一株酿酒酵母及其与产酯酵母共培养提高传统发酵食品品质的方法技术

本发明专利技术涉及一株高产乙醇的酿酒酵母YF1914菌株及其与一株高产乙酸乙酯的异常威克汉姆酵母YF1503菌株的共培养方法与应用，酿酒酵母YF1914已于2017年10月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏号为CGMCC No.14827；酿酒酵母YF1914菌株的26S rDNA D1/D2序列与其它多株酿酒酵母的26S rDNA D1/D2序列相似性较高；在高粱酶解液培养基中，两酵母菌株共培养有利于提高乙酸乙酯含量；本发明专利技术所涉及的双菌共培养方法可应用于对乙酸乙酯有需求的白酒、黄酒、酱油等酿造工业中。

A Saccharomyces cerevisiae and its co-culture with ester-producing yeast to improve the quality of traditional fermented food

The present invention relates to a strain of Saccharomyces cerevisiae YF1914 with high ethanol production and its co-culture method and application with an abnormal strain of Wickham yeast YF1503 with high ethyl acetate production. Saccharomyces cerevisiae YF1914 has been preserved in the General Microbial Center of China Microbial Species Preservation and Management Commission on October 20, 2017, and its storage number is CGMCC No. 14827; and the 26S rDNA of Saccharomyces cerevisiae YF1914 strain is The D1/D2 sequence has high similarity with the 26S rDNA D1/D2 sequence of several other Saccharomyces cerevisiae strains; in Sorghum enzymatic hydrolysate medium, co-culture of two yeast strains is beneficial to improving the content of ethyl acetate; the method of co-culture of two yeasts can be applied to liquor, yellow wine, soy sauce and other brewing industries that have demand for ethyl acetate.

【技术实现步骤摘要】
一株酿酒酵母及其与产酯酵母共培养提高传统发酵食品品质的方法
本专利技术属于微生物
，具体地说涉及一株新分离高产乙醇的酿酒酵母菌株及其与产酯酵母共培养的培养方法与应用。
技术介绍
乙酸乙酯对传统酿造食品品质方面具有重要的影响，其含量是决定白酒、黄酒和酱油等传统发酵食品品质好坏的重要因素。研究表明，在这些传统发酵食品中，乙酸乙酯主要来源于微生物发酵，可见，充分利用高产乙酸乙酯的微生物的发酵作用对于提升白酒、黄酒和酱油等传统发酵食品的品质具有预见的可观效果。通过前期研究发现，在这些产乙酸乙酯微生物中，产酯酵母是传统发酵食品中酯类物质主要产生菌株。从白酒、黄酒和酱油等酿造体系或环境中获得能高产乙酸乙酯的功能微生物，并将其强化反补应用到酿造体系中，有利于提高白酒、黄酒和酱油等传统酿造中乙酸乙酯含量，对于提升这些传统酿造食品品质具有重要意义。前期，已获得一株高产乙酸乙酯的异常威克汉姆酵母YF1503，该菌株所产乙酸乙酯含量能够达到17.35g/L，属于目前已报道产乙酸乙酯最高菌株（专利名称为：一株高产乙酸乙酯异常威克汉姆酵母及其培养方法与应用，专利号为：CN2017080700675400）。但该菌株需要在有合适浓度的乙醇前体条件下，才能获得高含量的乙酸乙酯，换言之，在没有乙醇前体条件下，该酵母所产乙酸乙酯含量较低，这在实际生产中会降低其应用效果。本专利正是基于之前方法存在的不足，通过共培养体系解决产酯酵母所缺少的乙醇前体物质，从而利用共发酵方式促使产酯酵母即使在无人为添加乙醇前体的条件下也能达到高产乙酸乙酯的目的。事实上，我国白酒、黄酒和酱油等多数传统发酵食品酿造过程中，大多是多种微生物共同发酵。在这些食品酿造过程中存在产生乙醇的酿酒酵母，通过筛选获得一株高产乙醇的酿酒酵母，利用该酵母协同产乙酸乙酯的异常威克汉姆酵母共培养即有可能提高后者产乙酸乙酯的水平，从而为应用于白酒、黄酒和酱油等传统发酵食品中而提升这些食品品质奠定基础，这一问题的解决具有重要的现实意义和应用价值。
技术实现思路
针对利用功能微生物提高白酒、黄酒和酱油等传统酿造食品中乙酸乙酯含量，提升其品质的实际应用，本专利技术目的在于提供一种从白酒大曲中新分离的高产乙醇的菌株，命名为YF1914，并提供YF1914协同高产乙酸乙酯的异常威克汉姆酵母YF1503共培养产乙酸乙酯的培养方法与应用。本专利技术涉及的酵母是通过梯度稀释法结合平板涂布法从白酒大曲中筛选获得，为酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae），该菌株已于申请日前保藏于位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNo.14827。上述所述菌株YF1914菌落特征和生化特性如下：该菌株在固体WL培养基上菌落呈乳白色，表面光滑，边缘规则，中央突起，湿润易挑起；细胞为椭圆形，出芽生殖；所述的酿酒酵母YF1914主要用于微生物发酵制备乙醇，在乙醇发酵培养基中培养3d，乙醇产量达到68g/L，可以作为协同产酯酵母YF1503共同提高白酒、黄酒和酱油等传统发酵食品中乙酸乙酯含量的功能微生物菌株应用到实际生产中。上述酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）YF1914菌株的26SrDNAD1/D2序列与其它多株酿酒酵母的26SrDNAD1/D2序列有99%的相似性。上述酿酒酵母菌株YF1914协同异常威克汉姆酵母YF1503共培养在提高白酒、黄酒和酱油等传统酿造食品中乙酸乙酯含量的潜在应用。上述应用，具体方法如下：（1）从斜面上各挑取1环酿酒酵母菌株YF1914和异常威克汉姆酵母YF1503分别接入液体种子培养基中，在30oC、180r/min条件下，活化12h，获得两者的种子活化液；（2）将（1）获得的酿酒酵母YF1914和异常威克汉姆酵母YF1503种子液分别按照合适的接种比例以及合适的接种量和接种方式接种于高粱酶解液培养基中，采用合理的培养方式于合适的温度下进行液体培养适当的时间；（3）将（2）中所获得的产香发酵液采用高效液相方法对其含量进行检测。根据本专利技术优选的，上述所述方法步骤（2）中，活化好的酿酒酵母YF1914和异常威克汉姆酵母YF1503接种比例按照1:1，接种量均按照1×106CFU/mL，采用先接种YF1503于28°C静置培养24h，然后接种YF1914于28°C摇动培养60h，转速为180r/min时所产的乙酸乙酯含量高。本专利技术的有益效果：（1）本专利技术筛选出的菌株酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）YF1914来源于白酒酿造环境中，具有乙醇产量高的特点，经检测，该菌株乙醇产量可达到68g/L；（2）本专利技术通过对酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）YF1914和异常威克汉姆酵母（Wickerhamomycesanomalus）YF1503共培养发酵特性的研究，优化了双菌共培养的培养条件，提高了双菌共培养发酵乙酸乙酯的产量。（3）本专利技术中的双菌共培养方法有利于其在白酒、黄酒和酱油等传统酿造食品中的应用。附图说明图1是酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）YF1914菌株在WL培养基上的菌落形态照片；图2是酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）YF1914菌株的细胞形态照片（10×100）；图3是酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）YF1914菌株系统进化发育树；图4是高粱酶解液培养基中，酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）YF1914和异常威克汉姆酵母（Wickerhamomycesanomalus）YF1503菌株以不同接种比例培养产乙酸乙酯情况；图5是高粱酶解液培养基中，酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）YF1914和异常威克汉姆酵母（Wickerhamomycesanomalus）YF1503菌株以不同接种量培养产乙酸乙酯情况；图6是高粱酶解液培养基中，酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）YF1914和异常威克汉姆酵母（Wickerhamomycesanomalus）YF1503菌株以不同培养方法培养产乙酸乙酯情况；图7是高粱酶解液培养基中，酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）YF1914和异常威克汉姆酵母（Wickerhamomycesanomalus）YF1503菌株以不同的静置温度培养产乙酸乙酯情况；图8是高粱酶解液培养基中，酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）YF1914和异常威克汉姆酵母（Wickerhamomycesanomalus）YF1503菌株以不同的摇动温度培养产乙酸乙酯情况；图9是高粱酶解液培养基中，酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）YF1914和异常威克汉姆酵母（Wickerhamomycesanomalus）YF1503菌株以不同摇床转速培养产乙酸乙酯情况；图10是在不同的糖度高粱酶解液培养基中，酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）YF1914和异常威克汉姆酵母（Wickerhamo本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株酿酒酵母菌株，其特征在于：该酿酒酵母菌株命名为酿酒酵母菌株YF1914，已于2017年10月20日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No.14827，该菌株的特征是：形状多为椭圆形，芽殖，菌落为乳白色，表面光滑湿润，边缘规则；在乙醇发酵培养基中培养3 d，乙醇产量达到68 g/L；所述酿酒酵母YF1914菌株的26S rDNA D1/D2序列与其它多株酿酒酵母的26S rDNA D1/D2序列有99%的相似性。

【技术特征摘要】
1.一株酿酒酵母菌株，其特征在于：该酿酒酵母菌株命名为酿酒酵母菌株YF1914，已于2017年10月20日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCCNo.14827，该菌株的特征是：形状多为椭圆形，芽殖，菌落为乳白色，表面光滑湿润，边缘规则；在乙醇发酵培养基中培养3d，乙醇产量达到68g/L；所述酿酒酵母YF1914菌株的26SrDNAD1/D2序列与其它多株酿酒酵母的26SrDNAD1/D2序列有99%的相似性。2.如权利要求1所述的酿酒酵母菌株YF1914和异常威克汉姆酵母YF1503共培养在提高乙酸乙酯含量中的应用。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，在高粱酶解液培养基中，采用摇动培养，酿酒酵母YF1914和异常威克汉姆酵母YF1503可以按照不同的接种比例进行共培养；共培养发酵所产乙酸乙酯含量高于异常威克汉姆酵母YF1503单独发酵；优选酿酒酵母YF1914与异常威克汉姆酵母YF1503按照1:1的接种比例进行共培养发酵。4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，在高粱酶解液培养基中，采用摇动培养，接种比例1:1，酿酒酵母YF1914和异常威克汉姆酵母YF1503可以按照不同的接种量进行共培养；优选酿酒酵母YF1914与异常威克汉姆酵母YF1503的接种量均为1×106CFU/mL进行共培养发酵。5.如权利要求2所述的应用，其特征在于，在高粱酶解液培养基中，采用摇动培养，接种比例1:1，接种量均为1×106CFU/mL，酿酒酵母YF1914和异常威克汉姆酵母YF1503可以按照不同的接种方式和培养方式进行共培养；优选异常威克汉姆酵母YF1503先静置培养24h后接入酿酒酵...

【专利技术属性】
技术研发人员：范光森，李秀婷，孙宝国，滕超，朱运平，杨然，富志磊，许岱，
申请(专利权)人：北京工商大学，
类型：发明
国别省市：北京,11