三七皂苷Rb2和Rd2在抑制血小板活化、粘附和聚集功能中的应用制造技术

本发明专利技术公开了三七皂苷Rb2和Rd2在抑制血小板活化、粘附和聚集功能中的应用，血小板过度活化、粘附、聚集是引起动脉粥样硬化的重要过程，因此抑制血小板过度活化和聚集可以成为防治动脉粥样硬化性疾病和血栓性疾病的重要途径。三七皂苷Rb2或/和Rd2可以抑制ADP诱导的血小板活化和聚集，以及血小板的在纤维蛋白原表面的粘附和铺展，这可为临床疾病评估提供有益信息，在疾病治疗中有良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
三七皂苷Rb2和Rd2在抑制血小板活化、粘附和聚集功能中的应用
本专利技术属于生物医学领域，特别涉及三七皂苷Rb2和Rd2在抑制血小板活化、粘附和聚集功能中的应用。
技术介绍
动脉粥样硬化性心血管疾病的发病率和病死率逐年上升，已经成为威胁我国人民健康的主要问题。大量研究报道证实，血小板在动脉粥样硬化性心血管疾病中起着重要的作用，血小板粘附和聚集在动脉粥样硬化性心血管疾病的发生、发展以及转归中发挥着至关重要的作用。血小板是血液中最小的细胞，具有保持血管完整性并参与血栓形成防止血管损伤和血液流失的生理防御机制。但是，过多的血栓形成会阻碍血流，导致动脉粥样硬化性心血管疾病。因此，防止血小板粘附聚集功能已经成为防治动脉粥样硬化性疾病和血栓性疾病的重要靶标之一。三七属于五加科植物，是我国一味传统中药。三七具有活血化瘀、消肿定痛的功能。研究已证实三七皂苷是其发挥一系列功能的主要活性成分，到目前为止，已从三七总皂苷中分离出了70多种三七皂苷，在三七的根茎、花和叶等不同部位中，其皂苷类成分分布不同。大量体内外的实验显示不同的三七皂苷具有不同的生理功能。研究三七皂苷与血小板功能的关系，可为疾病评估提供有益信息，在疾病治疗中具有良好的应用前景。
技术实现思路
本专利技术的首要目的在于提供三七皂苷Rb2和Rd2在抑制血小板活化、粘附和聚集功能中的应用。本专利技术所采取的技术方案是：三七皂苷Rb2或/和Rd2在制备预防或治疗动脉粥样硬化药物中的应用。进一步的，所述预防或治疗动脉粥样硬化为预防或治疗动脉粥样硬化过程中血小板的活化或/和聚集。三七皂苷Rb2或/和Rd2在制备抑制血小板活化的药物中的应用。三七皂苷Rb2或/和Rd2在制备抑制激动剂诱导血小板活化的药物中的应用。进一步的，所述的激动剂为ADP。三七皂苷Rb2或/和Rd2在制备抑制血小板粘附或/和铺展功能的药剂中的应用。三七皂苷Rb2或/和Rd2在制备降低血小板在纤维蛋白原表面粘附或/和铺展的药剂中的应用。一种抑制血小板活化或/和聚集的药剂，其特征在于，该药剂中含有三七皂苷Rb2或/和Rd2。一种抑制血小板在纤维蛋白原表面粘附或/和铺展的药剂，其特征在于，该药剂中含有三七皂苷Rb2或/和Rd2。本专利技术的有益效果是：本专利技术发现三七皂苷Rb2和Rd2不仅可以抑制血小板活化和聚集，而且还可以抑制血小板在纤维蛋白原表面的粘附和铺展，证实了Rb2和Rd2具有防止动脉粥样硬化性疾病的可能性，这可为临床疾病评估提供有益信息，在疾病治疗中有良好的应用前景。附图说明图1是Rb2对血小板颗粒物CD62P释放的流式细胞图和统计图，negative为阴性对照，control为阳性对照，下同。图2是Rb2对血小板颗粒物CD63释放的流式细胞图和统计图。图3是Rb2对血小板颗粒物CD40L释放的流式细胞图和统计图。图4是Rb2对纤维蛋白原与血小板的结合的流式细胞图和统计图。图5是Rb2对血小板膜糖蛋白GPIIb/IIIa与血小板的结合(PAC-1)的流式细胞图和统计图。图6是Rd2对血小板颗粒物CD62P释放的流式细胞图和统计图。图7是Rd2对血小板颗粒物CD63释放的流式细胞图和统计图。图8是Rd2对血小板颗粒物CD40L释放的流式细胞图和统计图。图9是Rd2对纤维蛋白原与血小板的结合的流式细胞图和统计图。图10是Rd2对血小板膜糖蛋白GPIIb/IIIa与血小板的结合(PAC-1)的流式细胞图和统计图。图11是Rb2对血小板在纤维蛋白原表面粘附铺展的荧光显微图。图12是Rb2对血小板在纤维蛋白原表面粘附铺展的统计图。图13是Rd2对血小板在纤维蛋白原表面粘附铺展的荧光显微图。图14是Rd2对血小板在纤维蛋白原表面粘附铺展的统计图。图15是Rb2对2μMADP诱导的血小板聚集的影响。图16是Rd2对2μMADP诱导的血小板聚集的影响。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的说明。1.选择符合纳入标准的健康志愿者：①两周内未服用任何抗凝药物；②无每天饮用茶、咖啡和红酒的生活习惯；需同时符合以上两项。2.收集富血小板血浆(PRP)和纯化血小板采用一次性采血针进行肘静脉穿刺，抽取健康志愿者外周静脉血10mL，按9:1的体积比加入枸橼酸钠抗凝剂，轻轻混匀。1000rpm，室温离心10min获得富血小板血浆(PRP)，将PRP通过凝胶过柱，收集得到纯化的血小板。其中，用于激活血小板的激动剂为ADP。实施例1三七皂苷Rb2和Rd2对血小板表面颗粒物释放的影响方法：(1)取250mL的PRP，与不同浓度的Rb2或Rd2在37℃培养箱中共孵育40min；(2)用检测血小板颗粒物释放的特异性抗体FITC-conjugatedanti-humanCD62P、FITC-conjugatedanti-humanCD63和PE-conjugatedanti-humanCD40L与Rb2或Rd2干预后的PRP在室温下共同孵育30min；(3)使用血小板激动剂ADP激活2min后，用4％的多聚甲醛固定以终止反应，使用流式细胞仪检测血小板表面颗粒物CD62P、CD63和CD40L的表达。结果：如图1～图3所示，Rb2可以显著性的抑制ADP诱导的血小板表面颗粒物CD62P、CD63和CD40L的表达，而且随着Rb2的浓度越高，抑制表达的程度越显著；从图6～图8可知，Rd2可以显著性的抑制ADP诱导的血小板表面颗粒物CD62P、CD63和CD40L的表达，而且随着Rb2的浓度越高，抑制表达的程度越显著。实施例2三七皂苷Rb2和Rd2对纤维蛋白原与血小板的结合率、对血小板膜糖蛋白GPIIb/IIIa与血小板的结合(PAC-1)率的影响方法：(1)取250mL的PRP，与不同浓度(0、25、50以及100μg/mL)的Rb2或Rd2在37℃培养箱中共孵育40min；(2)用检测血小板活化的特异性抗体FITC-conjugatedanti-humanFibrinogen、FITC-conjugatedanti-humanPAC-1与Rb2或Rd2干预后的PRP在室温下共同孵育30min；(3)使用血小板激动剂ADP激活2min后，用4％的多聚甲醛固定以终止反应，使用流式细胞仪检测纤维蛋白原、血小板膜糖蛋白GPIIb/IIIa与血小板的结合率；结果：图4、图5、图9和图10的结果显示，Rb2和Rd2可以显著性的抑制100μMADP诱导的血小板表面纤维蛋白原、血小板膜糖蛋白GPIIb/IIIa与血小板的结合(PAC-1)率。实施例3三七皂苷Rb2和Rd2对血小板在纤维蛋白原表面的粘附和铺展的影响方法：(1)不同浓度的Rb2、Rd2分别与纯化的血小板在37℃培养箱中孵育40min，即为Rb2干预后的血小板以及Rd2干预后的血小板；(2)在玻片上铺展纤维蛋白原Fibrinogen(100μg/mL)过夜后，用BSA封闭；(3)然后分别加入经不同浓度的Rb2干预的血小板、Rd2干预的血小板铺展60min之后，加入鬼笔环肽488(1μg/mL)；(4)在荧光显微镜下观察血小板在Fibrinogen表面粘附情况，以及计算粘附铺展60min的血小板数量。结果：根据图11～14所示，Rb2和Rd2可以显著性的抑制血小板在纤维蛋白原表面的粘附和铺展，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.三七皂苷Rb2或/和Rd2在制备预防或治疗动脉粥样硬化药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.三七皂苷Rb2或/和Rd2在制备预防或治疗动脉粥样硬化药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述预防或治疗动脉粥样硬化为预防或治疗动脉粥样硬化过程中血小板的活化或/和聚集。3.三七皂苷Rb2或/和Rd2在制备抑制血小板活化的药物中的应用。4.三七皂苷Rb2或/和Rd2在制备抑制激动剂诱导血小板活化的药物中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的激...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨燕，万建波，李卿，陈彦球，覃楠，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：广东,44