The invention discloses a method for constructing an in vitro simulation model of Prevo intestinal type. The fresh feces of healthy volunteers of Prevo intestinal type are diluted into fecal suspension by PBS using an automatic external simulation model device of intestinal bacteria. The fecal suspension is then inoculated into an improved VI culture medium at 37 C, pH 5.2 5.8, magnetic stirring speed 150 rpm and supplemented with a culture medium at 330 ml/12 h speed. Under the conditions of fermentation and culture, the in vitro simulation model of Prevo intestinal type is obtained; the important nutritional conditions for in vitro simulation of Prevo intestinal type are found, and the physical and chemical conditions in the continuous fermentation process are explored, which can increase the proportion of Prevo bacteria in fermentation broth to 40%-80%. At the same time, the correlation coefficient between microflora in fermentation broth and original fecal samples reaches about 80%. Thus, Prevo intestinal type can be simulated stably in vitro.
【技术实现步骤摘要】
一种普雷沃肠型体外模拟模型的构建方法(一)
本专利技术涉及一种体外模拟人肠道普雷沃肠型的方法,特别涉及一种普雷沃肠型体外模拟模型的构建方法。(二)
技术介绍
人体内含有数以万计的微生物群,定居在肠道内的微生物群落被视为人体的一个额外的器官,它们能产生一些人体必需的重要因子,也可以和宿主共同形成一条特殊的代谢通路。小肠相当于一种功能强大的厌氧生物反应器,微生物与肠上皮细胞对发酵底物的利用以及它们之间物质、信息的交流,都在这个反应器中有条不紊的进行。微生物通过发酵膳食中难以消化的碳水化合物来获取能量,也可以代谢产生氨基酸、维他命等宿主必须的营养元素,还可以通过如还原反应、水解作用、功能基团转移等作用参与药物的代谢过程等。但是当肠道菌群发生紊乱,则会引起一些肠道疾病,特别是肠易激综合征、炎症性肠病,甚至是结、直肠恶性肿瘤等肠道疾病。肠道内不同群落的组成呈现高的动态性,且个体间肠道微生物按照一定的偏好聚集,因此肠道微生物可以被区分为平衡和稳定的群落组成。仔细调查了门、属、基因、通路水平和一些大量共生菌在肠道微生物组成结构上的不同后,从系统发育树和功能上确定了肠道微生物的3种基本肠型:拟杆肠型、普雷沃肠型和瘤胃球肠型。拟杆肠型的驱动可能是通过发酵多糖和蛋白质获得能量,因为与此肠型相关的菌属有一个非常广的糖降解能力,并且基因编码的酶也参与到了这些底物的降解中,如半乳糖苷酶、己糖苷酶和蛋白酶等,这些酶伴随着糖酵解和戊糖磷酸途径共同强化了这种肠型。普雷沃肠型个体的肠道微生物和脱硫弧菌属一同出现,它能够协同降解在肠道粘液层中的黏蛋白,普氏菌是众所周知的黏蛋白降解菌,而脱硫弧 ...
【技术保护点】
1.一种普雷沃肠型体外模拟模型的构建方法,其特征在于所述方法为:利用全自动肠道菌群体外模拟模型装置,将普雷沃肠型健康志愿者的新鲜粪便用PBS稀释成粪便悬液,然后将粪便悬液接种至改良VI培养基中,在37℃、pH5.2‑5.8、150rpm、以330ml/12h速度补加培养基的条件下发酵培养,获得普雷沃肠型体外模拟模型;所述改良VI培养基组成为:低聚异麦芽糖5‑20g/L、胰蛋白胨3g/L、蛋白胨3g/L、酵母提取物4.5g/L、粘液素0.5g/L、3号胆盐0.4g/L、L‑半胱氨酸盐酸盐0.8g/L、血红素0.05g/L、1mL/L吐温80、NaCl 4.5g/L、KCl 2.5g/L、MgCl2·6H2O 4.5g/L、CaCl2·6H2O 0.2g/L、KH2PO4 0.4g/L,微量元素2ml/L,溶剂为蒸馏水,pH值为6.3~6.8;微量元素的浓度为:MgSO4·7H2O 3.0g/L,CaCl2·2H2O 0.1g/L,MnCl2·4H2O 0.32g/L,FeSO4·7H2O 0.1g/L,CoSO4·7H2O 0.18g/L,ZnSO4·7H2O 0.18g/L,CuSO4 ...
【技术特征摘要】
1.一种普雷沃肠型体外模拟模型的构建方法,其特征在于所述方法为:利用全自动肠道菌群体外模拟模型装置,将普雷沃肠型健康志愿者的新鲜粪便用PBS稀释成粪便悬液,然后将粪便悬液接种至改良VI培养基中,在37℃、pH5.2-5.8、150rpm、以330ml/12h速度补加培养基的条件下发酵培养,获得普雷沃肠型体外模拟模型;所述改良VI培养基组成为:低聚异麦芽糖5-20g/L、胰蛋白胨3g/L、蛋白胨3g/L、酵母提取物4.5g/L、粘液素0.5g/L、3号胆盐0.4g/L、L-半胱氨酸盐酸盐0.8g/L、血红素0.05g/L、1mL/L吐温80、NaCl4.5g/L、KCl2.5g/L、MgCl2·6H2O4.5g/L、CaCl2·6H2O0.2g/L、KH2PO40.4g/L,微量元素2ml/L,溶剂为蒸馏水,pH值为6.3~6.8;微量元素的浓...
【专利技术属性】
技术研发人员:陈军奎,王欣,刘伟,朱立颖,皮雄娥,费笛波,李正鹏,杨云生,
申请(专利权)人:浙江省农业科学院,
类型:发明
国别省市:浙江,33
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