℃、10000r/min下离心45min，弃上清液，得第一次沉淀物；（2）在pH为5.5~6.5的磷酸盐缓冲溶液中加入1~3%的复合酶溶液，所述复合酶溶液为纤维素酶:果胶酶=3:1，与第一次沉淀物以体积比7:1混合，混合后在常温下，低速搅拌5.5h，然后在4℃、2000r/min下离心10min，取上清液，然后在4℃、10000r/min下离心45min，弃上清液，得第二次沉淀物；（3）在第二次沉淀物中按1:2的体积比加入预冷石油醚，在4℃下，低速搅拌20min，抽滤，按1:0.7的体积比加入预冷丙酮，静置1-2min，抽滤，晾干，得第三次沉淀物；（4）在第三次沉淀物中按1:8.7的体积比加入PH为5.5-6.5的磷酸盐缓冲液，在4℃下，低速搅本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种温郁金优良种苗选育方法，其特征在于，包括以下步骤：建立温郁金种质资源圃：搜集、引进温郁金种质材料，集中分区域种植于种质资源圃，插牌标记；施加PGRP菌株：种植期间，每隔20‑40天，施加温莪术特异性PGRP菌株混合物，所述温莪术特异性PGRP菌株是从当地温郁金种植地区所种植温郁金根系土壤中收集、筛选、培养、繁育得到；种质特性评比：在当年11月1~5日，在温郁金种质资源圃中，针对不同种质个体和小群体进行形态特性评比，选择株高在70～120cm、叶片长×宽在51～60cm×16～22cm的植株，计算百分比；采收：在当年11月4‑6日，将全株挖起，抖掉泥土，摘下块根，保留根须，计算霉败率、除去霉败品后的单株产量、平均单株产量、标准偏差；复种：在第二年的3月下旬～4月中旬温度达到13℃以上时下种，采用穴栽，栽种前取出上年贮存的种茎，除去须根，每穴放入种茎2～4个，芽眼向上栽种，均匀摆放，放种时种茎与土壤密接，栽后覆盖细土，厚3～5厘米；优良种苗选择：重复步骤（2）‑（4），进行评比，选出连续两年株高在70～120cm、叶片长×宽在51～60cm×16～22cm的植株，再综合评估霉败率、除去霉败品后的单株产量、平均单株产量、标准偏差，得到优良种苗。...

【技术特征摘要】
1.一种温郁金优良种苗选育方法，其特征在于，包括以下步骤：建立温郁金种质资源圃：搜集、引进温郁金种质材料，集中分区域种植于种质资源圃，插牌标记；施加PGRP菌株：种植期间，每隔20-40天，施加温莪术特异性PGRP菌株混合物，所述温莪术特异性PGRP菌株是从当地温郁金种植地区所种植温郁金根系土壤中收集、筛选、培养、繁育得到；种质特性评比：在当年11月1~5日，在温郁金种质资源圃中，针对不同种质个体和小群体进行形态特性评比，选择株高在70～120cm、叶片长×宽在51～60cm×16～22cm的植株，计算百分比；采收：在当年11月4-6日，将全株挖起，抖掉泥土，摘下块根，保留根须，计算霉败率、除去霉败品后的单株产量、平均单株产量、标准偏差；复种：在第二年的3月下旬～4月中旬温度达到13℃以上时下种，采用穴栽，栽种前取出上年贮存的种茎，除去须根，每穴放入种茎2～4个，芽眼向上栽种，均匀摆放，放种时种茎与土壤密接，栽后覆盖细土，厚3～5厘米；优良种苗选择：重复步骤（2）-（4），进行评比，选出连续两年株高在70～120cm、叶片长×宽在51～60cm×16～22cm的植株，再综合评估霉败率、除去霉败品后的单株产量、平均单株产量、标准偏差，得到优良种苗。2.根据权利要求1所述的温郁金优良种苗选育方法，其特征在于：步骤（2）中，温莪术特异性PGRP菌株混合物通过以下方法得到：采集当地温郁金种植地区温郁金根系土壤，置于液体培养基中，避光摇床培养，隔数天转接培养液至新鲜的液体培养基富集培养；将步骤a得到的富集培养液与温莪术凝集素粗品或温莪术凝集素纯品混合，摇床反应1-2h，在0-8℃、1000-2500r/min下离心5-10min，得到沉淀物；在沉淀物中加入含有200mm乳糖的缓冲溶液，摇床反应1-2h，在0-8℃、3000-4000r/min下离心15-30min，沉淀为温莪术特异性PGRP菌株混合物。3.根据权利要求2...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜程曦，袁玮，赵祺，任仙樱，鲍康德，秦宇雯，李帆，张金华，郭月琴，罗莎，洪涛，
申请(专利权)人：温州大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33