一种菌根食用菌菌种的分离培养方法技术

本发明专利技术涉及一种菌根食用菌菌种的分离与培养方法，其特征为：所述的菌根食用菌菌种的分离培养方法包括如下步骤：a、将菌根菌的孢子或子实体组织放入琼脂培养基中培养菌丝体；b、将以上培养好的菌丝转入琼脂培养基中培养或将琼脂菌丝体接入液体培养基中培养；c、将上述液体培养的菌丝体经匀质器匀质并再次接入液体培养基中培养，直到菌丝体的菌丝球直径达到0.2‑1.5cm为止；d、将以上培养好的菌丝体放在合适的培养条件下培养出菇。本发明专利技术的方法经多种菌根食用菌菌种的分离培养实验表明，是一种操作简单有效，效率高的方法，是一个很好的培养基，很适宜于在大量外生菌根菌菌种的分离培养中推广应用，具有显著的经济效益。

A Method of Isolation and Culture of Mycorrhizal Edible Fungi

The invention relates to a method for isolating and culturing mycorrhizal edible fungi, which is characterized by the following steps: A. putting mycorrhizal spores or fruiting bodies into agar medium to cultivate mycelia; B. transferring the above cultured mycelia into agar medium to cultivate or inserting agar mycelia into liquid medium Culture; C. The liquid cultured mycelia were homogenized by homogenizer and re-cultured in liquid medium until the mycelial sphere diameter reached 0.2 1.5 cm; D. The above cultured mycelia were cultured under suitable culture conditions to produce mushrooms. The method of the invention has been proved to be a simple and effective method with high efficiency by the isolation and culture experiments of a variety of edible mycorrhizal fungi strains. It is a good medium and is suitable for popularization and application in the isolation and culture of a large number of ectomycorrhizal fungi strains, and has remarkable economic benefits.

【技术实现步骤摘要】
一种菌根食用菌菌种的分离培养方法
本专利技术涉及食用菌领域，特别是一种菌根食用菌菌种的分离培养方法。
技术介绍
目前菌根菌的大多数可食用子实体都是著名的食用菌，其价格极其昂贵。如松口蘑(Tricholomamatsutake)、黑孢块菌(TubermelanosporumVitt.)、意大利白块菌(Tubermagnatum)、松乳菇(Lactariusdeliciosus)、红汁乳菇(L.hatsudake)、美味牛肝菌(Boletusedulis)、橙盖鹅膏菌(Amatanitacaesarea)、中华块菌(TubersinenseK.TaoetLiu)、印度块菌(TuberindicumCookeetMassee)、鸡油菌(CantharelluscibariusFr.)、干巴菌(ThelephoraganbajunZang)、紫红拟锁瑚菌(Clavulinopsismiyabeana(Ito.)Ito.)、褐环乳牛肝菌(Suillusluteus(L.：Fr.)Gray)、厚环乳牛肝菌(Suillusgreviller(KL.)sing.)、变绿红菇(Russulavirescens(schaeff.)Fr.)、橙盖鹅膏(Amanitacaesarea(Scop：Fr.)Pers.exschw.)、玉蕈离褶伞(Lyophyllumshimeji(kawam.)Hongo)、烟色离褶伞(Lyophyllumfumosum(Pers.：Fr.)Orton)等，还有灰花纹鹅膏(AmanitafuligineaHongo)、亚稀褶黑菇(RussulasubnigricansHongo)等极具经济价值的毒菌。但是对其菌种的分离培养一直是一个难题，因其独具的特性，在现有的技术条件下，不能象广泛栽培的腐生食用菌(如香菇、木耳等)那样进行分离培养，培养基在其中扮演了十分重要的角色。目前在外生菌根菌分离和培养的过程中，主要使用的是MMN培养基，此培养基在培养一些林业上常用的比较容易培养的菌根菌时，比较适用，但还是有很多经济价值较高的菌根食用菌在这个培养基上较难以生长，或生长很慢；另外一个培养基就是腐生菌及其它一些微生物培养中经常用到的PDA培养基，但大多数菌根菌在此培养基上难以生长；后来人们又将这两种培养基按一定比例配制，用于菌根菌的培养，使许多菌根菌的分离与培养的成活率和生长速度得到提高，但菌丝较在MMN上要老化快得多。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于菌根食用菌菌种分离和培养的培养基及方法，它可丰富现有外生菌根菌菌种分离培养的培养基和方法。为了实现上述目的，本专利技术的技术方案是：一种外生菌根菌菌种分离和培养方法，其特征在于：所述的菌根菌菌种的分离和培养方法包括如下步骤：a、将菌根菌的孢子或子实体组织放入琼脂培养基中培养菌丝体，培养室的温度为15-25℃，根据菌丝的生长速度培养25-35天，直到菌丝体长满培养基表70-80％，放入1-15℃的冰箱中保存备用；b、将以上培养好的菌丝体转入琼脂培养基中继续培养或将菌丝体接入液体培养基中培养，培养条件为150～180r/min，温度为20-28℃，湿度65％，培养7-14天，直到培养基颜色透明，并略带淡黄色时为止；c、将上述液体培养的菌丝体经匀质器匀质并再次接入液体培养基中培养，直到菌丝体的菌丝球直径达到0.2-1.5cm为止；d、将以上培养好的菌丝体放在合适的培养条件下培养出菇，其出菇培养条件为：温度为20-28℃、光照100-600Lux的培养室内静置培养。我们对菌根菌生长条件的分析，在培养基中加入一些天然的物质，用于菌根菌的培养，使其分离成活率及转管成活率得到大的提高，并成功培育出子实体。使用时，本专利技术的方法经多种菌根食用菌菌种的分离和几个牛肝菌菌种的培养实验表明，是一种操作简单有效，效率高的方法，很适宜于在外生菌根菌菌种的分离、生理生化及子实体出菇试验研究过程中推广应用，具有较高的应用价值，其分离成活率由用现有技术的20-30％提高到90％-100％以上，部分菌根菌还可形成子实体。附图说明：图1为分离培养的美味牛肝菌菌丝体效果图图2为本专利技术培育出的美味牛肝菌子实体效果图具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步的描述。本专利技术一种外生菌根菌菌种的分离和培养方法，其特征在于：所述的外生菌根菌菌种的分离和培养方法包括如下步骤：a、将菌根菌的孢子或子实体组织放入琼脂培养基中培养菌丝体，其中琼脂培养基组成如下：MgSo4·7H2O，0.13～0.2g；KH2Po4，0.4～0.65g；Cacl2，0.03～0.07g；酒石酸铵，0.51～1.0g；维生素B1，80～200μg；Fecl3·6H2O，0.012～0.036g；葡萄糖，10～30g；杉木根煮汁，300～380mL；马铃薯煮汁，200～450mL；琼脂条，15～20g；补蒸馏水至1000mL，pH5.1～5.8；b、将以上培养好的菌丝转入琼脂培养基中培养或将菌丝体接入液体培养基中培养，其中液体培养基组成如下：柠檬酸，0.5～2g；KH2PO4，0.5～2g；MgSO4·7H2O，0.5～2g；CaCl2，30～80mg；FeCl3·6H2O，30～80mg；矿物质混合液，5～15mL；维生素混合液，5～15mL，蒸馏水，1000mL；pH5～6。其中矿物质混合液组成：ZnSO4·7H2O，300mg；NiSO4·6H2O，200mg；CuSO4·5H2O，100mg；MnSO4·5H2O，50mg；CoSO4·7H2O，50mg；蒸馏水，1000mL；维生素混合液组成：维生素B1，300mg；烟酸，5mg；叶酸，3mg；生物素，5mg；盐酸吡哆醇，0.5mg；硫酸腺嘌呤，3mg；氯化胆碱，3mg；蒸馏水1000mL；c、将上述培养的菌丝体经匀质器匀质并再次接入液体培养基中培养，直到菌丝体的菌丝球直径达到0.2-1.5cm为止；d、将以上培养好的菌丝体放在培养室培养出菇，a步骤中，将菌根菌的孢子或子实体组织放在琼脂培养基上，放入培养室中培养，直到长出菌丝球直径达到0.2-1.5cm的菌丝体，培养室的温度为15-25℃，菌丝的生长速度为25-35天，然后放入1-15℃的冰箱中保存备用。b步骤中，具体为将配制好的琼脂培养基20～50mL、液体培养基约100mL分别装入容量为250mL的三角瓶中，用一层透气性封瓶膜，外加2层报纸封口，并用橡皮筋扎紧，1×105Pa灭菌30min，将前述培养好的菌根菌菌丝体用手术刀切割成5mm×5mm的菌丝块，将2个接种块分别接入装有以上琼脂培养基的三角瓶中，接种好菌种的琼脂培养基放入培养室中培养；每个液体培养基三角瓶中接入10个接种块，接种好菌种的液体培养基放入到往返式摇床上培养，培养条件为150～180r/min，温度为20-28℃湿度65％，培养7-14天。c步骤中，将菌丝体匀质并接入与b步骤中相同的液体培养基中培养，培养条件为为温度20-28℃、湿度65％，转速150-180转/分钟，培养7-21天，直到菌丝球直径达到0.2-1.5cm左右为止。d步骤中，将培养好的菌丝球放在合适的培养条件下培养出菇，其出菇培养条件为：温度为20-28℃、光照100-600Lux本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种菌根食用菌菌种的分离培养方法，其特征在于：所述的菌根食用菌菌种的分离培养方法包括如下步骤：a、将目的菌根菌的孢子或子实体组织放入琼脂培养基中培养菌丝体；所述步骤a中的琼脂培养基组成如下：MgSo4·7H2O，0.13～0.2g；KH2Po4，0.4～0.65g；Cacl2，0.03～0.07g；酒石酸铵，0.1～1.0g；维生素B1，80～200μg；Fecl3·6H2O，0.012～0.036g；葡萄糖，10～30g；杉木根煮汁，300～380mL；马铃薯汁，200～450mL；琼脂条，15～20g；补蒸馏水至1000mL，pH5.1～5.8；所述的杉木根煮汁为17克鲜根加水1000mL煮沸1小时；b、将以上培养好的菌丝转入培养基中培养或将琼脂菌丝体接入液体培养基中培养；c、将上述液体培养的菌丝体经匀质器匀质并再次接入液体培养基中培养，直到菌丝体的菌丝球直径达到0.2‑1.5cm为止；d、将以上培养好的菌丝体放在合适的培养条件下培养出菇；b步骤和d步骤中，将培养好的琼脂培养基上的菌丝体和菌丝球放在合适的培养条件下培养出菇，其出菇培养条件为：温度为20‑28℃、光照100‑600Lux。...

【技术特征摘要】
1.一种菌根食用菌菌种的分离培养方法，其特征在于：所述的菌根食用菌菌种的分离培养方法包括如下步骤：a、将目的菌根菌的孢子或子实体组织放入琼脂培养基中培养菌丝体；所述步骤a中的琼脂培养基组成如下：MgSo4·7H2O，0.13～0.2g；KH2Po4，0.4～0.65g；Cacl2，0.03～0.07g；酒石酸铵，0.1～1.0g；维生素B1，80～200μg；Fecl3·6H2O，0.012～0.036g；葡萄糖，10～30g；杉木根煮汁，300～380mL；马铃薯汁，200～450mL；琼脂条，15～20g；补蒸馏水至1000mL，pH5.1～5.8；所述的杉木根煮汁为17克鲜根加水1000mL煮沸1小时；b、将以上培养好的菌丝转入培养基中培养或将琼脂菌丝体接入液体培养基中培养；c、将上述液体培养的菌丝体经匀质器匀质并再次接入液体培养基中培养，直到菌丝体的菌丝球直径达到0.2-1.5cm为止；d、将以上培养好的菌丝体放在合适的培养条件下培养出菇；b步骤和d步骤中，将培养好的琼脂培养基上的菌丝体和菌丝球放在合适的培养条件下培养出菇，其出菇培养条件为：温度为20-28℃、光照100-600Lux。2.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：张建军，
申请(专利权)人：张建军，
类型：发明
国别省市：陕西,61