The invention provides fluorescent PCR primers, probes and detection kits for identifying three sporotrichosis species. By comparing the genomes of Sporothrix globosa, Sporothrix schenckii and Sporothrix brasiliensis, the target sequences for identifying three species of Sporothrix and the multiplex fluorescent PCR primers and probes for the target sequences were screened, as shown in SEQ ID NO.1_2 and SEQ ID NO.3_5. Compared with the traditional triple fluorescent PCR detection system, the invention saves four amplified primers, effectively reduces the cross interference of primer probes in the system, improves the amplification efficiency and saves the detection cost. The sensitivity of the detection kit for Sporothrix globosa and Sporothrix schenckii can be as low as 10 copies, and there is no non-specific amplification for other common fungi and epidermal common bacteria. The detection kit has the advantages of accurate detection, high sensitivity, strong specificity, simple and fast, and has good sample detection ability.
【技术实现步骤摘要】
用于鉴别三种孢子丝菌的荧光PCR引物、探针及检测试剂盒
本专利技术涉及分子生物学领域,特别是涉及用于鉴别球形孢子丝菌、申克孢子丝菌和巴西孢子丝菌的多重荧光定量PCR引物和探针,本专利技术还涉及利用该引物和探针进行球形孢子丝菌、申克孢子丝菌和巴西孢子丝菌检测的方法和试剂盒。
技术介绍
孢子丝菌病(Sporotrichosis)是由双相真菌申克孢子丝菌复合体(Sporothrixschenckiicomplex)侵犯皮肤及皮下组织引起的慢性感染性疾病。病程长,皮损可固定于局部,或延淋巴管走行,严重者可通过血行系统播散,引起内脏器官的感染,也有报道称吸入的孢子可直接引起肺部感染。早期人们对申克孢子丝菌认识有限,认为其为单一物种。随着基因组学以及分子检测手段的不断发展,发现申克孢子丝菌是由多个亲缘种构成的复合体,其中球形孢子丝菌(Sporothrixglobosa)、申克孢子丝菌(Sporothrixschenckii)和巴西孢子丝菌(Sporothrixbransiliensis)是临床感染中最常见的致病菌,其余孢子丝菌多为环境菌株,对人基本不致病。球形孢子丝菌在我国主要分布在东北地区,尤其是吉林省,是孢子丝菌病的高发地区。申克孢子丝菌遍布全球,巴西孢子丝菌主要分布于巴西,国内少见报道。研究表明,孢子丝菌不同亲缘种之间在致病力及药物敏感性方面存在明显差异,因此在孢子丝菌病的诊断及治疗过程中,对病原菌鉴定到种是十分必要的。由于局部皮损真菌含量少,直接镜检阳性率较低,早期孢子丝菌的诊断主要依赖于组织病理及真菌培养。病理组织切片特殊染色,如过碘酸雪夫染色,六胺银染色可 ...
【技术保护点】
1.一种用于鉴别孢子丝菌的特异性探针组合,其含有三条特异性探针,所述特异性探针分别具有SEQ ID NO.3‑5所示的序列,所述孢子丝菌分别为球形孢子丝菌(Sporothrix globosa)、申克孢子丝菌(Sporothrix schenckii)和巴西孢子丝菌(Sporothrix bransiliensis)。
【技术特征摘要】
1.一种用于鉴别孢子丝菌的特异性探针组合,其含有三条特异性探针,所述特异性探针分别具有SEQIDNO.3-5所示的序列,所述孢子丝菌分别为球形孢子丝菌(Sporothrixglobosa)、申克孢子丝菌(Sporothrixschenckii)和巴西孢子丝菌(Sporothrixbransiliensis)。2.权利要求1所述的特异性探针组合在制备鉴别球形孢子丝菌(Sporothrixglobosa)、申克孢子丝菌(Sporothrixschenckii)和巴西孢子丝菌(Sporothrixbransiliensis)试剂盒或检测试剂中的应用。3.一种与权利要求1所述的特异性探针组合搭配使用的特异性引物对,其具有SEQIDNO.1-2所示的序列。4.一种用于鉴别孢子丝菌的荧光定量PCR特异性引物和探针组合,其特征在于,所述荧光定量PCR特异性引物的核苷酸序列如SEQIDNO.1-2所示;所述探针的核苷酸序列如SEQIDNO.3-5所示,且三条探针标记的荧光基团不相同;所述孢子丝菌分别为球形孢子丝菌(Sporothrixglobosa)、申克孢子丝菌(Sporothrixschenckii)和巴西孢子丝菌(Sporothrixbransiliensis)。5.权利要求4所述的荧光定量PCR特异性引物和探针组合在制备鉴别球形孢子丝菌(Sporothrixglob...
【专利技术属性】
技术研发人员:李福秋,张明瑞,吕莎,姚春丽,夏建新,牟妍,刘士瑞,周盈,
申请(专利权)人:吉林大学,
类型:发明
国别省市:吉林,22
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