一种测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒及制备方法技术

技术编号:20094222 阅读:55 留言:0更新日期:2019-01-15 12:53
本发明专利技术涉及生物技术领域,尤其涉及一种载脂蛋白C‑Ⅱ浓度的试剂盒及制备方法。本发明专利技术采用的技术方案是:一种测定载脂蛋白C‑Ⅱ浓度的试剂盒,其特征在于:包括试剂R1和试剂R2,其中试剂R2中加入了生物素和链霉亲和素,且生物素结合载脂蛋白C‑Ⅱ抗体比例为2:1,链霉亲和素结合生物素‑载脂蛋白C‑Ⅱ抗体比例为1:1。本发明专利技术的优点是:本发明专利技术的测定载脂蛋白C‑Ⅱ浓度的试剂盒,采用级联放大反应,即载脂蛋白C‑Ⅱ抗体连接生物素1:2,再与链霉亲和素1:1混合反应,可明显改善重复性和灵敏度,线性范围可做到2‑100mg/L。

A Kit for Determining Apolipoprotein C-II Concentration and Its Preparation Method

The invention relates to the field of biotechnology, in particular to an apolipoprotein C_II concentration kit and a preparation method. The technical scheme of the invention is: a kit for determining apolipoprotein C_II concentration is characterized by: reagent R1 and reagent R2, in which biotin and streptavidin are added to reagent R2, and the ratio of biotin-bound apolipoprotein C_II antibody is 2:1, and the ratio of streptavidin-bound biotin and apolipoprotein C_II antibody is 1:1. The advantages of the present invention are as follows: the kit for the determination of apolipoprotein C_II concentration can obviously improve repeatability and sensitivity by cascade amplification reaction, i.e., the apolipoprotein C_II antibody is linked to biotin 1:2, and then mixed with streptavidin 1:1. The linear range can reach 2_100 mg/L.

【技术实现步骤摘要】
一种测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒及制备方法
本专利技术涉及生物
,尤其涉及一种测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒及制备方法。
技术介绍
载脂蛋白一般分为载脂蛋白A、载脂蛋白B、载脂蛋白C、载脂蛋白D、载脂蛋白E和载脂蛋白(a),每种又分为若干亚型。载脂蛋白的主要功能有:①维持脂蛋白的结构与脂类运输;②调控脂代谢有关酶的活性;③作为细胞表面脂蛋白受体的配体而参与脂蛋白的代谢。载脂蛋白C(apoC)是血浆中一组水溶性的低分子量蛋白质,包括四个亚类:载脂蛋白CⅠ、CⅡ、CⅢ和CⅣ,它们主要分布在极低密度脂蛋白(VLDL)、乳糜微粒(CM)和高密度脂蛋白(HDL)。载脂蛋白C-Ⅱ(apoCⅡ)可促进LPL催化乳糜微粒(CM)及极低密度脂蛋白(VLDL)中的甘油三酯(TG)水解为甘油和脂肪酸。它是冠心病的保护因子。载脂蛋白C-Ⅱ参与脂蛋白代谢的调节,尤其在调节血浆富含TG脂蛋白的分解代谢中起重要作用。高浓度的载脂蛋白C-Ⅱ将抑制富含TG脂蛋白的水解,或影响肝脏受体对富含TG脂蛋白的摄取,引起血浆TG水平升高,导致高TG血症的形成。载脂蛋白C-Ⅱ还可抑制卵磷脂胆固醇酰基转移酶的活性。目前采用的免疫透射比浊法测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒存在大量的非特异反应,且试剂应用的灵敏度和重复性差,已越来越不能满足使用要求。因此,应该提供一种新的技术方案解决上述问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是:提供一种灵敏度高,重复性好的一种测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒及制备方法。为实现上述目的,本专利技术采用的技术方案是:一种测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒,包括试剂R1和试剂R2,所述试剂R1的各组分及浓度包括:所述试剂R2的各组分及浓度包括:进一步的技术方案:所述试剂R1中的第一缓冲液A和第一缓冲液B为PBS缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸缓液中的一种或几种的组合。所述试剂R1中的防腐剂为叠氮钠、Proclin-950、Proclin-300、硫柳汞中的一种或几种的组合。所述试剂R2中第二缓冲液A和第二缓冲液B为PBS缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸缓液中的一种或几种的组合。所述试剂R2中稳定剂为牛血清白蛋白、酪蛋白、明胶、甘露醇中的一种或几种的组合。所述试剂R2中的助悬剂为葡萄糖、D-海藻糖、甘露醇、蔗糖、麦芽糖、乳糖、丙三醇中的一种或几种的组合。所述试剂R2中的防腐剂为叠氮钠、Proclin-950、Proclin-300、硫柳汞等中的一种。所述R1试剂pH在6.00-8.50之间,所述R2试剂pH在6.00-8.50之间。所述生物素结合载脂蛋白C-Ⅱ抗体比例为1:1-4:1之间,链霉亲和素结合生物素-载脂蛋白C-Ⅱ抗体比例为0.5:1-4:1之间。测定载脂蛋白C-Ⅱ的试剂盒的制备方法,包括如下步骤,A)、试剂R1制备;在配液罐中先加入适量纯化水于磁力搅拌器上,调节搅拌子至中档转速,使溶液保持中速转动状态,以0.8-3.2g/L标准,边搅拌边投入第一缓冲液A,以8.75-24.31g/L的标准投入第一缓冲液B,搅拌5-30分钟至物料完全溶解,溶液清澈透明配液罐底部无沉淀后,调节pH值到6.00-8.50之间,之后以5.8-20.0g/L标准,投入氯化钠,待物料完全溶解后再按照上述投料方式分别以40-120g/L、0.8%-2.0%的标准,依次投入PEG6000、Proclin-950,投料完成后,继续搅拌5-30分钟至全部物料完全溶解,溶液清澈透明,配液罐底部无沉淀,定容至最终体积;溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程,通过微孔滤膜过滤,过滤后的溶液存放在成品罐中,进行标识;B)、试剂R2制备;在配液罐中先加入适量纯化水于磁力搅拌器上,打开磁力搅拌器电源开关,调节搅拌子至中档转速,使溶液保持中速转动状态,以0.5-2.8g/L的标准,边搅拌边投入第二缓冲液A,以8.75-24.31g/L的标准,投入第二缓冲液B,注意不要让水溅出,搅拌5-30分钟至物料完全溶解,溶液清澈透明配液罐底部无沉淀后,调节pH值到6.00-8.50之间,之后以5.8-20.0g/L标准投入氯化钠,待物料完全溶解后再按照上述投料方式分别以1-10g/L、5-30g/L、0.8-2.0ml/L的标准依次投入稳定剂、助悬剂和第二防腐剂,投料完成后,继续搅拌5-30分钟至全部物料完全溶解,溶液清澈透明,配液罐底部无沉淀;烧杯中以5-20g/L的标准加入生物素于磁力搅拌器上,打开磁力搅拌器电源开关,调节搅拌子至中档转速,使溶液保持中速转动状态,以25-75ml/L的标准,边搅拌边加入载脂蛋白C-Ⅱ抗体,搅拌1-4h反应,反应结束后透析去除未结合的游离抗体,以5-20g/L标准加入链霉亲和素反应1-4h,反应结束后透析去除未结合的生物素-抗体;最后把偶联有链霉亲和素-生物素-载脂蛋白C-Ⅱ抗体加入配液罐中,继续搅拌5-30分钟至溶液清澈透明,配液罐底部无沉淀。溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程,通过微孔滤膜过滤,过滤后的溶液存放在成品罐中,进行标识。由于上述技术方案的应用,本专利技术与现有技术相比具有如下优点:本专利技术的测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒,在试剂R2中加入了生物素和链霉亲和素采用级联放大反应,即载脂蛋白C-Ⅱ抗体连接生物素1:2,再与链霉亲和素1:1混合反应,可明显改善重复性和灵敏度,线性范围可做到2-100mg/L。附图说明图1是本专利技术实施例4未采用级联放大反应R2试剂的定标曲线图。其中X轴表示标准品浓度,Y轴表示吸光度。图2是本专利技术实施例4采用级联放大反应R2试剂的定标曲线图。其中X轴表示标准品浓度,Y轴表示吸光度。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步描述:实施例1:一种测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒,包括试剂R1和试剂R2,所述试剂R1的各组分及浓度包括作为第一缓冲液A的二水合磷酸二氢钠,其浓度为0.8g/L,作为第一缓冲液B的十二水合磷酸氢二钠,其浓度为24.31g/L,作为第一电解质的氯化钠,其浓度为5.8g/L,作为第一高分子促进剂的PEG6000,其浓度为40g/L,以及作为第一防腐剂的Proclin-950,其浓度为2.0%,所述试剂R2的各组分及浓度包括作为第二缓冲液A的二水合磷酸二氢钠,其浓度为0.5g/L,作为第二缓冲液B的十二水合磷酸氢二钠,其浓度为23.4g/L,作为第二电解质的氯化钠,其浓度为5.8g/L,作为第二稳定剂的牛血清白蛋白,其浓度为10g/L,作为第二助悬剂的D-海藻糖,其浓度为5g/L,作为第二防腐剂的Proclin-950,其浓度为0.8ml/L,以及载脂蛋白C-Ⅱ抗体、链霉亲和素和生物素,这三者的浓度分别为25ml/L、5g/L和5g/L。以上测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒的制备方法,包括如下步骤,A)、试剂R1制备;在配液罐中先加入适量纯化水于磁力搅拌器上,调节搅拌子至中档转速,使溶液保持中速转动状态,边搅拌边投入浓度为0.8g/L二水合磷酸二氢钠和浓度为24.31g/L的十二水合磷酸氢二钠,搅拌5-30分钟至物料完全溶解,溶液清澈透明配液罐底部无沉淀后,调节pH值为6.00,之后投入浓度为5.8g/L的氯化钠,待物料完全溶解后,再按照上本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种测定载脂蛋白C‑Ⅱ浓度的试剂盒,其特征在于:包括试剂R1和试剂R2,所述试剂R1的各组分及浓度包括:

【技术特征摘要】
1.一种测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒,其特征在于:包括试剂R1和试剂R2,所述试剂R1的各组分及浓度包括:所述试剂R2的各组分及浓度包括:2.根据权利要求1所述的一种测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒,其特征在于:所述试剂R1和R2中的第一缓冲液A、第一缓冲液B、第二缓冲液A以及第二缓冲液B均为PBS缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸缓液中的一种或几种的组合。3.根据权利要求1所述的一种测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒,其特征在于:所述试剂R1中的防腐剂为叠氮钠、Proclin-950、Proclin-300、硫柳汞中的一种或几种的组合。4.根据权利要求2所述的一种测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒,其特征在于:所述第一缓冲液A和第二缓冲液A为二水合磷酸二氢钠,第一缓冲液B和第二缓冲液B为十二水合磷酸氢二钠。5.根据权利要求1所述的一种测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒,其特征在于:所述试剂R2中稳定剂为牛血清白蛋白、酪蛋白、明胶、甘露醇中的一种或几种的组合。6.根据权利要求1所述的一种测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒,其特征在于:所述试剂R2中的助悬剂为葡萄糖、D-海藻糖、甘露醇、蔗糖、麦芽糖、乳糖、丙三醇中的一种或几种的组合。7.根据权利要求1所述的一种测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒,其特征在于:所述试剂R2中的防腐剂为叠氮钠、Proclin-950、Proclin-300、硫柳汞等中的一种。8.根据权利要求1所述的一种测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒,其特征在于:所述R1试剂pH在6.00-8.50之间,所述R2试剂pH在6.00-8.50之间。9.根据权利要求1所述的一种测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒,其特征在于:所述生物素结合载脂蛋白C-Ⅱ抗体比例为1:1-4:1之间,链霉亲和素结合生物素-载脂蛋白C-Ⅱ抗体比例为0.5:1-4:1之间。10.如权利要求1-9任一测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒的制备方法,其特征在于:包括如下步骤,A)、试剂R1制备;在配液罐中先加入适量纯化水于磁力搅拌器上,调节搅拌子至中档转速...

【专利技术属性】
技术研发人员:袁嘉扬吴朝晖杜微微李磊
申请(专利权)人:苏州普瑞斯生物科技有限公司
类型:发明
国别省市:江苏,32

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