The invention relates to a preparation method of natural alpha syn oligomeric antibody and its products and applications. The preparation method is to prepare alpha syn oligomer affinity gel by using polyacrylamide gel and cross-linked alpha syn oligomer, dilute the intravenous immunoglobulin and sample it onto the alpha syn oligomer affinity gel column, then eluate the binding antibody to obtain the day. However, alpha syn oligomer antibody. The natural anti-alpha syn oligomer antibody prepared by this method has clear and specific targeting and easy to control dosage, so it can give full play to the therapeutic effect of the anti-alpha syn oligomer antibody, and has broad application prospects in the treatment of Parkinson's disease and other diseases related to alpha syn syn.
【技术实现步骤摘要】
一种天然α-syn寡聚体抗体的制备方法及其产品和应用
本专利技术属于生物
,涉及一种抗体的制备方法及其产品和应用,尤其涉及一种天然α-syn寡聚体抗体的制备方法及其产品和应用。
技术介绍
帕金森病(Parkinson’sdisease,PD)是发病率仅次于老年痴呆的一种神经退行性疾病,主要表现为震颤、肌强直、动作迟缓、姿势平衡障碍等运动症状和嗅觉减退、便秘、睡眠行为异常和抑郁等非运动症状。我国65岁以上人群总体患病率为1700/10万,并随年龄增长而升高,给家庭和社会都带来了沉重的负担。据估计目前世界上大约有1000万PD患者,尚无任何特异性治疗药物面世。因此,对PD有效治疗药物的研究刻不容缓。PD有两个主要的病理特征:一是患者大脑黑质部位多巴胺能神经细胞程序性死亡,在约70-80%多巴胺能神经细胞死亡后,就会出现临床症状;二是患者脑内有不溶性路易斯小体和Lewy神经突出现,其主要成分为聚集的α突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)。α-syn单体含有140个氨基酸,主要存在于前突触末端,可能与突触的可塑性有关。α-syn单体可聚集形成寡聚体、前纤维和纤维。在各种形式的α-syn聚集体中,寡聚体可能是最具有毒性的,是PD发生发展的主要致病因素。动物模型实验也证实α-syn基因的突变、错误剪切或过表达导致的α-syn聚集与PD的发生直接相关。脑内α-syn聚集体具有神经毒性,能够破坏神经细胞膜,导致活性氧自由基的大量产生,引起氧化应激,线粒体损伤,脂质和蛋白过氧化,钙平衡紊乱,炎症因子释放增加,最终导致神经细胞功能紊乱,甚至凋亡。这些病理变化 ...
【技术保护点】
1.一种天然α‑syn寡聚体抗体的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括以下步骤:利用可装载蛋白的材料和交联的α‑syn寡聚体制备得到含有α‑syn寡聚体的亲和材料,将其作为洗脱柱的填料,将静脉注射免疫球蛋白稀释后上样于所述洗脱柱,然后用洗脱液将结合的抗体洗脱出来,得到天然α‑syn寡聚体抗体。
【技术特征摘要】
1.一种天然α-syn寡聚体抗体的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括以下步骤:利用可装载蛋白的材料和交联的α-syn寡聚体制备得到含有α-syn寡聚体的亲和材料,将其作为洗脱柱的填料,将静脉注射免疫球蛋白稀释后上样于所述洗脱柱,然后用洗脱液将结合的抗体洗脱出来,得到天然α-syn寡聚体抗体。2.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述利用可装载蛋白的材料和交联的α-syn寡聚体制备含有α-syn寡聚体的亲和材料的方法为:(1)将可装载蛋白的材料加入至交联缓冲液中;(2)向步骤(1)得到的可装载蛋白的材料的体系中,加入交联的α-syn寡聚体,将所得到的混合体系进行离心处理,得到α-syn寡聚体亲和凝胶。3.如权利要求1或2所述的制备方法,其特征在于,所述可装载蛋白的材料为聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶或葡聚糖凝胶中的任意一种,优选聚丙烯酰胺凝胶;优选地,步骤(1)所述缓冲液为pH=10的含0.6M柠檬酸钠和0.2M碳酸钠的缓冲液;优选地,步骤(2)所述的离心处理包括以下步骤:A、将混合体系混匀,震荡,离心,弃液相,B、利用终止缓冲液进行重悬,震荡,离心,弃液相;C、利用PBS缓冲液进行重悬,震荡,离心,弃液相;D、利用NaCl溶液进行重悬,震荡,离心,弃液相;E、利用PBS缓冲液进行重悬,震荡,离心,弃液相;优选地,步骤A所述震荡时间为0.5-2h;优选地,步骤A所述离心时间为0.5-5min;优选地,步骤A所述离心力大小为1000-3000g。4.如权利要求1-3中任一项所述的制备方法,其特征在于,步骤B所述缓冲液为pH=9.0的含3.0MNH2(CH2)2OH的缓冲液;优选地,步骤B所述震荡时间为1-5h;优选地,步骤B所述离心时间为0.5-5min;优选地,步骤B所述离心力大小为1000-3000g。5.如权利要求1-4中任一项所述的制备方法,其特征在于,步骤C所述震荡时间为5-60min;优选地,步骤C所述离心时间为0.5-5min;优选地,步骤C所述离心力大小为1000-3000g;优选地,步骤D所述NaCl溶液的浓度为1M;优选地,步骤D所述震荡时间为5-60min;优选地,步骤D所述离心时间为0.5-5min;优选地,步骤D所述离心力大小为1000-3000g;优选地,步骤E共重复进...
【专利技术属性】
技术研发人员:刘瑞田,黄亚茹,谢喜秀,
申请(专利权)人:中国科学院过程工程研究所,
类型:发明
国别省市:北京,11
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