本发明专利技术涉及兽医病毒分子生物学技术和免疫学技术领域，公开了一株重组基因Ⅷ型新城疫病毒弱毒株NDV‑rHR09‑LaSota‑HN。所述的弱毒株NDV‑rHR09‑LaSota‑HN的保藏号为CCTCC NO:V201830。研究表明，NDV‑rHR09‑LaSota‑HN毒株毒力弱，MDT大于120h，ICPI值为0.026，免疫试验证明对新城疫强毒株有良好的免疫保护效果，经与常用疫苗株LaSota对照，以NDV‑rHR09‑LaSota‑HN株接种1日龄SPF鸡，3周后鸡的抗体水平、对流行强毒株攻毒的保护效果等优于或不低于对照组。
A New Castle Disease Virus Attenuated Strain with Recombinant Gene VIII
The present invention relates to the field of molecular biology and immunology of veterinary viruses, and discloses a recombinant Newcastle disease virus attenuated strain NDV_rHR09 LaSota_HN. The storage number of the attenuated strain NDV_rHR09_LaSota_HN is CCTCC NO:V201830. The results showed that NDV rHR09 LaSota HN strain had weak virulence, MDT was more than 120 hours, ICPI value was 0.026. The immune test proved that NDV rHR09 LaSota HN strain had good immune protection effect against Newcastle disease virus strain. Compared with LaSota strain, one-day-old SPF chickens inoculated with NDV rHR09 LaSota HN strain had better or less immune protection effect than the control strain after 3 weeks. Group.
【技术实现步骤摘要】
一种重组基因VIII型新城疫病毒弱毒株
本专利技术涉及兽医病毒分子生物学技术和免疫学
，利用反向遗传操作平台对筛选获得的基因Ⅷ型毒株在F基因突变的基础上再进行HN基因片段的替换，获得了一株重组的基因VIII型新城疫病毒弱毒株。
技术介绍
新城疫病毒(Newcastlediseasevirus，NDV)对世界家禽养殖业危害巨大，它可以感染多种禽类，常导致养禽业产生巨大的经济损失[Alexander,D.J.2001.GordonMemorialLecture.Newcastledisease.BrPoultSci42:5-22.]。该病毒在分类学上属于副粘病毒科、副粘病毒亚科、禽腮腺炎病毒属(Avulavirus)的成员[Mayo,M.A.2002.Virustaxonomy-Houston2002.ArchVirol147:1071-1076.]。新城疫病毒有囊膜，基因组为单股、负链、不分节段的RNA病毒，基因组结构模式为：3′-NP-P-M-F-HN-L-5′，依次编码6种结构蛋白：核衣壳蛋白(NP)、磷蛋白(P)、基质蛋白(M)、融合蛋白(F)、血凝素-神经氨酸酶蛋白(HN)和大分子蛋白(L)即核蛋白(NP)，P，M，F，HN和L蛋白。根据对鸡的毒力，NDV毒株可以为强毒(Velogenic)、中等毒力(Mesogenic)和弱毒(Lentogen)三种类型。已有大量的研究已经阐明了病毒致病性的分子决定因素[HuangZ,KrishnamurthyS,PandaA,SamalSK.NewcastlediseasevirusVproteinisassociatedwithviralpathogenesisandfunctionsasanalphainterferonantagonist.Journalofvirology2003Aug；77(16):8676-85.]，其中大部分是关于F和HN蛋白对病毒毒力的作用，特别是F蛋白裂解位点处的氨基酸序列是病毒毒力的主要决定因素[SealBS.Nucleotideandpredictedaminoacidsequenceanalysisofthefusionproteinandhemagglutinin-neuraminidaseproteingenesamongNewcastlediseasevirusisolates.PhylogeneticrelationshipsamongtheParamyxovirinaebasedonattachmentglycoproteinsequences.FunctIntegrGenomics2004Oct；4(4):246-57.]。NDV毒力差异的分子基础主要决定于F0蛋白的蛋白酶裂解位点的氨基酸序列，强毒的裂解位点两端有成对的碱性氨基酸序列，其模式基序为112R/K-R-Q-K/R-R-F117；弱毒的裂解位点则缺少聚碱性氨基酸序列，其模式基序为112-E/G-R/K-Q-E/G-R-L117。HN蛋白也是NDV毒力的重要决定因素。已有的研究证明，HN蛋白氨基酸序列的长短与毒力有关，利用反向遗传操作技术，Roemer-Oberdoerfer等已证实HN蛋白的不同长度与NDV的毒力和致病性有着非常重要的关系(Roemer-OberdoerferA,WernerO,VeitsJ,etal.ContributionofthelengthoftheHNproteinandthesequenceoftheFproteincleavagesitetoNewcastlediseaseviruspathogenicity.JGenVirol.2003,84(11):3121-3129.)。HN基因编码区的长度有多种类型，所编码的HN蛋白长度有616、585、581、580、578、577、572、571个氨基酸等多种。含有616个氨基酸的HN前体蛋白只存在于无毒力的毒株中，如D26、Ulster和Queensland等毒株，在强毒株中未发现，而含有571个氨基酸的HN蛋白只存在于强毒株中，其它长度的HN蛋白在强弱毒株中均存在。自新城疫(ND)1926年被发现以来，至今已发生了多次大的流行，而每一次流行都有不同基因型的毒株出现。90年代之后出现了新城疫的第4次大流行，给我国及世界养禽业造成了巨大的经济损失，这次大流行的新城疫病毒以基因VII型为主，但V、VI和VIII等其他基因型病毒也有存在。近年来有专家提出，在亚洲和中东地区多个国家新出现的基因VIIh和VIIi以及VIIIa和VIIIb亚型新城疫病毒可能会导致全球第5次新城疫大流行(MillerPJ，HaddasR，SimanovL，etal.Identificationofnewsub-genotypesofvirulentNewcastlediseaseviruswithpotentialpanzooticfeatures.InfectGenetEvol.2015，29：216-29.)。在控制疫病的过程中，使用疫苗是最有效最经济的方法，新城疫的疫苗已使用了几十年，由于ND疫苗的广泛使用，此病已基本上得到了有效的控制，但临床上非典型ND的发生仍然比较普遍，ND依然是威胁养禽业的主要疾病之一，免疫失败的原因除免疫程序不合理、免疫抑制病的存在之外，疫苗毒株与流行毒株的基因型和抗原性不匹配可能是主要原因之一，这说明常规疫苗对于NDV强毒的攻击并不能提供理想的保护。从我国近年来ND流行特点来看，临床上所分离到的NDV毒株大多数属于基因VII型[Liu,X.F.,H.Q.Wan,X.X.Ni,Y.T.Wu,andW.B.Liu.PathotypicalandgenotypicalcharacterizationofstrainofNewcastlediseaseisolatedfromoutbreaksinchickenandgooseflocksinsomeregionsofChinaduring1985-2001.ArchivesofVirology,2003,148(7):1387-1403.]，而常规的ND疫苗株的基因型主要为I和II型(如V4、LaSota等)，在遗传距离上常规ND疫苗株与NDV流行株相差较远，这使强毒感染时家禽在早期出现大量排毒现象，导致非典型ND的发生。目前，基因VIII型毒株在非洲、南亚和东南亚等许多国家和地区仍有流行，我国80年以来也有分离发现，而使用的疫苗从已有的报道看仍是基因I、II弱毒株，并没有与VIII型相匹配的疫苗毒株，因此创制NDV基因VIII型弱毒疫苗株具有重要经济价值。
技术实现思路
本专利技术的目的在于专利技术一种低毒力的基因Ⅷ型新城疫病毒弱毒株，为未来提供一种基因VIII型弱毒活疫苗，也即提供一种与流行NDV基因VIII型相匹配的疫苗候选株。本专利技术提供的重组基因Ⅷ型新城疫病毒弱毒株，是新城疫病毒NDV-rHR09-LaSota-HN，它的保藏号为CCTCCNO：V201830。本专利技术还公开了所述重组基因Ⅷ型新城疫病毒弱毒株NDV-rHR09-LaSota-HN的全基因组序列，如SEQIDNo.1所示。本专利技术中的弱毒疫苗候选株N本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种重组基因Ⅷ型新城疫病毒弱毒株，是新城疫病毒NDV‑rHR09‑LaSota‑HN，它的保藏号为CCTCC NO：V201830。
【技术特征摘要】
1.一种重组基因Ⅷ型新城疫病毒弱毒株，是新城疫病毒NDV-rHR09-LaSota-HN，它的保藏号为CCTCCNO：V20183...
【专利技术属性】
技术研发人员：曹永忠，张小荣，阮宝阳，吴艳涛，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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