The present application discloses a method for detecting 25_hydroxyvitamin D. The method includes: incubation of biological samples with first reagent and second reagent. The first reagent includes first and second magnetic particles in acid buffer solution. The first magnetic particle is a magnetic particle coated with chain enzyme affinity, and the second magnetic particle is a magnetic particle coated with the first magnetic particle. Different magnetic particles; the second reagent includes 25 hydroxyvitamin D antibody markers; further co-incubation with a third reagent including biotinylated 25 hydroxyvitamin D; separation of magnetic particles; and addition of luminescent substrates and detection of luminescent intensity. The method of the present invention is applicable to the detection of 25 hydroxyvitamin D in serum and plasma samples without additional sample processing reagents or additional sample processing steps.
【技术实现步骤摘要】
测定25-羟基维生素D的方法
本专利技术涉及血液样本中25-羟基维生素D的检测方法。
技术介绍
维生素D是一类脂溶性维生素,属于固醇类衍生物。维生素D主要功能是调节体内钙、磷代谢和维持血浆钙、磷水平的温度,并参与骨骼发育。维生素D家族主要包括维生素D1~D5,其中最重要的是维生素D2(麦角钙化醇)和维生素D3(胆钙化醇)。25-羟基维生素D是维生素D在肝脏中经干细胞微粒体的单氧酶系统的作用而形成的,是维生素D在体内的主要储存形式。血液中25-羟基维生素D的浓度能够反映人体内维生素D水平,是检测个体维生素D水平的最佳生化指标。25-羟基维生素D的传统检测方法有胶体金免疫层析法、酶联免疫吸附法和化学发光法等。其中化学发光法能够利用自动化设备进行检测,操作相对简便。中国专利申请CN106199016A提出来一种磁微粒化学发光免疫检测方法来检测血清中25-羟基维生素D。该方法用25-羟基维生素D单克隆抗体包被的羧基化磁微粒与样品中的25-羟基维生素D进行特异性结合,并且进一步加入维生素D衍生物标记的吖啶酯化学发光标记物进行竞争结合,最后通过测定发光强度来定量检测25-羟基维生素D的含量。该方法通过事先用标准25-羟基维生素D的样品测画出标准曲线,从而能够利用全自动化学发光免疫分析系统进行检测,具有较高的检测灵敏度和准确性。但是,血液中的25-羟基维生素D与维生素D结合蛋白具有高度亲和力,要检测人血中的总25-羟基维生素D浓度,需要将其从结合蛋白上解离下来,常用的解离剂一般为pH酸性。血浆样本比血清样本蛋白含量高,在pH酸性环境下会等电析出大量蛋白物质,特别是血浆纤 ...
【技术保护点】
1.一种检测25‑羟基维生素D的方法,所述方法包括:用第一试剂和第二试剂与生物样本共孵育,其中,所述第一试剂包括在酸性缓冲溶液中的第一磁微粒和第二磁微粒,其中,所述第一磁微粒是包被有链酶亲和素磁微粒,所述第二磁微粒是与所述第一磁微粒不同的磁微粒,且所述第二试剂包括25‑羟基维生素D抗体标记物;进一步加入包括生物素化的25‑羟基维生素D的第三试剂共孵育;分离第一和第二磁微粒;和加入发光底物并检测发光强度。
【技术特征摘要】
1.一种检测25-羟基维生素D的方法,所述方法包括:用第一试剂和第二试剂与生物样本共孵育,其中,所述第一试剂包括在酸性缓冲溶液中的第一磁微粒和第二磁微粒,其中,所述第一磁微粒是包被有链酶亲和素磁微粒,所述第二磁微粒是与所述第一磁微粒不同的磁微粒,且所述第二试剂包括25-羟基维生素D抗体标记物;进一步加入包括生物素化的25-羟基维生素D的第三试剂共孵育;分离第一和第二磁微粒;和加入发光底物并检测发光强度。2.根据权利要求1所述的方法,其中,在第一试剂中,所述第一磁微粒的浓度为0.1-1mg/mL,优选为0.1-0.4mg/mL,最优选为0.2mg/mL。3.根据权利要求1所述的方法,其中,所述第二磁微粒为表面被-COOH、-Tosyl、-NH2或-OH改性的磁微粒。4.根据权利要求1所述的方法,其中,在第一试剂中,所述第二磁微粒浓度为0.4-1mg/mL,优选为0.4-0.8mg/mL,最优选为0.6mg/mL。5.根据权利要求1-4中任意一项所述的方法,其中,所述第一试剂中,所述第二磁微粒与第一磁微粒的质量比为2:1-8:1,优选为2:1-4:1,最优选为3:1。6.根据权利要求1所述的方法,其中,所述第一试剂中的酸性缓冲溶液的pH值为3.00-6.00。7.根据权利要求1所述的方法,其中,所述第一试剂由pH为3.00-6.00的缓冲液、0.1-0.4mg/mL的所述第一磁微粒、0.4-0.8mg/mL的所述第二磁微粒组成;优选地,所述第一试剂由pH为4.5的0.2M的醋酸-醋酸钠缓冲液、粒径为1.5μm的0.2mg/mL的包被有链酶亲和素的所述第一磁微粒和粒径为1.5μm的0.6mg/mL的表面修饰有羧酸的所述第二磁微粒组成。8.根据权利要求1所述的方法,其中,所述第二试剂中的25-羟基维生素D抗体标记物为选自辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、吖啶酯和三联吡啶钌中的一种;优选地,所述25-羟基维生素D抗体标记物的在第二试剂中的浓度为50-200ng/mL,优选80-1...
【专利技术属性】
技术研发人员:李洪伟,吴国平,田君喜,
申请(专利权)人:迈克生物股份有限公司,
类型:发明
国别省市:四川,51
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