土鳖干粉酶解的纯粉、其制备及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种土鳖干粉酶解的纯粉，公开了纯粉的制备方法，公开了纯化中有意义的馏分的总离子流谱，公开了与总离子流谱对应的纯粉的HPLC‑FT‑ICR‑MS谱，公开了与HPLC‑FT‑ICR‑MS谱对应的83种多肽序列，公开了纯粉在小鼠碳廓清模型上的免疫增强作用，进一步公开了健康小鼠对纯粉的耐受性。因而本发明专利技术公开了这种土鳖干粉酶解的纯粉在制备免疫增强剂中的应用。

Pure powder, preparation and application of woodlouse dry powder enzymolysis

The invention discloses a pure powder for enzymatic hydrolysis of woodlouse dry powder, discloses a preparation method of pure powder, discloses a total ion flow spectrum of a meaningful fraction in purification, discloses a HPLC FT ICR MS spectrum of pure powder corresponding to the total ion flow spectrum, discloses 83 kinds of polypeptide sequences corresponding to HPLC FT FT ICR MS spectrum, and discloses the immune enhancement effect of pure powder on mouse carbon clearance model. The tolerance of healthy mice to pure powder was further disclosed. Therefore, the invention discloses the application of the pure powder of woodlouse dry powder enzymolysis in the preparation of immune enhancers.

【技术实现步骤摘要】
土鳖干粉酶解的纯粉、其制备及应用
本专利技术涉及一种土鳖干粉酶解的纯粉，涉及纯粉的制备方法，涉及纯化中有意义的馏分的总离子流谱，涉及与总离子流谱对应的纯粉的HPLC-FT-ICR-MS谱，涉及与HPLC-FT-ICR-MS谱对应的83种多肽序列，涉及纯粉在小鼠碳廓清模型上的免疫增强作用，进一步涉及健康小鼠对纯粉的耐受性。因而本专利技术公开了这种土鳖干粉酶解的纯粉在制备免疫增强剂中的应用。本专利技术属于生物医药领域。
技术介绍
免疫功能低下可造成各种后果，例如诱发感染性疾病(各种流行性感冒)和皮肤病(尖锐湿疣、扁平疣、银屑病、生殖器疱疹、过敏性紫癜和慢性特发性血小板减少性紫癜)。各种肿瘤患者(肺癌、肝癌、卵巢癌、肾癌、乳腺癌、宫颈癌、骨肉癌、消化系统肿瘤和血液系统肿瘤)患者都面临免疫功能低下而容易继发感染性疾病的境况。虽然临床有多种非特异性免疫增强剂(卡介苗、核酪注射液、左旋咪唑、聚肌胞、胸腺素、胸腺五肽和胎盘脂多糖)及多种被动性免疫增强剂(丙种球蛋白或胎盘球蛋白注射剂、干扰素、转移因子和新鲜血浆)，但是这些免疫增强剂因各自的副作用或禁忌症而被局限。寻找新免疫增强剂一直是新药研究的兴趣之一。用人工胃液酶解药用植物或者药用动物并从中寻找免疫增强组分，是专利技术人的特殊兴趣。经过近十年探索专利技术人发现，土鳖及土鳖干粉先用人工胃液酶解，再用SephadexG25柱层析分离，根据总离子流谱收集馏分，收集的馏分经冷冻干燥之后制备的酶解的纯粉具有优秀的免疫增强活性。根据HPLC-FT-ICR-MS谱专利技术人确认了酶解的纯粉中含的83种多肽序列(其中6种为二肽，23种为三肽，20种为四肽，24种为五肽，7种为六肽，3种为七肽)。土鳖及土鳖干粉在我国传统医学中一直用于治疗带状疱疹。带状疱疹患者每天口服一次土鳖或土鳖干粉，每次剂量为10g左右，需连续七天。土鳖及土鳖干粉特有的腥臭气味使患者难以接受这样大的剂量。依据土鳖及土鳖干粉治疗带状疱疹患者的良好镇痛效果，专利技术人曾经公开土鳖及土鳖干粉的水提物及经人工胃液酶解得到的组分对带状疱疹及引起的疼痛具有良好的治疗作用，专利技术人还公开土鳖及土鳖干粉的水提物及经人工胃液酶解组分中含的九种多肽(其中1种为九肽，1种为十肽，1种为十一肽，1种为十二肽，3种为十三肽，2种为十五肽)。它们的序列如下：1)Tyr-Gly-Val-Pro-Pro-Asn-Pro-Leu(Ile)-Ser-Thr-Ser；2)Asn-Ser-Tyr-Cys-Met-Asn-Met-Met-Cys；3)Met-Ser-Met-Met-Thr-His-Asn-Glu-Ala-Asp；4)Ala-Gln(Lys)-Phe-Pro-Ala-Pro-Gly-Phe-Gln(Lys)-Thr-Ser-His-Met-Thr-Thr；5)Phe-Thr-Ser-Asp-His-Ser-Tyr-Asn-Phe-Leu(Ile)-Val-Gln(Lys)-Gln(Lys)；6)Pro-Gly-Ala-Gln(Lys)-Met-Gly-Pro-Thr-Ser-Ala-Val-Gly-Gln(Lys)-Ala-Pro；7)His-Gly-Val-Met-Arg-His-Met-Asn-Phe-Ala-Ala-Tyr-Met；8)Ser-Cys-Leu(Ile)-Ser-Pro-Val-Ser-Leu(Ile)-Thr-Arg-Pro-Trp；9)Thr-Thr-Cys-Asn-Ser-Pro-Met-Leu(Ile)-Glu-Asp-Phe-Ala-Pro。由于带状疱疹及引起的疼痛与免疫增强无关，又由于治疗带状疱疹及引起的疼痛的组分中的9种九肽-十五肽的序列与免疫增强组分中的83种二肽-七肽的序列无关，还由于收集治疗带状疱疹及引起的疼痛的馏分依据的技术与收集免疫增强馏分依据的技术无关，所以专利技术人11年前公开的技术与本专利技术的技术效果及创造性无任何关联性。专利技术人认识到本案披露了一项具有创造性的发现。根据这个认识，专利技术人提出了本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一个内容是提供具有免疫增强作用的土鳖干粉酶解的纯粉，其特征在于它含Ser-Ala-Arg-Gln-Pro-Ala-Val，Ala-Thr-Asp-Gln-Pro-Ala-Val和Ala-Ala-Val-Met-Asp-Pro-Ala3种七肽；Gla-Ala-Glu-Ile-Thr-His，Ala-Ala-Pro-Val-Val-Ala，Ala-Pro-Gly-Val-Val-Ala，Ser-Gly-Gly-Ser-Ala-Val，Ser-Gly-Gly-Ala-Val-Ala，Ala-Val-Pro-Pro-Val-Ala和Ala-Ala-Glu-Met-Gly-Ile7种六肽；Asp-Pro-Thr-Asp-Met，Ala-Val-Met-Gly-Val，Glu-Ile-Ile-Thr-His，Ala-Val-Ala-Pro-Gln，Ala-Pro-Ala-Val-Ala，Pro-Val-Ala-Ala-Ala，Pro-Ala-Ala-Ala-Val，Gly-Ala-Pro-Ala-Phe，Pro-Gly-Pro-Ala-Ser，Gly-Lys-Pro-Val-Ser，Cys-Gly-Ala-His-Pro，Gly-Ala-Tyr-Ala-Ser，Ala-Pro-Asn-Ile-Ala，Ile-Ala-Ser-Val-Val，Ala-Pro-Gly-Thr-Tyr，Ala-Ala-Thr-Ala-Asp，Pro-Asn-Asp-Val-Ala，Pro-Asn-Asp-Ala-Val，His-Val-Val-Ala-Val，Ala-Ala-Phe-Gly-Ile，His-Thr-Pro-Val-Ala，Asn-His-Ile-Ala-Ala，Asn-Ala-His-Asp-Gly和Ile-Ala-Glu-Glu-Ala24种五肽；Ala-Pro-Glu-Thr，Ala-Cys-Tyr-Thr，Gly-Ala-Cys-Thr，Thr-Ala-Val-Ala，Ala-Pro-Ala-Val，Gly-Val-Gly-Val，Gly-Gly-Ser-Ile，Ala-Ala-Ala-Asn，Pro-Val-Gln-Ala，Glu-Gly-Ala-Pro，Thr-Ala-Met-Tyr，Thr-Asp-Glu-Ala，Asp-Cys-Val-Ala，Ala-Ala-Pro-Ala，Gly-Ala-Thr-Arg，Asp-Glu-Gln-Ile，Pro-Val-Ala-Met，Ile-Asp-Ala-Val，Val-Pro-Ala-Tyr和Val-Pro-Gly-Val20种四肽；Gly-Phe-Gly，Thr-Pro-Cys，Thr-Pro-Asp，Ala-Asp-Thr，Asn-Gly-Gly，Cys-Gln-Val，Ile-Asp-Thr，Pro-Gly-Ala，Gln-Ile-Ala，Pro-Ala-Asp，Pro-Thr-Thr，Ile-Gly-Ala，Asn-Ile-Ala，Gln-Val-Ala，Ala-Asn-Tyr，Arg-Cys-Ile，Thr-Val-Asp，Ile-His-Asp，Al本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种土鳖干粉酶解的纯粉，其特征在于它含Ser‑Ala‑Arg‑Gln‑Pro‑Ala‑Val，Ala‑Thr‑Asp‑Gln‑Pro‑Ala‑Val和Ala‑Ala‑Val‑Met‑Asp‑Pro‑Ala 3种七肽序列，以及Gla‑Ala‑Glu‑Ile‑Thr‑His，Ala‑Ala‑Pro‑Val‑Val‑Ala，Ala‑Pro‑Gly‑Val‑Val‑Ala，Ser‑Gly‑Gly‑Ser‑Ala‑Val，Ser‑Gly‑Gly‑Ala‑Val‑Ala，Ala‑Val‑Pro‑Pro‑Val‑Ala和Ala‑Ala‑Glu‑Met‑Gly‑Ile 7种为六肽。

【技术特征摘要】
1.一种土鳖干粉酶解的纯粉，其特征在于它含Ser-Ala-Arg-Gln-Pro-Ala-Val，Ala-Thr-Asp-Gln-Pro-Ala-Val和Ala-Ala-Val-Met-Asp-Pro-Ala3种七肽序列，以及Gla-Ala-Glu-Ile-Thr-His，Ala-Ala-Pro-Val-Val-Ala，Ala-Pro-Gly-Val-Val-Ala，Ser-Gly-Gly-Ser-Ala-Val，Ser-Gly-Gly-Ala-Val-Ala，Ala-Val-Pro-Pro-Val-Ala和Ala-Ala-Glu-Met-Gly-Ile7种为六肽。2.权利要求1的土鳖干粉酶解纯粉，其特征在于它还含Asp-Pro-Thr-Asp-Met，Ala-Val-Met-Gly-Val，Glu-Ile-Ile-Thr-His，Ala-Val-Ala-Pro-Gln，Ala-Pro-Ala-Val-Ala，Pro-Val-Ala-Ala-Ala，Pro-Ala-Ala-Ala-Val，Gly-Ala-Pro-Ala-Phe，Pro-Gly-Pro-Ala-Ser，Gly-Lys-Pro-Val-Ser，Cys-Gly-Ala-His-Pro，Gly-Ala-Tyr-Ala-Ser，Ala-Pro-Asn-Ile-Ala，Ile-Ala-Ser-Val-Val，Ala-Pro-Gly-Thr-Tyr，Ala-Ala-Thr-Ala-Asp，Pro-Asn-Asp-Val-Ala，Pro-Asn-Asp-Ala-Val，His-Val-Val-Ala-Val，Ala-Ala-Phe-Gly-Ile，His-Thr-Pro-Val-Ala，Asn-His-Ile-Ala-Ala，Asn-Ala-His-Asp-Gly和Ile-Ala-Glu-Glu-Ala24种为五肽。3.权利要求2的土鳖干粉酶解纯粉，其特征在于它还含Ala-Pro-Glu-Thr，Ala-Cys-Tyr-Thr，Gly-Ala-Cys-Thr，Thr-Ala-Val-Ala，Ala-Pro-Ala-Va...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭师奇，赵明，吴国锋，
申请(专利权)人：浙江医药股份有限公司新昌制药厂，
类型：发明
国别省市：浙江,33