改进型齐考诺肽制造技术

本发明专利技术为一种改进型齐考诺肽。本发明专利技术以齐考诺肽的C端与细胞膜穿透肽的N端通过两个甘氨酸进行连接，获得的融合肽克服了齐考诺肽不能通过血脑屏障，不能肌内注射，外科手术风险高、感染风险高等不足。本发明专利技术的改进型齐考诺肽适用于静脉、腹腔或鼻腔给药方式，操作方便，临床风险小，通过静脉、腹腔或鼻腔施用，其在体内的药效作用时间长，镇痛效果优良，副作用小，适用于大规模的临床应用。本发明专利技术的改进型齐考诺肽制备简单，制备工艺和制备过程中质量可控，适用于大规模产业化生产。

【技术实现步骤摘要】
改进型齐考诺肽
本专利技术属于多肽药物
，特别涉及一种齐考诺肽的融合多肽。
技术介绍
齐考诺肽(商品名PrialtTM，ElanPharmaceuticals)是美国食药局(FDA)2004年批准的首例芋螺毒素类药物。其靶向作用位点是N型电压门控钙离子通道，是蛛网膜下腔(鞘内)复合镇痛的一线药物。齐考诺肽是太平洋食鱼螺——鸡心螺——体内毒液肽中亲水性多肽ω—MVIIA的人工合成物，是首个应用于临床的新型非吗啡类镇痛剂，其分子式为C102H172N36O32S7，结构式：H-Cys-Lys-Gly-Lys-Gly-Ala-Lys-Cys-Ser-Arg-Leu-Met-Tyr-Asp-Cys-Cys-Thr-Gly-Ser-Cys-Arg-Ser-Gly-Lys-Cys-NH2。齐考诺肽临床可以治疗带状疱疹后遗神经痛，幻肢痛，艾滋病相关神经病理性疼痛，难治性癌痛，手术后疼痛，不能耐受或拒绝其他治疗方法如全身性镇痛药、辅助治疗、缓解鞘内注射阿片类药物无效的疼痛等。与水杨酸盐，NSAIDs和局部麻醉剂主要通过外周神经/伤害感受器，阿片类药物和全身麻醉药主要作用于大脑水平以消除疼痛和意识不同，齐考诺肽的治疗作用机制是通过其结合N型钙通道受体的能力。N型钙离子通道受体位于脊髓后部表面Rexed′sI和II层内的主要伤害性A-δ和C-慢纤维疼痛纤维(伤害感受器)上，可缓解其他治疗手段包括鞘内注射吗啡无效的疼痛，且长时间使用该药物不会产生耐受性和成瘾性，应用指征为治疗与创伤、肿瘤和神经痛等相关的慢性疼痛，尤其在治疗对阿片类药物不敏感的难治性疼痛或对阿片类不能耐受的病人方面有独到的优势。然而，齐考诺肽不能穿过血脑屏障，目前仅使用鞘内插管给药途径输注，插管与输注泵埋藏于皮下，需要手术完成,临床使用不方便。目前仅用于对已有止痛药物抵抗型、慢性疼痛的长期、永久性治疗。这种给药方式极大限制了该药固有优点的临床应用。血脑屏障(BBB)是存在于脑组织和血液之间的一个复杂细胞系统，能控制血脑两侧的物质转运，从而保证中枢神经织内环境的稳定血液中的有用物质通过微血管内皮细胞膜上各种各样的受体相互作用，并按机体的需要转运进入大脑，从而发挥作用；而一些有毒有害物质则被该屏障屏蔽于脑组织外，以防对大脑产生损害。血脑屏障(BBB)这种特殊的保护作用，导致了大部分药物难以进入大脑，这个中枢神经类疾病的治疗和给药造成困扰。细胞穿透肽(cellpenetratingpeptides，CPP)是一类能够通过生物膜进入细胞的短肽(一般少于35个氨基酸残基)。其发现源于1988年，有学者发现HIV-1的反式激活蛋白Tat能跨膜转导至胞内，接着又有人发现果蝇转录蛋白也具有类似特性。此后，其他许多CPP陆续被发现，CPP在相对分子质量、氨基酸组成、氨基酸排列序列上表现出多样性，所含氨基酸数量和种类不同，极性和带电荷量亦不同，但是它们具有一些共同的特点，比如：在较低的浓度条件下，可以穿过细胞膜进入细胞并且不会对膜造成明显破坏和损伤；本身具有穿透膜能力，并且还能介导各种物质包括小分子、核酸、蛋白多肽以及纳米粒子等入胞；高效、低毒。近年来，研究发现，采用细胞穿透肽与药物分子连接，可以达到穿过血脑屏障效果，这给中枢神经给药带来了新的方向。目前，现有技术中存在利用细胞穿透肽辅助芋螺毒素穿过血脑屏障的技术方法，例如，将齐考诺肽包装于病毒颗粒中，并在病毒颗粒表面连接TAT多肽，该病毒颗粒可以递送齐考诺肽通过血脑屏障，但是，这样的方法制备的工艺复杂，病毒的包装过程，无法进行很好的质量控制，难以在产业上大规模应用。又如，将TAT肽与芋螺毒素的N端通过两个GG作为连接单元,制备获得融合多肽，该融合多肽可以通过血脑屏障，适用于静脉注射给药，但是，N端连接的融合多肽通过静脉注射给药，在体内的镇痛效果和存在时间都无法达到临床应用的要求，无法进行大规模的推广。因此，获得一种能够通过血脑屏障，克服鞘内插管给药的缺点，且能在临床上大规模使用的改进型齐考诺肽是目前急需解决的问题。
技术实现思路
本专利技术目的之一是提供一种改进型齐考诺肽。本专利技术人通过长期研究发现，通过齐考诺肽的C端与细胞膜穿透肽的N端连接，获得的改进型齐考诺肽的融合肽，可以克服现有技术的缺陷，适用于静脉、腹腔或鼻内给药，且在体内的镇痛效果良好和药效时间较长，能够在临床上大规模使用。具体的，实现上述目的的技术方案如下所示。一种融合多肽，由齐考诺肽与细胞膜穿透肽组成。优选的，所述融合多肽由齐考诺肽通过C端与细胞膜穿透肽连接组成，或者齐考诺肽的C端通过连接子与细胞膜穿透肽的N端连接，优选的，所述连接子为两个甘氨酸(GG)。进一步，齐考诺肽的氨基酸为CKGKGAKCSRLMYDCCTGSCRSGKC(如SEQIDNO.1所示)，或者，融合多肽中齐考诺肽也可以是CKGKGAKCSRLMYDCCTGSCRSGKC(如SEQIDNO.1所示)通过少于10个、少于8个，少于6个，少于4个，2个或1个的氨基酸进行缺失、突变或插入的氨基酸的变体。进一步，所述细胞膜穿透肽可以是Penetratin、TAT肽、Pep-1肽、S413-PV、Magainin2或Buforin2。其中，TAT肽来源HIV-1的反式激活蛋白Tat，其能跨膜转导至胞内。TAT肽的氨基酸为YGRKKRRQRRR(如SEQIDNO.2所示)，或者，融合多肽中TAT肽也可以是YGRKKRRQRRR(如SEQIDNO.2所示)通过少于10个、少于8个，少于6个，少于4个，2个或1个的氨基酸进行缺失、突变或插入的氨基酸的变体，或其拟肽。优选的，前述多肽或融合多肽或改进型齐考诺肽的氨基酸序列为CKGKGAKCSRLMYDCCTGSCRSGKCGGYGRKKRRQRRR(如SEQIDNO.3所示)或者，通过少于10个、少于8个，少于6个，少于4个，2个或1个的氨基酸进行缺失、突变或插入的氨基酸的变体，或其拟肽。所述拟肽，指具有与由天然氨基酸组成的肽基本上相同的结构和/或功能特征的合成化学化合物。拟肽可以完全地包含氨基酸的合成的非天然类似物，或是部分天然肽氨基酸和部分非天然氨基酸类似物的嵌合分子。拟肽还可以掺入任何数量的天然氨基酸保守替换位点，只要此种替换基本上不改变模拟物的结构和/或抑制活性或结合活性。多肽模拟成分可以含有非天然结构组分的任何组合，所述非天然结构组分一般来自3个结构组：a)非天然酰胺键(“肽键”)连接的残基连接基团；b)代替天然存在的氨基酸残基的非天然残基；或c)诱导二级结构模拟，即诱导或稳定二级结构例如β转角、γ转角、β折叠、α螺旋构象等的残基。本专利技术的第二个目的是提供一种药物组合物或制剂，优选为药物制剂，进一步，所述药物组合物或制剂/药物制剂包含本专利技术的多肽和/或可接受载体。所述药物组合物或制剂/药物制剂可以包含以下所示的任意剂量的单位剂量形式(即，用于单次施用的剂量)提供药物组合物。可以利用常规的混合、溶解、制粒、制备糖锭剂、磨细、乳化、包囊、包埋或冻干方法制备。可以使用一种或多种便于将活性剂加工为可药用制剂的生理学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或辅料，以常规方式配制所述药物组合物或制剂/药物制剂。适合的制剂取决于所选择的给药途径。施用方式可以是胃肠外、静本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多肽，其特征在于，所述多肽包含齐考诺肽与细胞膜穿透肽。

【技术特征摘要】
1.一种多肽，其特征在于，所述多肽包含齐考诺肽与细胞膜穿透肽。2.权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述多肽由齐考诺肽通过C端与细胞膜穿透肽连接组成；优选的，所述齐考诺肽的C端通过连接子与细胞膜穿透肽的N端连接。3.权利要求2任意一项所述的多肽，其特征在于，所述连接子为两个甘氨酸。4.权利要求1-3任意一项所述的多肽，其特征在于，所述齐考诺肽的氨基酸如SEQIDNO.1所示，或所述齐考诺肽为SEQIDNO.1所示氨基酸少于10个的缺失、突变或插入的氨基酸的变体。5.权利要求1-3任意一项所述多肽，其特征在于，所述细胞膜穿透肽选自：Penetratin、TAT肽、Pep-1肽、S413-PV、Magainin2或Buforin2；优选...

【专利技术属性】
技术研发人员：李书鹏，周强，
申请(专利权)人：北京大学深圳研究生院，
类型：发明
国别省市：广东,44