当前位置: 首页 > 专利查询>中南大学专利>正文

一株海研站菌K4-1及应用制造技术

技术编号:20123891 阅读:22 留言:0更新日期:2019-01-16 13:13
本发明专利技术涉及微生物技术领域,具体涉及一株海研站菌Mesonia sp.K4‑1及其应用。所述Mesoniasp.K4‑1菌株已于2018年7月13日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC),保藏编号为CCTCC No.M 2018482。本发明专利技术的海研站菌Mesonia sp.K4‑1是一株具有耐盐特性的菌株,能够产耐盐胞外蛋白酶,经测定,该菌培养96h后,胞外蛋白酶活性达527.42U/mL,且该菌株高产胞外多糖,其胞外多糖在维持蛋白酶热稳定性中具有广泛应用前景。

A Strain K4-1 from Haiyan Station and Its Application

The invention relates to the field of microbial technology, in particular to a Haiyan station bacterium Mesonia sp. K4_1 and its application. The strain Mesoniasp.K4_1 was deposited in CCTCC on July 13, 2018, and its storage number is CCTCC No.M 2018482. Mesonia sp.K4_1 is a salt-tolerant strain, which can produce salt-tolerant extracellular proteinase. After 96 hours of culture, the activity of extracellular proteinase reaches 527.42U/mL, and the strain produces high extracellular polysaccharide. The extracellular polysaccharide of Mesonia sp.K4_1 has broad application prospects in maintaining the thermal stability of proteinase.

【技术实现步骤摘要】
一株海研站菌K4-1及应用
本专利技术涉及微生物
,具体涉及一株海洋来源的海研站菌Mesoniasp.K4-1及应用。
技术介绍
海洋占地球表面积的71%,其区域环境复杂多变,高盐、高压、低温等特殊区域生态环境使海洋微生物在物种、基因组成和生态功能上具有多样性。海洋微生物作为其中的重要的生物资源,种类丰富,数量庞大,在长期适应特殊的生活环境过程中具备独特生理生化功能或遗传体系,并可产生新的功能活性物质,如多肽、胞外多糖、蒽醌类衍生物。目前已经鉴定和研究出的海洋微生物尚不足其生物总量的5%,已发现的活性物质就更少,仅占总数的1%左右。海洋微生物与陆生生物存在着一定的差异,是发现新材料,新机制,新功能的重要来源,为进一步微生物资源的开发利用奠定基础。微生物蛋白酶以其易于大规模发酵和纯化等特点被人们视为工业蛋白酶的重要来源。在酱油发酵、泡菜腌制、鱼露风味形成等食品加工领域或污水处理、生物降解、皮革脱毛等工业领域都发挥着重要作用,但上述生产中的高盐环境成为限制蛋白酶应用的关键因素。比如我国制革所用原料在投产前需要用盐腌渍做预处理,蛋白酶活力的高低与在高盐环境下的稳定性直接影响并决定成品制革的质量。再如,鱼类加工工业生产中60%以上的副产品,如头部,皮肤,饰边,鳍,框架,内脏和粪便作为废物,而只有40%的产品部分适合人类食用。这种剩余的鱼类废物在全世界范围内造成环境污染威胁。然而,这些鱼类废弃物含有大量的蛋白质物质,可以转化为动物饲料,鱼粉和肥料等增值产品。此外,在豆制品发酵产生豆豉以及酱油的酿造过程中,其盐浓度通常极高。因此选育耐盐且高产蛋白酶的菌株显得尤为重要。利用海洋的高盐环境,选育噬盐性或耐盐性的菌株,利用其高产蛋白酶和在高盐环境下酶活较稳定的特点,满足工业化生产要求,提高经济效益。细菌胞外多糖是细菌的次级代谢产物,其种类繁多。作为一种新型发酵产品,已作为乳化剂、增稠剂、稳定剂、胶凝剂、悬浮剂和润滑剂等应用于石油、化工、食品、制药、环保和化妆品等多个领域。对于海洋微生物分泌的胞外多糖国内外已经有一些研究,但总体来看开发利用程度仍然很低,因此筛选营养要求低,多糖产量高,具独特性质的又适合工业化大规模发酵生产多糖具有十分重要的意义。制备并研究深海来源细菌所产胞外多糖的特征及性质,能进一步挖掘深海微生物胞外多糖的应用潜能,满足对海洋自然资源开发的迫切需要。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供一株海洋来源的海研站菌。该菌株营养要求低,耐盐且高产蛋白酶和多糖,应用前景非常广阔。本专利技术的海研站菌(Mesoniasp.K4-1),保藏编号为CCTCCNo.M2018482。该菌株分离自北极深海。该菌在2216E平板上培养96h后的菌落呈的菌落呈黄色,圆形,表面光滑半透明,边缘整齐;革兰氏染色为阴性,菌体杆状,无芽孢。海研站菌K4-1经生理生化测定,氧化酶试验为阴性,接触酶试验为阳性,卵磷脂酶实验为阴性,能水解明胶、酪蛋白,甲基红试验为阴性,V-P试验为阴性,H2S实验为阳性,硝酸盐还原测定为阴性。综合16SrDNA序列分析、生理生化特性分析,表明本专利技术属于海研站菌,命名为海研站菌Mesoniasp.K4-1,所述Mesoniasp.K4-1菌株已于2018年7月13日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC),保藏编号为CCTCCNo.M2018482。本专利技术的菌株是一株耐盐菌株。能够适应工业化生产时的高盐环境,应用潜力非常大。本专利技术的目的之二是提供所述的海研站菌在产胞外蛋白酶上的应用。进一步的,所述的海研站菌用于产耐盐胞外蛋白酶。进一步的,所述的所述的胞外蛋白酶用于催化酪蛋白水解。本专利技术的目的之三是提供所述的海研站菌在产胞外多糖上的应用。进一步的,所述的胞外多糖用于维持酶热稳定性,特别是蛋白酶热稳定性。进一步的,所述的胞外多糖用于维持胰蛋白酶热稳定性。进一步的,所述的胞外多糖在不超过50℃的条件下,用于维持胰蛋白酶稳定性。本专利技术的海研站菌,分类命名为Mesoniasp.K4-1,所述Mesoniasp.K4-1菌株已于2018年7月13日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC),地址:中国湖北省武汉市武汉大学,保藏编号为CCTCCNo.M2018482。本专利技术菌株能够产胞外蛋白酶,具有水解蛋白的功能。经测定,该菌培养96h后,蛋白酶活性达527.42U/mL,其蛋白酶在高盐和低盐环境中均有较高活性,对海洋来源蛋白酶的研究和在工业化生产中的应用具有重要价值。而且该菌株能够高产胞外多糖,且在保护蛋白酶热稳定性中具有明显作用。附图说明图1.海研站菌Mesoniasp.K4-1的扫描电镜照片(100000倍);图2.海研站菌Mesoniasp.K4-1及部分相关菌株依据16SrDNA序列构建的系统发育树;图3.在不同盐度下海研站菌Mesoniasp.K4-1的生长曲线;图4.发酵培养不同时间的海研站菌Mesoniasp.K4-1产胞外蛋白酶活性;图5.不同盐浓度条件下海研站菌Mesoniasp.K4-1蛋白酶的酶活力;图6.海研站菌Mesoniasp.K4-1胞外蛋白酶的耐盐稳定性;图7.发酵培养不同时间的海研站菌Mesoniasp.K4-1胞外多糖产量;图8.海研站菌Mesoniasp.K4-1胞外多糖对K4-1胞外蛋白酶在50℃孵育的热稳定性保护;图9.海研站菌Mesoniasp.K4-1胞外多糖对胰蛋白酶在40℃孵育的热稳定性保护;图10.海研站菌Mesoniasp.K4-1胞外多糖对胰蛋白酶在50℃孵育的热稳定性保护。具体实施方式以下结合说明书附图和具体实施例进一步解释本专利技术,但不对本专利技术构成任何限定。以下实施例中除特殊说明外,均为本领域常规试剂和方法步骤。实施例1海洋细菌K4-1的分离样品的处理:称取保存于4℃的沉积物样品10g,置于100ml灭过菌的人工海水锥形瓶中,制备成质量分数为10%的样品悬液,在180rpm转速下振荡30min静置30s,将悬浮液进行梯度稀释,稀释倍数分别为10-1,10-2,10-3,10-4,10-5,10-6,10-7,从稀释倍数10-5,10-6,10-7的液体中分别取200μl在2216E固体培养基平板上涂布,每个稀释倍数设置三个重复,然后置于16℃恒温箱中静置培养。待各个菌落长好后,反复平板划线,分离纯化,最终得到菌株K4-1。实施例2菌株K4-1生物学性状及生理生化和分子鉴定S1.形态特征:菌株K4-1在扫描电镜下的形态见图1,该菌株在2216E固体培养基平板培养96h菌落形态为:菌落呈黄色,圆形,表面光滑半透明,边缘整齐;革兰氏染色为阴性,菌体杆状,无芽孢。S2.生理生化特征:本专利技术的菌株K4-1经生理生化测定,氧化酶试验为阴性,接触酶试验为阳性,卵磷脂酶实验为阴性,能水解明胶、酪蛋白,甲基红试验为阴性,V-P试验为阴性,H2S实验为阳性,硝酸盐还原测定为阴性。见表1。表1海研站菌K4-1生理生化特征注:+,阳性;-,阴性;Y,黄色;R,杆状S3.菌株K4-1的16SrDNA的序列测定与分析S31.PCR模板DNA的快速制备:将菌株K4-1划线接种在2216E培养基的平板上,16℃培养过夜。取单一菌落悬浮于10mLddH2O中,沸水浴加热5min,离心,本文档来自技高网
...

【技术保护点】
1.一株海研站菌(Mesonia sp.)K4‑1,保藏编号为CCTCC No.M 2018482。

【技术特征摘要】
1.一株海研站菌(Mesoniasp.)K4-1,保藏编号为CCTCCNo.M2018482。2.根据权利要求1所述的海研站菌,其特征在于,氧化酶试验为阴性,接触酶试验为阳性,卵磷脂酶实验为阴性,能水解明胶、酪蛋白,甲基红试验为阴性,V-P试验为阴性,H2S实验为阳性,硝酸盐还原测定为阴性。3.根据权利要求1所述的海研站菌,其特征在于,是一株耐盐菌株。4.权利要求1或2或3所述的海研站菌的应用,其特征在于,用于产胞外蛋白酶。5.根据权利要求4所述的海研站菌的应用,其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员:何海伦宦冉黄嘉丰王猛吴日帮刘丹易翠平
申请(专利权)人:中南大学
类型:发明
国别省市:湖南,43

网友询问留言 已有0条评论
  • 还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。

1