检测猪瘟病毒抗体的免疫层析试纸、试剂盒和用途制造技术

本发明专利技术提供了一种检测猪瘟病毒抗体的免疫层析试纸、试剂盒和用途，涉及生物技术领域，该检测猪瘟病毒抗体的免疫层析试纸，从加样端依次包被有捕捉抗体、检测抗原和质控抗体；其中，捕捉抗体为能够与猪源抗体结合的抗体，同时捕捉抗体经标记物标记；检测抗原包含猪瘟病毒的E0蛋白和E2蛋白；E0蛋白和E2蛋白为表达系统分别独立表达的蛋白；质控抗体为抗捕捉抗体抗体。该免疫层析试纸为实验筛猪、疫病流行学调查、疫苗效果评价和猪场猪瘟净化提供了新的高效的工具，缓解了现有技术中存在的缺乏一种能够检测E0和/或E2抗体的产品的问题。

Immunochromatographic Paper, Kit and Application for Detecting Antibody to CSFV*

The invention provides an immunochromatographic test paper, a kit and an application for detecting antibodies against classical swine fever virus, and relates to the field of biotechnology. The immunochromatographic test paper for detecting antibodies against classical swine fever virus is sequentially coated with antibody, antigen and quality control antibody. The antigen contained E0 and E2 proteins of classical swine fever virus; E0 and E2 proteins were expressed independently of the expression system; and quality control antibodies were anti-capture antibodies. The immunochromatography test paper provides a new and efficient tool for experimental screening of pig, epidemic investigation, evaluation of vaccine effect and purification of swine fever in pig farms. It alleviates the problem of lacking a product that can detect E0 and / or E2 antibodies in the existing technology.

【技术实现步骤摘要】
检测猪瘟病毒抗体的免疫层析试纸、试剂盒和用途
本专利技术涉及生物
，尤其是涉及一种检测猪瘟病毒抗体的免疫层析试纸、试剂盒和用途。
技术介绍
猪瘟(classicalswinefever，CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种高度接触性传染病，其主要特征是急性败血性变化，实质器官出血、坏死和梗死；慢性则呈纤维素性坏死性肠炎，后期常继发副伤寒及巴氏杆菌病。猪瘟是威胁养猪业的主要传染病之一，世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须报告的动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。在《国家中长期动物疫病防治规划(2012-2020)》中，猪瘟也被列为优先防控的重大动物疫病之一。现国内外检测猪瘟病毒E2抗体的方法有间接ELISA、阻断ELISA法，检测E0抗体的方法主要是间接ELISA法，但在实际生产中，以上方法费时费力，且要求有专业的技术人员、配套多种检测设备才能进行检测，很多养殖场不具备检测条件。此外，猪瘟病毒E2亚单位疫苗的问世，为猪瘟净化提供了疫苗支持，免疫该疫苗的猪仅会产生对病毒有中和作用的E2抗体，若检出E0抗体，则可判定猪只受到野毒感染。而市面上未见报道能够同时、快速检测E0、E2抗体的免疫层析试纸。因此一种能够同时快速检测猪瘟病毒E0和E2抗体的产品是市场需要的。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种检测猪瘟病毒抗体的免疫层析试纸，以缓解现有技术中存在的缺乏一种能够检测E0和/或E2抗体的产品的问题。本专利技术的第二目的在于提供一种用于检测猪瘟病毒抗体的试剂盒，该试剂盒包含上述免疫层析试纸。本专利技术的第三目的在于提供一种上述免疫层析试纸或试剂盒在筛选猪瘟病毒感染猪中的用途。本专利技术的第四目的在于提供一种筛选猪瘟病毒感染猪的方法，该方法利用上述免疫层析试纸或试剂盒，能够从免疫了猪瘟病毒E0亚单位疫苗或E2亚单位疫苗的猪中筛选出野毒感染的猪。为解决上述技术问题，本专利技术特采用如下技术方案：一种检测猪瘟病毒抗体的免疫层析试纸，所述免疫层析试纸从加样端依次包被有捕捉抗体、检测抗原和质控抗体；其中，所述捕捉抗体为能够与猪源抗体结合的抗体，同时所述捕捉抗体经标记物标记；所述检测抗原包含猪瘟病毒的E0蛋白和E2蛋白；E0蛋白和E2蛋白为表达系统分别独立表达的蛋白；所述质控抗体为抗捕捉抗体抗体。优选地，编码E0蛋白的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，编码E0蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示；编码E2蛋白的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示，编码E2蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.4所示。优选地，E0蛋白和E2蛋白分别独立的为昆虫细胞杆状病毒表达载体系统表达的蛋白。优选地，所述标记物包括胶体金、乳胶或荧光标记物；优选胶体金。优选地，所述捕捉抗体经胶体金标记；所述免疫层析试纸包括由金标探针膜制成的胶体金结合区和主要由层析检测膜制成的检测区；所述捕捉抗体包被于金标探针膜；所述检测抗原和所述质控抗体包被于层析检测膜；优选地，所述金标探针膜主要由聚酯膜或玻璃纤维膜制成；优选地，所述层析检测膜主要由PVDF膜或醋酸纤维素膜制成，优选醋酸纤维素膜。优选地，所述层析检测膜设置检测线TA和TB；检测线TA区域包被E0蛋白，检测线TB区域包被E2蛋白；优选地，检测线TA包被E0蛋白1-5μg；优选地，检测线TB包被E2蛋白1-5μg；优选地，检测线TA和TB的宽度分别独立的为1-4mm。优选地，所述免疫层析试纸还包括主要由样品垫制成的加样区和主要由吸水垫制成的吸水区；样品垫、金标探针膜、层析检测膜和吸水垫依次的相互部分重叠地固定于支撑板，组成免疫层析试纸。本专利技术还提供了一种检测猪瘟病毒抗体的试剂盒，该试剂盒包含上述免疫层析试纸；优选地，所述试剂盒还包括反应缓冲液、猪瘟病毒E2抗体阳性对照、快检比色卡和一次性定量移液管。本专利技术还提供了一种上述免疫层析试纸或上述试剂盒在筛选猪瘟病毒感染的猪中的用途。本专利技术还提供了一种筛选猪瘟病毒感染的猪的方法，所述方法包括检测猪的血清中是否存在猪瘟病毒E0和/或E2的抗体；若同时存在两种抗体则所述猪为被猪瘟病毒感染的猪；所述猪为经猪瘟病毒E0亚单位疫苗或E2亚单位疫苗免疫的猪；所述检测为使用上述免疫层析试纸或上述试剂盒检测。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术提供的检测猪瘟病毒抗体的免疫层析试纸，从加样端依次包被有捕捉抗体、检测抗原和质控抗体；其中，捕捉抗体为能够与猪源抗体结合的抗体，同时捕捉抗体经标记物标记；检测抗原包含猪瘟病毒的E0蛋白和E2蛋白；E0蛋白和E2蛋白为表达系统分别独立表达的蛋白；质控抗体为抗捕捉抗体抗体。该免疫层析试纸包括独立的E0和E2蛋白，因此可以确定待测样品中的猪瘟病毒抗体来源。由于能同时检测猪瘟病毒E0、E2两种抗体，因此在鉴别野毒感染的同时能评价疫苗免疫效果，为实验筛猪、疫病流行学调查、疫苗效果评价和猪场猪瘟净化提供了新的高效的工具。本专利技术还提供了一种用于检测猪瘟病毒抗体的试剂盒，该试剂盒包含上述免疫层析试纸，因此具有上述免疫层析试纸的所有有益效果，在此不再赘述。本专利技术还提供一种免疫层析试纸或试剂盒在检测猪瘟病毒抗体中的用途。上述免疫层析试纸或试剂盒可为区分野毒感染与猪瘟病毒E0或E2亚单位疫苗免疫鉴别诊断提供重要技术指标。本专利技术还提供了一种筛选猪瘟病毒感染猪的方法，其中猪为经猪瘟病毒E0亚单位疫苗或E2亚单位疫苗免疫的猪；该方法包括使用免疫层析试纸或试剂盒检测猪的血清中是否存在猪瘟病毒E0和/或E2的抗体；若同时存在两种抗体则所述猪为被猪瘟病毒感染的猪。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本专利技术实施例1提供的胶体金检测卡平面结构区域图；图2为本专利技术实施例1提供的胶体金检测卡组装前的纵切面结构图；图3为本专利技术实施例1提供的胶体金检测卡组装后的纵切面结构图及操作示范图；图4为本专利技术实施例1提供的胶体金检测卡结果判定参考示意图；图5为本专利技术实施例2提供的试剂盒中的快速比色卡。具体实施方式下面将结合附图对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。本专利技术提供了一种检测猪瘟病毒抗体的免疫层析试纸，该试纸从加样端依次包被有捕捉抗体、检测抗原和质控抗体；其中，捕捉抗体为能够与猪源抗体结合的抗体，同时所述捕捉抗体经标记物标记；检测抗原包含猪瘟病毒的E0蛋白和E2蛋白；E0蛋白和E2蛋白为表达系统分别独立表达的蛋白；质控抗体为抗捕捉抗体抗体。当待测样品从加样端流过捕捉抗体区域时，捕捉抗体可以和待测样品中的猪源抗体结合，形成猪源抗体-捕捉抗体-标记物复合物，当猪源抗体，例如猪瘟病毒E2抗体经捕捉抗体捕捉后，形本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测猪瘟病毒抗体的免疫层析试纸，其特征在于，所述免疫层析试纸从加样端依次包被有捕捉抗体、检测抗原和质控抗体；其中，所述捕捉抗体为能够与猪源抗体结合的抗体，同时所述捕捉抗体经标记物标记；所述检测抗原包含猪瘟病毒的E0蛋白和E2蛋白；E0蛋白和E2蛋白为表达系统分别独立表达的蛋白；所述质控抗体为抗捕捉抗体抗体。

【技术特征摘要】
1.一种检测猪瘟病毒抗体的免疫层析试纸，其特征在于，所述免疫层析试纸从加样端依次包被有捕捉抗体、检测抗原和质控抗体；其中，所述捕捉抗体为能够与猪源抗体结合的抗体，同时所述捕捉抗体经标记物标记；所述检测抗原包含猪瘟病毒的E0蛋白和E2蛋白；E0蛋白和E2蛋白为表达系统分别独立表达的蛋白；所述质控抗体为抗捕捉抗体抗体。2.根据权利要求1所述的免疫层析试纸，其特征在于，编码E0蛋白的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，编码E0蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示；编码E2蛋白的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示，编码E2蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.4所示。3.根据权利要求1所述的免疫层析试纸，其特征在于，E0蛋白和E2蛋白分别独立的为昆虫细胞杆状病毒表达载体系统表达的蛋白。4.根据权利要求1所述的免疫层析试纸，其特征在于，所述标记物包括胶体金、乳胶或荧光标记物；优选胶体金。5.根据权利要求1-4中任一项所述的免疫层析试纸，其特征在于，所述捕捉抗体经胶体金标记；所述免疫层析试纸包括由金标探针膜制成的胶体金结合区和主要由层析检测膜制成的检测区；所述捕捉抗体包被于金标探针膜；所述检测抗原和所述质控抗体包被于层析检测膜；优选地，所述金标探针膜主要由聚酯膜或玻璃纤维膜制成；优选地，所述层析检测膜主要由PVDF膜...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺笋，王遵宝，李俊辉，李延涛，任立松，郑侃，侯玉珍，
申请(专利权)人：天康生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：新疆,65