富硒酵母菌株CM022及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株富硒酵母菌株CM022及其应用，专门针对富硒莴苣生产而开发。由于是经过酵母菌降解而制备的有机硒和单质硒，完全没有因剧毒无机硒的使用所带来的一系列问题，因而有利于蔬菜的无公害生产，而且减少无机硒的残留和对环境的破坏。使用富硒酵母菌剂CM022，可显著提高莴苣的硒含量到53‑55 ug kg

Selenium-enriched yeast strain CM022 and its application

The invention discloses a selenium-enriched yeast strain CM022 and its application, which is specially developed for the production of selenium-enriched lettuce. Because organic selenium and elemental selenium are prepared by yeast degradation, there is no series of problems caused by the use of highly toxic inorganic selenium, which is conducive to the pollution-free production of vegetables and reduces the residual of inorganic selenium and environmental damage. Using selenium-enriched yeast CM022 could significantly increase the selenium content of lettuce to 53 55 UG kg.

【技术实现步骤摘要】
富硒酵母菌株CM022及其应用
本专利技术属于农业微生物领域，涉及富硒酵母菌株CM022及其应用。
技术介绍
硒元素是人和动植物生命活动不可或缺的微量元素，是人体内组成谷胱甘肽过氧化物酶的重要元素。研究表明硒元素具有抗癌作用，人体的免疫能力与体内血硒浓度呈现正相关。硒在自然界的含量很低，世界上有40多个国家和地区属于缺硒地区，我们国家缺硒地区达到了72%，甚至有30%的地区属于严重缺硒。同时，硒元素在大自然中常常以无机态形式存在，而无机态的硒是有较强毒性的，例如亚硒酸钠，LD50(大鼠经口)为7mg/kg，成人口服1g即可致死；无机态的硒植物吸收效率低，还会对环境造成污染。硒在自然界的另一种存在形式为有机硒，有机硒的毒性低，吸收率高，且对环境污染小。而正常食物中有机硒的含量极低，无法满足人体对硒的需求。如何将无机硒高效转化为有机硒、并在农业上加以利用，显得尤为重要和迫切。自然界存在对无机硒具有代谢能力的微生物类群，这类微生物可以将无机硒高效转化成可供人体和动植物利用的有机态的硒蛋白、硒核酸、硒多糖。因此，有益菌常被用来运用于工业富硒以及农业富硒，生产富硒肥料。富硒酵母菌剂的应用，可以增加农作物中的有机硒含量、提高作物抗性和产量、减轻无机硒产品的环境污染，具有很好的应用前景。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术中缺乏能够高效转化有机硒的、可用于富硒农产品生产的微生物菌剂的现状，提供一种富硒酵母菌株CM022及其应用。本专利技术的目的可通过如下技术方案实现：一株富硒酵母菌株CM022，经鉴定该菌属于大隐球酵母（Cryptococcusmagnus），2017年9月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCCNo.14646。本专利技术的另一目的是提供富硒酵母菌株CM022制备的富硒酵母菌剂。富硒酵母菌株CM022用于制备富硒酵母菌剂的方法为：在YPDA培养基内加入700ug/mL浓度的亚硒酸钠。倒板冷却后将实验室保存的酵母菌株在平板上划线，28℃恒温培养箱活化培养24h，菌落颜色由白色变为粉红色或者血红色。在灭菌后的YPD培养基中，将活化好的酵母菌株转接到YPD培养基内，28℃振荡培养8h后，添加亚硒酸钠至700ugmL-1，继续振荡培养16h，菌液由淡黄色变为粉红至血红色，得到富硒酵母菌剂。当然，利用所述的富硒酵母菌株CM022制备富硒酵母菌剂并不限于以上方法。凡是能够大量培养CM022，且保持其富硒活性的方法均可用于制备本专利技术请求保护的富硒酵母菌剂。所述的保藏号为CGMCCNo.14646的酵母菌株CM022种子菌液制备方法为：将保藏号为CGMCCNo.14646的酵母菌株CM022菌株接种到YPD培养液中28℃培养180rpm振荡培养至600nm处的OD值为1.0时结束培养。本专利技术的另一目的是提供该菌株的应用。所述的保藏号为CGMCCNo.14646的酵母菌株CM022在制备富硒酵母菌剂中的应用。所述的富硒酵母菌剂稀释100-200倍后在温室种植莴苣植株上喷雾处理，15天为一个间隔周期共处理2次，收获时进行取样、并测定硒含量。富硒酵母菌剂CM022可显著提高莴苣的硒含量到55ugkg-1，达到国家富硒蔬菜产品标准。有益效果：本专利技术是专门针对富硒莴苣生产而开发的富硒酵母菌剂，富硒菌剂的有机硒代谢效率可达90.92%。由于是经过酵母菌降解而制备的有机硒和单质硒，完全没有因剧毒无机硒的使用所带来的一系列问题，因而有利于蔬菜的无公害生产，而且减少无机硒的残留和对环境的破坏。小区试验表明：该酵母菌株CM022（CGMCCNo.14646）能显著提高莴苣中硒的含量。使用富硒酵母菌剂CM022，可显著提高莴苣的硒含量到53-55ugkg-1，达到国家富硒蔬菜产品标准。具体实施方式实施例1生物样品保藏信息一种富硒酵母菌株CM022，分类命名为Cryptococcusmagnus，于2017年9月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，菌种保藏号为CGMCCNo.14646。筛选方法：大隐球酵母菌株CM022（CGMCCNo.14646）由江苏省淮安市清江浦区莴苣叶片上分离得到。将莴苣叶片切成1cm的小片，用1%的次氯酸钠浸泡5min，70%酒精浸泡1-2min，无菌水清洗3次（取最后一次清洗的溶液100μl涂于YPDA固体培养基上培养，若48h后无菌生长则认为表面消毒干净，无菌）。取5g消毒好的样品置于菌研钵中，加入27ml无菌的0.85%NaCl，浸软组织，研磨，用无菌的0.85%NaCl梯度稀释。取10-1、10-2和10-3三个梯度的稀释液各100μl涂于YPDA上，28℃培养48h。挑取最大的单菌落接种到新鲜YPDA固体培养基，经反复转接得到纯化菌株。将纯化后的白色菌落分别在光学显微镜下镜检。镜检出细胞形状为圆形，并且明显看到生殖方式为出芽繁殖，能看到各种时期大小不同的芽孢的，就是酵母菌。纯化后的菌株用40%甘油保存于-70℃超低温冰箱中。鉴定方法：通过形态特征，生理生化实验和18SrRNA序列分析对该菌株进行鉴定。形态学特征：菌株细胞椭圆形,多边芽殖,没有假菌丝，菌落白色。大隐球酵母菌株CM022的18SITSrRNA基因序列（615bp）：gcggaaggatcattaatgaatttagattgaaccataggcgaaagccagtggttcttctttcatatccataacacctgtgcactgttggatgcttgcatccacttttaaactaaacattattgtaacaaatgtagtcttattataacataataaaactttcaacaacggatctcttggctctcgcatcgatgaagaacgcagcgaaatgcgataagtaatgtgaattgcagaattcagtgaatcatcgaatctttgaacgcaccttgcgctccttggtattccgaggagcatgcctgtttgagtgtcatgaaaccctcaaacccaagttttggatttcgatccatgcttgagtttggatttggatgtttgccggtgatgaaccgactcatcttaaaagtattagcttggatctgtctatatgactggtttgacttggcataataagtattttgctgaggacatcttcggatggccaggacctagactactgtctgctaactaaaccatcactttaagtgcatctttggatgttactcattgtgtaactttgacatctggcctcaaatcaagtaggactacccgctgaacttaagcatatcaaaagccgggaggaaa18SrRNA基因扩增和序列分析:大隐球酵母CM022在YPD培养基中28℃培养至对数期，以12000r/min离心5min收集菌体，采用天根生化科技(北京)有限公司的酵母基因组DNA提取试剂盒，提取酵母菌的基因组DNA，以提取的DNA产物为模板，使用18SrDNA序列的一对通用引物，正向引物为EF3：5'-TCCTCTAAATG本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株富硒酵母菌株CM022，经鉴定该菌属于大隐球酵母（Cryptococcus magnus），2017年 9月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC No.14646。

【技术特征摘要】
1.一株富硒酵母菌株CM022，经鉴定该菌属于大隐球酵母（Cryptococcusmagnus），2017年9月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCCNo.14646。2.权利要求1所述富硒酵母菌株CM022在生产富硒植物方面的应用。3.权利要求1所述富硒酵母菌株C...

【专利技术属性】
技术研发人员：王晓莉，王云鹏，王纪忠，赵婕如，王利国，
申请(专利权)人：淮阴工学院，
类型：发明
国别省市：江苏,32