一种基于靶向白细胞介素22的治疗肝损伤的纳米基因药物制造技术

本发明专利技术属生物制药领域，涉及一种基于靶向白细胞介素22治疗肝损伤的纳米基因药物及其制备方法，本发明专利技术的纳米基因治疗药物由DOTAP/Cholesterol包裹IL‑22/ApoA I融合蛋白表达载体构成，利用薄膜水化法制备成纳米药物。所述的纳米药物中在体内预期表达的IL‑22/ApoA I融合蛋白，可识别SR‑BI配体阳性表达的肝细胞，制备的liposIA在体内表达的蛋白质分子能克服半衰期短的缺点以及能实现减少白细胞介素22的免疫原性。该纳米药物具有稳定性高、质量可控和相对安全的特点。可进一步制成抗肝细胞损伤的药物。

【技术实现步骤摘要】
一种基于靶向白细胞介素22的治疗肝损伤的纳米基因药物
本专利技术属生物制药领域，涉及治疗肝损伤的纳米基因药物，具体涉及一种基于靶向白细胞介素22治疗肝损伤的纳米基因药物，及其制备方法，该纳米基因药物可用于治疗药物性肝损伤、自身免疫性肝病、病毒性肝炎、酒精肝、肝细胞癌等肝脏疾病及糖尿病。
技术介绍
现有技术公开了白细胞介素22(Interleukin22)作为白细胞介素10家族的一种细胞因子，不仅可以产生特殊的细胞趋化因子和抗菌蛋白，而且可以上调某些细胞增殖基因、抗凋亡蛋白和抗氧化因子[SertorioM,HouX,CarmoRF,DesseinH,CabantousS,AbdelwahedM,etal.Interleukin-22andIL-22bindingprotein(IL-22BP)regulatefibrosisandcirrhosisinhepatitisCvirusandschistosomeinfections.Hepatology.2014.doi:10.1002/hep.27629.；BackertI,KoralovSB,WirtzS,KitowskiV,BillmeierU,MartiniE,etal.STAT3activationinTh17andTh22cellscontrolsIL-22-mediatedepithelialhostdefenseduringinfectiouscolitis.JImmunol.2014；193:3779-91.；MoniagaCS,EgawaG,MiyachiY,KabashimaK.CalcipotriolmodulatesIL-22receptorexpressionandkeratinocyxteproliferationinIL-22-inducedepidermalhyperplasia.JDermatolSci.2013；71:76-7]。越来越多的研究表明，白细胞介素22能在ConA、四氯化碳、对乙酰氨基酚、急性或慢性酒精性肝损伤中具有参与肝脏组织的修复，促进肝脏细胞再生并保护肝细胞的功能[KiSH,ParkO,ZhengM,Morales-IbanezO,KollsJK,BatallerR,etal.Interleukin-22treatmentamelioratesalcoholicliverinjuryinamurinemodelofchronic-bingeethanolfeeding:roleofsignaltransducerandactivatoroftranscription3.Hepatology.2010；52:1291-300.]。尽管白介素22不阻止HBV、HCV病人体内病毒的复制，但研究表明它可以通过促进肝星状细胞的增殖产生肝保护作用[FengD,KongX,WengH,ParkO,WangH,DooleyS,etal.Interleukin-22promotesproliferationofliverstem/progenitorcellsinmiceandpatientswithchronichepatitisBvirusinfection.Gastroenterology2012；143:188-198.]。因此，白介素22作为一种参与急性或慢性肝细胞损伤的干预方式，具有巨大的应用前景。研究表明，虽然白介素22在疾病治疗应用方面取得了巨大的进步，但是它作为一个安全有效的药物仍然面临着巨大的挑战。白介素22的受体广泛分布于正常的胰脏、肝脏、小肠、结肠、肾等组织[SabatR,OuyangW,WolkK.TherapeuticopportunitiesoftheIL-22-IL-22R1system.NatRevDrugDiscov.2014；13:21-38.；MooreKW,deWaalMalefytR,CoffmanRL,O'GarraA.Interleukin-10andtheinterleukin-10receptor.AnnuRevImmunol.2001；19:683-765.]；因此，静脉给药后白介素22能引起全身性的生物学效应，因此其不适合自身免疫性肝病、药物性肝损伤、病毒性肝炎、酒精肝等肝脏疾病的干预治疗。有研究表明载脂蛋白AI(ApolipoproteinAI,ApoAI)能将肝外组织的胆固醇运送到肝脏，从而避免游离胆固醇在肝外组织细胞上的沉积。高密度脂蛋白主要由肝脏和小肠合成，其中肝脏合成的高密度脂蛋白以磷脂和载脂蛋白AI(ApolipoproteinAI,ApoAI)为主；B族I型清道夫受体(ScavengerreceptorclassBtypeI,SR-BI)在ApoAI生物学功能中发挥着重要作用，ApoAI在与清道夫受体SR-BI结合后，介导胆固醇和磷脂等货物在肝脏细胞聚集，从而发挥细胞保护功能[KingwellBA,ChapmanMJ,KontushA,MillerNE.HDL-targetedtherapies:progress,failuresandfuture.NatRevDrugDiscov.2014；13:445-64.]；研究还表明，SR-BI在大部分细胞中表达水平较低，在肝脏中表达水平较高，因而将白介素22和ApoAI融合，将会增强它的肝靶向且提高疗效[OutR,HoekstraM,SpijkersJA,KruijtJK,vanEckM,BosIS,etal.ScavengerreceptorclassBtypeIissolelyresponsiblefortheselectiveuptakeofcholesterylestersfromHDLbytheliverandtheadrenalsinmice.JLipidRes.2004；45:2088-95.]。基于现有技术的基础，本申请的专利技术人拟提供一种基于靶向白细胞介素22的治疗肝损伤的纳米基因药物及其制备方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供新的治疗肝损伤的纳米基因药物，具体涉及一种基于靶向白细胞介素22的治疗肝损伤的纳米基因药物。本专利技术的另一目的在于提供所述的纳米基因药物的制备方法。本专利技术的进一步在于提供该具有靶向白细胞介素22治疗肝损伤的纳米基因药物在制备治疗自身免疫性肝病、药物性肝损伤、病毒性肝炎、酒精肝等肝脏疾病及糖尿病药物中的应用。本专利技术所要解决的关键技术问题是如何实现白细胞介素22的靶向递药，如何减少白细胞介素22的免疫原性，如何延长白细胞介素22在体内的半衰期，在延长白细胞介素22的体内半衰期的同事又能保持其生物活性。本专利技术通过下述技术方案解决所述的技术问题：本专利技术的基于靶向白细胞介素22治疗肝损伤的纳米基因药物，由纳米材料包裹IL-22/ApoAI融合蛋白表达载体构成；优选的，由DOTAP/Cholesterol包封IL-22/ApoAI融合蛋白表达载体构成。本专利技术中，所述的白细胞介素22包括但不限于人白细胞介素22原型及其突变型；本专利技术中，表达载体为上游引入Kozak增强子序列pVAX1构成。本专利技术中，通过下述方法制备靶向白细胞介素22的治疗肝损伤的纳米基因药物，其包括步骤本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.基于靶向白细胞介素22的治疗肝损伤的纳米基因药物，其特征在于，由纳米材料包裹IL‑22/ApoA I融合蛋白表达载体构成。

【技术特征摘要】
1.基于靶向白细胞介素22的治疗肝损伤的纳米基因药物，其特征在于，由纳米材料包裹IL-22/ApoAI融合蛋白表达载体构成。2.按权利要求1所述的基于靶向白细胞介素22的治疗肝损伤的纳米基因药物，其特征在于，所述的纳米材料选自DOTAP/Cholesterol，其中，DOTAP/Cholesterol：融合蛋白表达载体质量比为1：1-22：1。3.按权利要求1所述的基于靶向白细胞介素22的治疗肝损伤的纳米基因药物，其特征在于，所述的表达载体为上游引入Kozak增强子序列pVAX1构成。4.按权利要求1所述的基于靶向白细胞介素22的治疗肝损伤的纳米基因药物，其特征在于，所述的白细胞介素22为人白细胞介素22原型及其突变型。5.按权利要求1所述的基于靶向白细胞介素22的治疗肝损伤的纳米基因药物，其特征在于，所述的融合蛋白其核苷酸序列如SEQIDNO:1所示；编码白细胞介素22的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示；编码载脂蛋白AI的核苷酸序列如SEQIDNO:3所示。6.制备靶向白细胞介素22的治疗肝损伤的纳米基因药物的方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：鞠佃文，陈伟，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：上海,31