甲状旁腺素试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种甲状旁腺素试剂盒及其制备方法，属于免疫诊断技术领域。解决了现有技术中甲状旁腺激素的方法或是精准度底，或是货价期短、操作复杂、测试结果不稳定、价格昂贵的技术问题。本发明专利技术的试剂盒，包括R1试剂、R2试剂和R3试剂；R1试剂为含有链霉亲和素磁颗粒的缓冲液Ⅰ，R2试剂为经缓冲液Ⅰ稀释的化学发光标记物标记的甲状旁腺素单克隆抗体溶液，R3试剂为经缓冲液Ⅰ稀释的偶联标记的甲状旁腺素单克隆抗体溶液。该试剂盒采用化学发光免疫分析法对甲状旁腺素进行检测，具有检测灵敏度高，定量检测准确，操作简单，无放射性风险及检测时间短，并且可以对抗原、抗体类目标物质进行检测的优点。

Parathyroid hormone kit and its preparation method

The invention relates to a parathyroid hormone kit and a preparation method thereof, belonging to the technical field of immunodiagnosis. The method of parathyroid hormone in the existing technology has solved the technical problems of low precision, short price period, complex operation, unstable test results and high price. The kit comprises R1 reagent, R2 reagent and R3 reagent, R1 reagent is a buffer containing streptavidin magnetic particles I, R2 reagent is a monoclonal antibody solution labeled with chemiluminescent marker diluted by buffer I, and R3 reagent is a coupling labeled monoclonal antibody solution diluted by buffer I. The kit uses chemiluminescence immunoassay to detect parathyroid hormone. It has the advantages of high sensitivity, accurate quantitative detection, simple operation, no radioactive risk and short detection time, and can detect antigen and antibody target substances.

【技术实现步骤摘要】
甲状旁腺素试剂盒及其制备方法
本专利技术属于免疫诊断
，具体涉及一种甲状旁腺素试剂盒及其制备方法。
技术介绍
甲状旁腺素(parathyoidhormone，PTH)在甲状旁腺内合成，并分泌到血液中。PTH(1-84)，也称为生物完整性PTH，是含有84个氨基酸的单链多肽，分子量约为9500道尔顿。PTH的半衰期只有几分钟，随后断裂为各种片段，并以极快的速度从血液循环中清除。通过检测生物全段PTH(1-84)可直接了解甲状旁腺的分泌活性。PTH的主要作用是增加血钙，这主要通过促进骨骼中钙的释放和远端小管中的肾再吸收作用来实现。PTH和降钙素的相互作用确保血钙浓度的稳定。高血钙浓度抑制PTH分泌，低血钙浓度则促进PTH分泌。PTH还能增进肾近端小管中1-α羟化酶的活性，促进维生素D活性代谢物1,25二羟-维生素D的合成，后者转而增加钙的肠吸收，并对甲状旁腺水平上的PTH分泌发挥内分泌反馈作用。PTH还可降低近端小管中的磷酸盐的肾再吸收，进而使血清磷减少。此外，PTH通过与成骨细胞PTH受体结合刺激骨骼生成，从而增强I型胶原蛋白的合成。这种促进骨合成代谢的作用现已在临床实践中用来治疗骨质疏松症。甲状旁腺功能障碍影响PTH分泌，会导致血钙浓度升高或降低(高钙血症或低钙血症)。甲状旁腺分泌功能下降(甲状旁腺机能减退)的探测要求高灵敏性检测，以便能测定PTH水平。甲状旁腺功能亢进会导致PTH分泌增加(甲状旁腺机能亢进)。其主要与甲状旁腺腺瘤有关。继发性甲状旁腺机能亢进血钙浓度降低，则是其他疾病造成(如维生素D缺乏)。目前，评估甲状旁腺机能亢进时，PTH和钙浓度的测定更为重要。术中使用的临床研究原发性甲状旁腺机能亢进，肾衰有关的继发性甲状旁腺机能亢进，以及肾移植手术后第三型甲状旁腺机能亢进的甲状旁腺腺瘤切除术中PTH测定也已经有报道。因为PTH的半衰期仅为3-5min，所以切除异常腺体后PTH浓度明显降低，这样外科医生通过测定PTH就能评估切除是否完整以及全部分泌功能亢进的甲状旁腺组织是否已完全从患者身上切除。目前测定甲状旁腺激素的方法主要是联免酶疫吸附法(EIA)和放射免疫分析法(RIA)。但二者在实际应用中都均存在一些固有缺陷，其中，酶联免疫吸附法操作繁琐，且酶容易失活，结果受人为因素影响结果较大，难以精确定量。放射免疫分析法则有放射性污染，标记物的货价期短、操作复杂、测试结果不稳定，且所需仪器较昂贵。有鉴于此，有必要提供一种作简单、精准定量、无污染、灵敏度高的甲状旁腺激素的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是解决现有技术中甲状旁腺激素的方法或是精准度底，或是货价期短、操作复杂、测试结果不稳定、价格昂贵的技术问题，提供一种甲状旁腺素试剂盒及其制备方法。本专利技术解决上述技术问题采取的技术方案如下：本专利技术提供的甲状旁腺素试剂盒，包括R1试剂、R2试剂和R3试剂；所述R1试剂为含有链霉亲和素磁颗粒的缓冲液Ⅰ，R1试剂中链霉亲和素磁颗粒的浓度为0.007％～1％；所述R2试剂为经缓冲液Ⅰ稀释的化学发光标记物标记的甲状旁腺素单克隆抗体溶液，R2试剂中化学发光标记物标记的甲状旁腺素单克隆抗体的浓度为0.1～1.0μg/mL；所述R3试剂为经缓冲液Ⅰ稀释的偶联标记的甲状旁腺素单克隆抗体溶液，R3试剂中偶联标记的甲状旁腺素单克隆抗体的浓度为0.7～2.0μg/ml；所述缓冲液Ⅰ由50～200mM的吗啉乙磺酸(MES)、bistris丙烷或柠檬酸，0.05％～0.1％的稳定剂和0.01～0.1％的防腐剂组成，PH为6.0～6.5。优选的是，所述链霉亲和素磁颗粒的粒径是0.05～1μm。优选的是，所述化学发光标记物标记的甲状旁腺素单克隆抗体中，甲状旁腺素单克隆抗体与化学发光标记物的标记的摩尔比为1:(3～20)；化学发光标记物为吖啶酯或三联吡啶钌。优选的是，所述偶联标记的甲状旁腺素单克隆抗体中，甲状旁腺素单克隆抗体与偶联标记物的标记摩尔比为1:(5～20)；偶联标记物为生物素。优选的是，所述稳定剂为吐温。优选的是，所述防腐剂为NaN3或ProClin300。优选的是，该试剂盒中还包括甲旁腺素校准品；所述甲状旁腺素校准品包括浓度分别为0pg/mL、10pg/mL、60pg/mL、300pg/mL、1500pg/mL、3500pg/mL的甲状旁腺素溶液。优选的是，该试剂盒中还包括化学发光预激发液A和化学发光激发液B；所述化学发光激发液A为硝酸溶液；所述化学发光激发液B为氢氧化钠溶液。优选的是，该试剂盒中还包括清洗液；所述清洗液为磷酸缓冲液。本专利技术还提供上述甲状旁腺素试剂盒的制备方法，包括以下步骤：步骤一、制备R1试剂将链霉亲和素磁颗粒溶液加入TBST溶液中，充分混匀后，放置于磁分离器上，直至上清无混浊，弃上清，留取磁颗粒，使用缓冲液Ⅰ清洗磁颗粒后，再用缓冲液Ⅰ配成磁颗粒浓度为0.007％～1％的固相试剂，即为R1试剂；步骤二、制备R2试剂先将甲状旁腺素单克隆抗体放入离心管中，保证甲状旁腺素单克隆抗体位于离心管底部位置后加入碳酸缓冲液，充分混匀，混匀后加入化学发光标记物的DMF溶液，用离心机室温条件下离心0.5min；然后将离心管用封口膜密封后放入避光暗盒中，将暗盒放入气浴恒温振荡器中混匀，加入赖氨酸封闭液，放入气浴恒温振荡器中混匀，封闭0.5～1h；再将封闭好的甲状旁腺素单克隆抗体上葡聚糖凝胶G250柱纯化，用磷酸缓冲液洗脱，分别收集；最后将收集好的甲状旁腺素单克隆抗体溶液用缓冲液Ⅰ稀释至终浓度为0.1～1.0μg/mL，即为R2试剂；步骤三、制备R3试剂取甲状旁腺素单克隆抗体，用pH为6.0～6.5的TRIS缓冲液透析纯化后加入已活化的长链磺化生物素，2～8℃反应1～2h，再转入室温继续反应30～40min，最后加入赖氨酸反应30～40min，反应液脱盐柱纯化，加入缓冲液Ⅰ稀释至终浓度为0.7～2.0μg/ml，即为R3试剂。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术的甲状旁腺素试剂盒采用化学发光免疫分析法对甲状旁腺素进行检测，具有检测灵敏度高，定量检测准确，操作简单，无放射性风险及检测时间短，并且可以对抗原、抗体类目标物质进行检测的优点，具体来讲：1、本专利技术的甲状旁腺素试剂盒采用顺磁性链霉亲和素磁颗粒微粒作为固相载体，其比表面积大，提高了检测的灵敏度；且本专利技术的甲状旁腺素试剂盒与化学发光免疫检测仪器组成封闭系统，降低了人为操作的误差，进一步提高了整个系统的灵敏度与准确度；2、本专利技术的甲状旁腺素试剂盒与检测样品所形成的抗原抗体复合物，稳定性佳，且分别由化学发光标记物(吖啶酯)标记的抗体及偶联标记(生物素标记)的抗体进行检测，增加了发光率的同时扩大了反应级，大大提高了试剂的特异性及检测速度，经验证，该试剂盒从检测到出结果只需20min；3、本专利技术的甲状旁腺素试剂盒可直接用于全自动生化分析仪上，无需大型仪器设备配合，成本低，且无放射性污染，可大规模的开展和推广。附图说明图1为本专利技术实施例1的甲状旁腺素试剂盒的反应校准曲线。图2为本专利技术实施例2的甲状旁腺素试剂盒的反应校准曲线。图3为本专利技术实施例3的甲状旁腺素试剂盒的反应校准曲线。具体实施方式为了进一步理解本专利技术，下面结合实施例对本专利技术优选实施方案进行描述，但是应当理解，这些描本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.甲状旁腺素试剂盒，其特征在于，包括R1试剂、R2试剂和R3试剂；所述R1试剂为含有链霉亲和素磁颗粒的缓冲液Ⅰ，R1试剂中链霉亲和素磁颗粒的浓度为0.007％～1％；所述R2试剂为经缓冲液Ⅰ稀释的化学发光标记物标记的甲状旁腺素单克隆抗体溶液，R2试剂中化学发光标记物标记的甲状旁腺素单克隆抗体的浓度为0.1～1.0μg/mL；所述R3试剂为经缓冲液Ⅰ稀释的偶联标记的甲状旁腺素单克隆抗体溶液，R3试剂中偶联标记的甲状旁腺素单克隆抗体的浓度为0.7～2.0μg/ml；所述缓冲液Ⅰ由50～200mM的吗啉乙磺酸、bistris丙烷或柠檬酸，0.05％～0.1％的稳定剂和0.01～0.1％的防腐剂组成，PH为6.0～6.5。

【技术特征摘要】
1.甲状旁腺素试剂盒，其特征在于，包括R1试剂、R2试剂和R3试剂；所述R1试剂为含有链霉亲和素磁颗粒的缓冲液Ⅰ，R1试剂中链霉亲和素磁颗粒的浓度为0.007％～1％；所述R2试剂为经缓冲液Ⅰ稀释的化学发光标记物标记的甲状旁腺素单克隆抗体溶液，R2试剂中化学发光标记物标记的甲状旁腺素单克隆抗体的浓度为0.1～1.0μg/mL；所述R3试剂为经缓冲液Ⅰ稀释的偶联标记的甲状旁腺素单克隆抗体溶液，R3试剂中偶联标记的甲状旁腺素单克隆抗体的浓度为0.7～2.0μg/ml；所述缓冲液Ⅰ由50～200mM的吗啉乙磺酸、bistris丙烷或柠檬酸，0.05％～0.1％的稳定剂和0.01～0.1％的防腐剂组成，PH为6.0～6.5。2.根据权利要求1所述的甲状旁腺素试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素磁颗粒的粒径是0.05～1μm。3.根据权利要求1所述的甲状旁腺素试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物标记的甲状旁腺素单克隆抗体中，甲状旁腺素单克隆抗体与化学发光标记物的标记的摩尔比为1:(3～20)；化学发光标记物为吖啶酯或三联吡啶钌。4.权利要求1所述的甲状旁腺素试剂盒，其特征在于，所述偶联标记的甲状旁腺素单克隆抗体中，甲状旁腺素单克隆抗体与偶联标记物的标记摩尔比为1:(5～20)；偶联标记物为生物素。5.根据权利要求1所述的甲状旁腺素试剂盒，其特征在于，所述稳定剂为吐温。6.根据权利要求1所述的甲状旁腺素试剂盒，其特征在于，所述防腐剂为NaN3或ProClin300。7.根据权利要求1所述的甲状旁腺素试剂盒，其特征在于，该试剂盒中还包括甲旁腺素校准品；所述甲状旁腺素校准品包括浓度分别为0pg/mL、10pg/mL、60pg/mL、300pg/mL、1500...

【专利技术属性】
技术研发人员：高智玲，李冬梅，高威，孙成艳，何浩会，
申请(专利权)人：迪瑞医疗科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林,22