一种抗CD47抗体及其应用制造技术

技术编号:20215844 阅读:41 留言:0更新日期:2019-01-28 16:45
本发明专利技术提供一种抗CD47单克隆抗体或其抗原结合片段,其能够特异性结合CD47分子,结合之后能够阻断CD47与SIRPα的结合,并能够产生一系列生物学效应。

【技术实现步骤摘要】
一种抗CD47抗体及其应用
本专利技术属于医学领域,具体涉及一种抗体或其抗原结合片段,该抗体或其抗原结合片段特异性识别人分化簇47(CD47),能够作为免疫活化物刺激机体的免疫反应,从而产生抗肿瘤等疾病的效果。
技术介绍
肿瘤是全球第二大导致人类死亡的病因。无论在发达国家还是在发展中国家,肿瘤导致的癌症都是死亡率最高的疾病,并且其死亡率和发病率仍不断增高。全球癌症疾病报告显示:过去十年里,全球癌症发病率升高了33%。仅2015年,就有1520万人被诊断为癌症,并有880万人因此死亡;发展中国家的癌症死亡率高于发达国家,患病人数占到全球的57%,死亡人数高达全球的65%,因此抗肿瘤药物市场的潜力十分巨大。几乎所有肿瘤细胞都具有通过提高自身CD47蛋白表达,不但使其周围多种免疫细胞正常免疫杀伤功能受到抑制,而且表现出促进肿瘤组织扩增和转移的特性,这种特性能够导致患者病情进一步恶化。相关研究表明,阻断肿瘤细胞CD47相关的信号通路,能够解除肿瘤细胞对免疫细胞的抑制作用,从而激活肿瘤微环境中免疫细胞,尤其是巨噬细胞的杀伤功能,杀伤肿瘤细胞;活化的巨噬细胞通过吞噬靶细胞,发挥其抗原提呈的功能,特异性的活化T细胞,通过活化的T细胞发挥的细胞毒作用,进一步杀伤肿瘤细胞。利用抗体结合细胞表面蛋白靶点治疗多种肿瘤和类风湿等免疫疾病已取得显著的效果;截至目前,经FDA批准上市的相关药物已超过60种。相关研究已经证明,利用抗CD47单克隆抗体,在体内特异性结合肿瘤细胞表面高表达的CD47蛋白,能够有效解除肿瘤细胞对免疫细胞的抑制作用,重新恢复机体免疫细胞功能,达到抑制肿瘤生长的效果。
技术实现思路
本专利技术的一个方面在于提供一种能够与CD47分子特异结合的抗CD47抗体或其抗原结合片段,所述抗CD47抗体或其抗原结合片段包含SEQIDNO:3、SEQIDNO:4和SEQIDNO:5所示的重链CDRs;以及SEQIDNO:6、SEQIDNO:7和SEQIDNO:8所示的轻链CDRs。在本专利技术的实施方案中,所述抗CD47抗体或其抗原结合片段包含SEQIDNO:1所示的重链可变区和SEQIDNO:2所示的轻链可变区;或包含SEQIDNO:9所示的重链可变区和SEQIDNO:10所示的轻链可变区。在本专利技术的实施方案中,所述抗CD47抗体包含SEQIDNO:11所示的重链和SEQIDNO:12所示的轻链。在本专利技术的实施方案中,所述抗原结合片段选自Fαb、Fαb′、Fαb′-SH、Fv、scFv、F(αb′)2、双抗体和包含CDR的肽,所述抗CD47抗体或其抗原结合片段阻断CD47与SIRPα的结合。在一些实施方式中,所述抗CD47抗体或其抗原结合片段为鼠源或人源化抗CD47单克隆抗体。优选地,所述人源化的抗CD47抗体或其抗原结合片段包含人Fc区,更优选为人IgG4的Fc区。本专利技术的一个方面涉及多肽,其包含SEQIDNO:9所示的序列,其中所述多肽是特异性结合CD47的抗体的一部分,并且所述抗体还包含SEQIDNO:10所示的多肽。本专利技术的一个方面涉及多肽,其包含SEQIDNO:10所示的序列,其中所述多肽是特异性结合CD47的抗体的一部分,并且所述抗体还包含SEQIDNO:9所示的多肽。本专利技术的一个方面涉及多肽,其包含SEQIDNO:1所示的序列,其中所述多肽是特异性结合CD47的抗体的一部分,并且所述抗体还包含SEQIDNO:2所示的多肽。本专利技术的一个方面涉及多肽,其包含SEQIDNO:2所示的序列,其中所述多肽是特异性结合CD47的抗体的一部分,并且所述抗体还包含SEQIDNO:1所示的多肽。本专利技术的一个方面在于提供编码上述所述抗CD47抗体或其抗原结合片段或上述多肽的分离的多核苷酸。在本专利技术的一个方面,涉及分离的多核苷酸,其编码SEQIDNO:9所述的多肽,其中所述多肽是特异性结合CD47的抗体的一部分,并且所述抗体还包含SEQIDNO:10所示的多肽。优选地,所述多核苷酸序列由SEQIDNO:15表示。在本专利技术一个方面,涉及分离的多核苷酸,其编码SEQIDNO:10所述的多肽,其中所述多肽是特异性结合CD47的抗体的一部分,并且所述抗体还包含SEQIDNO:9所示的多肽。优选地,所述多核苷酸序列由SEQIDNO:16表示。在本专利技术的一个方面,涉及分离的多核苷酸,其编码SEQIDNO:1所述的多肽,其中所述多肽是特异性结合CD47的抗体的一部分,并且所述抗体还包含SEQIDNO:2所示的多肽。优选地,所述多核苷酸序列由SEQIDNO:13表示。在本专利技术的一个方面,涉及分离的多核苷酸,其编码SEQIDNO:2所述的多肽,其中所述多肽是特异性结合CD47的抗体的一部分,并且所述抗体还包含SEQIDNO:1所示的多肽。优选地,所述多核苷酸序列由SEQIDNO:14表示。本专利技术的一个方面在于提供包含所述多核苷酸的表达载体。本专利技术的一个方面在于提供包含上述表达载体的宿主细胞。本专利技术的一个方面在于提供制备所述抗CD47抗体或其抗原结合片段的方法,所述方法包括:1)培养所述宿主细胞;2)从所述宿主细胞或培养基中回收多肽。本专利技术的一个方面在于提供一种含有所述抗CD47抗体或其抗原结合片段的组合物或缀合物,优选地,所述缀合物进一步包含直接或通过合适长度的间隔物与多肽缀合的另外的分子,例如放射性同位素或放射性核素、毒素或细胞毒性基团,标记基团(标记的多肽),如荧光基团、酶基团、化学发光基团、生物素基团、金属颗粒等。本专利技术的一个方面在于提供所述抗CD47抗体或其抗原结合片段在制备用于提高巨噬细胞杀伤水平的药物中的用途,优选所示药物用于治疗肿瘤,特别是癌症,优选所述癌症包括血液肿瘤和实体肿瘤,特别是淋巴瘤。本专利技术提供的抗CD47抗体或其抗原片段能够特异性结合CD47分子,结合之后能够阻断CD47与SIRPα的结合,并能够产生一系列生物学效应。这些生物学效应包括:能够激活肿瘤病例肿瘤浸润的巨噬细胞吞噬能力,特别是能够抑制小鼠体内肿瘤生长。CD47作为“别吃我”信号,它通过与巨噬细胞表面的SIRPα相互结合抑制巨噬细胞的吞噬作用。因为CD47-SIRPα信号通路的存在,肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)失去识别肿瘤细胞的功能,这一信号通路又被称为髓样细胞免疫检查点通路。当CD47与SIRPα结合后,其胞内免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM)发生磷酸化后发生聚集反应,被与其自身相连的细胞溶质性蛋白酪氨酸磷酸酶(SHP)激活,SHP通过近端底物的去磷酸化,裂解免疫受体酪氨酸活化基序(ITAM)的磷酸基团,抑制吞噬信号和肌球蛋白轻链的骨架重排,进而导致吞噬细胞失去吞噬功能。肿瘤利用上述机制,细胞通过高表达CD47逃避巨噬细胞对其进行攻击。而利用抗体特异性阻断CD47与SIRPα的相互作用,能够活化处于抑制状态的TAMs,使得TAMs的免疫杀伤功能得到释放,恢复TAMs的功能,从而达到利用机体免疫系统杀伤肿瘤细胞进而进行肿瘤治疗的作用。本专利技术基于上述原理,发现的抗CD47抗体或其抗原结合片段通过与CD47分子特异结合,阻断CD47与SIRPα的结合,从而使巨噬细胞活化,杀伤肿瘤细胞。本申请中,抗CD47抗体包括与CD47特异性结合的抗体或衍生物,也包括与原来的抗体本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.与CD47分子特异结合的抗CD47抗体或其抗原结合片段,所述抗CD47抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示的重链CDRs;以及SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示的轻链CDRs。

【技术特征摘要】
1.与CD47分子特异结合的抗CD47抗体或其抗原结合片段,所述抗CD47抗体或其抗原结合片段包含SEQIDNO:3、SEQIDNO:4和SEQIDNO:5所示的重链CDRs;以及SEQIDNO:6、SEQIDNO:7和SEQIDNO:8所示的轻链CDRs。2.权利要求1所述的抗CD47抗体或其抗原结合片段,其中所述抗CD47抗体或其抗原结合片段包含SEQIDNO:1所示的重链可变区和SEQIDNO:2所示的轻链可变区;或包含SEQIDNO:9所示的重链可变区和SEQIDNO:10所示的轻链可变区。3.权利要求1所述的抗CD47抗体或其抗原结合片段,其中所述抗CD47抗体包含SEQIDNO:11所示的重链和SEQIDNO:12所示的轻链。4.权利要求1所述的抗CD47抗体或其抗原结合片段,其中所述抗原结合片段选自Fαb、Fαb′、Fαb′-SH、Fv、scFv、F(αb′)2、双抗体和包含CDR的肽,所述抗CD47抗体或其抗原结合片段阻断CD47与SIRPα的结合。5.权利要求1所述的抗CD47抗体或其抗原结合片段,其中所述抗CD47抗体或其抗原结合片段为鼠源或人源化抗CD47单克隆抗体,优选地,所述人源化的抗CD47抗体或其抗原结合片段包含人Fc区,更优选为人IgG4的Fc区。6.多肽,其包含SEQIDNO:9所示的序列,其中所述多肽是特异性结合CD47的抗体的一部分,并且所述抗体还包含SEQIDNO:10所示的多肽。7.多肽,其包含SEQIDNO:10所示的序列,其中所述多肽是特异性结合CD47的抗体的一部分,并且所述抗体还包含SEQIDNO:9所示的多肽。8.多肽,其包含SEQIDNO:1所示的序列,其中所述多肽是特异性结合CD47的抗体的一部分,并且所述抗体还包含SEQIDNO:2所示的多肽。9.多肽,其包含SEQIDNO:2所示的序列,其中所述多肽是特异性结合CD47的抗体的一部分,并且所述抗体还包含SEQIDNO:1所示的多肽。10.分...

【专利技术属性】
技术研发人员:严景华史瑞谭曙光马素芳高福
申请(专利权)人:中国科学院微生物研究所
类型:发明
国别省市:北京,11

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