本发明专利技术属于药物分析领域，具体公开了一种盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物对映异构体的HPLC检测方法，该方法使用以纤维素‑三（4‑氯‑3‑甲基苯基氨基甲酸酯）涂覆硅胶为填充剂的手性色谱柱，并以水和腈类混合溶液作为流动相，柱温为10~20℃，流速为0.4~0.6ml/min，波长为250~260nm。本发明专利技术实现了对盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物四种异构体的有效分离，检测结果准确性好、灵敏度高、操作简便、成本低，分析时间短，为盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物的质量控制提供了保障。
A method for determination of isomers of valganciclovir hydrochloride intermediate condensate by high performance liquid chromatography
The invention belongs to the field of pharmaceutical analysis, and specifically discloses an HPLC method for the determination of enantiomers of valganciclovir hydrochloride intermediate condensate. The method uses a chiral chromatographic column coated with Cellulose 3 (4 chloro 3 methyl phenyl carbamate) as a filler, and a mixture of water and nitrile as a mobile phase with column temperature of 10 ~20 C and flow rate of 0.4~0.6ml/min. The wavelength ranges from 250 to 260 nm. The invention realizes the effective separation of four isomers of valganciclovir hydrochloride intermediate condensate, and has the advantages of good accuracy, high sensitivity, simple operation, low cost, short analysis time, thus providing guarantee for the quality control of valganciclovir hydrochloride intermediate condensate.
【技术实现步骤摘要】
一种盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物异构体的HPLC检测方法
本专利技术属于药物分析领域，具体涉及一种盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物异构体的HPLC检测方法。
技术介绍
盐酸缬更昔洛韦是一种疱疹病毒DNA的合成抑制剂，由瑞士Roche公司研发，2010年在瑞典和芬兰作为处方药首次上市，用于治疗获得性免疫缺陷综合症(AIDS)患者的巨细胞病毒(CMV)视网膜炎及预防高危实体器官移植患者的CMV感染。2001年3月获准美国FDA许可，2001年5月首次在美国上市销售。国内外的多项研究显示，盐酸缬更昔洛韦片药理作用明显，作用机制较新颖，毒性低，不良反应少，临床疗效显著，患者顺应性高，应用安全。中间体缩合物是盐酸缬更昔洛韦合成过程中的关键中间体，中文化学名称为3-乙酰氧基-2-((2-氨基-6-氧代-1H-嘌呤-9(6H)-基)甲氧基)丙基2-((苄基氧基)羰基)氨基-3-甲基丁酸酯，英文名称为2-Benzyloxycarbonylamino-3-methyl-butyricacid3-acetoxy-2-(2-amino-6-oxo-1,6-dihydro-purin-9-ylmethoxy)-propylester，分子量为530.2，中间体缩合物及其对映异构体的结构式见表1。中间体缩合物的生成是手性中心生成的步骤，属于质量控制的关键步骤，中间体缩合物经过水解、氢化、成盐后即可得到盐酸缬更昔洛韦。对于盐酸缬更昔洛韦，目前美国药典中规定其非对映异构体比例范围为45:55～55:45，其对映异构体的含量不得超过3.0％，所以在合成过程中，开发具有专属性的方法来检测中间体缩合物四种异构体构型的纯度，并制定合理可行的非对映异构体比例范围和对映异构体杂质限度，是中间体缩合物质量控制的重要部分，也是保证盐酸缬更昔洛韦及其制剂产品质量的重要部分。表1中间体缩合物及其对映异构体结构式通过查阅大量中外专利与非专利文献，目前还没有采用手性色谱柱高效液相色谱的方法来检测中间体缩合物四种异构体纯度的文献报道，不利于企业对产品质量的把控。
技术实现思路
为了解决目前存在的技术问题，本专利技术通过大量理论调研和实验探索，提供了一种分离分析盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物四种手性构型的方法，从而更好地控制盐酸缬更昔洛韦产品质量。本专利技术提供的技术方案是：一种盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物异构体的HPLC检测方法：采用以纤维素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)涂覆硅胶为填充剂的手性色谱柱，以水和腈类化合物的混合溶液作为流动相对盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物四种手性构型进行分离测定，所述HPLC检测采用如下的色谱条件：流动相流速为0.4～0.6ml/min，色谱柱温度为10～20℃，检测器采用紫外检测器，检测波长为250～260nm。优选地，所述色谱柱为OX-3R4.6*150mm，填充剂粒径为3μm。优选地，所述流动相中，腈类化合物体积占流动相总体积的30～40％，最佳为37％。优选地，所述腈类化合物为乙腈。优选地，所述色谱柱温度为15℃。优选地，所述检测波长为254nm。优选地，所述流动相流速为0.5ml/min。优选地，进样量为10ul。进一步的，所述检测方法包括如下步骤：1.1用稀释剂配制待测品溶液；1.2将步骤1.1所得的待测品溶液注入到高效液相色谱仪的色谱柱中进行检测；所述稀释剂为体积比1：1的水-乙腈混合溶液。本专利技术与现有技术相比具有以下优点和积极效果：1.本专利技术的方法实现了对盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物四种异构体的有效分离和检测，因此本专利技术的检测方法能够更好地实现对中间体缩合物和成品盐酸缬更昔洛韦的质量控制，提高最终产品的品质，保证了其临床用药的安全有效。2.本专利技术的检测方法准确度高(3个级别9份样品的回收率平均值为99.5％，RSD为1.86％)、灵敏度高(检测限为1.6ng)、操作简便、成本低、分析时间短，为产品的研发和生产提供了简便、稳定、可靠的分析检测方法。附图说明图1为实施例1实验(一)采用以纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)键合硅胶为填充剂的手性色谱柱，得到的D-缩合物、L-缩合物和缩合物混合对照品溶液的HPLC色谱图；图2为实施例1实验(二)采用硅胶表面涂敷有直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)手性柱，得到的D-缩合物、L-缩合物溶液的HPLC色谱图；图3为实施例1实验(三)采用硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯)手性柱，得到的D-缩合物、L-缩合物溶液的HPLC色谱图；图4为实施例1实验(四)采用纤维素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)涂覆硅胶手性柱，得到的D-缩合物对照品溶液的HPLC色谱图；图5为实施例1实验(四)采用纤维素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)涂覆硅胶手性柱，得到的L-缩合物对照品溶液的HPLC色谱图；图6为实施例1实验(四)采用纤维素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)涂覆硅胶手性柱，得到的D-缩合物和L-缩合物混合对照品溶液的HPLC色谱图；图7为实施例2中以水-乙腈(70:30，v/v)为流动相，得到的D-缩合物和L-缩合物混合对照品溶液的HPLC色谱图；图8为实施例2中以水-乙腈(63:37，v/v)为流动相，得到的D-缩合物和L-缩合物混合对照品溶液的HPLC色谱图；图9为实施例2中以水-乙腈(60:40，v/v)为流动相，得到的D-缩合物和L-缩合物混合对照品溶液的HPLC色谱图；图10为实施例3中20℃柱温得到的D-缩合物和L-缩合物混合对照品溶液的HPLC色谱图；图11为实施例3中10℃柱温得到的D-缩合物和L-缩合物混合对照品溶液的HPLC色谱图；图12为实施例4中0.4ml/min流速得到的D-缩合物和L-缩合物混合对照品溶液的HPLC色谱图；图13为实施例4中0.6ml/min流速得到的D-缩合物和L-缩合物混合对照品溶液的HPLC色谱图；图14为实施例5中UV-250nm检测波长得到的D-缩合物和L-缩合物混合对照品溶液的HPLC色谱图；图15为实施例5中UV-260nm检测波长得到的D-缩合物和L-缩合物混合对照品溶液的HPLC色谱图；图16为实施例6中D-缩合物和L-缩合物混合溶液的HPLC色谱图；图17～20为实施例6中各批次的缩合物样品检测的HPLC色谱图。具体实施方式为便于本领域技术人员理解本
技术实现思路
，下面结合具体实施例进一步描述本专利技术的技术方案，但以下内容不应以任何方式限制本专利技术权利要求书请求保护的范围。以下诸实施例中，所用仪器与试剂如下：仪器：Agilent1260或1200高效液相色谱仪。试剂：乙腈、正己烷均为色谱级；L-缩合物对照品和D-缩合物对照品为申请人根据常规技术自制。将更昔洛韦与CBZ-L-缬氨酸缩合得到L-缩合物对照品，L-缩合物继续进行反应，最终生成终产品经检测为盐酸缬更昔洛韦；将更昔洛韦与CBZ-D-缬氨酸缩合得到D-缩合物对照品，D-缩合物继续反应，最终生成终产品经检测为D-缬更昔洛韦。实施例1不同手性柱的分离分析盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物四种手性构型，步骤如下：(一)固定相：纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)键合硅胶；色谱柱：IC4.6*250mm，5um；色谱仪器：Agilent1200高效液相色谱仪；检测器及波本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物异构体的HPLC检测方法，其特征在于：采用以纤维素‑三（4‑氯‑3‑甲基苯基氨基甲酸酯）涂覆硅胶为填充剂的手性色谱柱，并以水和腈类化合物的混合溶液作为流动相对盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物四种手性构型进行分离测定，所述HPLC检测采用如下色谱条件：流动相流速为0.4~0.6ml/min，色谱柱温度为10~20℃，检测器采用紫外检测器，检测波长为250~260nm。
【技术特征摘要】
1.一种盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物异构体的HPLC检测方法，其特征在于：采用以纤维素-三（4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯）涂覆硅胶为填充剂的手性色谱柱，并以水和腈类化合物的混合溶液作为流动相对盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物四种手性构型进行分离测定，所述HPLC检测采用如下色谱条件：流动相流速为0.4~0.6ml/min，色谱柱温度为10~20℃，检测器采用紫外检测器，检测波长为250~260nm。2.如权利要求1所述盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物异构体的HPLC检测方法，其特征在于：所述流动相中，腈类化合物的体积占流动相总体积的30~40％。3.如权利要求2所述盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物异构体的HPLC检测方法，其特征在于：所述腈类化合物为乙腈。4.如权利要求3所述盐酸缬更昔洛韦中间体缩合物异构体的HPLC检测方法，其特征在于：所述色谱柱温度...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘俊，余再丹，柳旭，邓亚萍，邵振，周震，刘欣，
申请(专利权)人：湖北丽益医药科技有限公司，湖北科益药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42
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