一种β2微球蛋白测定试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术提供一种β2微球蛋白(β2‑MG)测定试剂盒，包括试剂R1、试剂R2，所述试剂R1包含如下浓度的组分：第一缓冲液、无机盐、促凝剂、防腐剂；所述试剂R2包含如下浓度的组分：第二缓冲液、稳定剂、抗冻剂、无机盐、表面活性剂、封闭剂、乳胶颗粒抗人β2‑MG抗体结合乳液、防腐剂。本发明专利技术属于生物检测技术领域，本发明专利技术提供的β2微球蛋白(β2‑MG)测定试剂盒在提高胶乳试剂稳定性的同时兼顾了检测灵敏度和线性范围，显著提高了测定试剂的灵敏度和稳定性，具有良好的抗冻性能，可适用于各类全自动生化分析仪进行分析，适应性好。

A Kit for the Determination of Beta 2 Microglobulin and Its Detection Method

The invention provides a kit for the determination of beta 2 microglobulin (beta 2_MG), which includes reagent R1 and reagent R2. The reagent R1 comprises components of the following concentration: first buffer, inorganic salt, coagulant and preservative; the reagent R2 comprises components of the following concentration: second buffer, stabilizer, antifreeze, inorganic salt, surfactant, sealant, latex particle, and anti-human beta 2_MG. Body combined with emulsion and preservative. The invention belongs to the field of biological detection technology. The test kit for beta 2 microglobulin (beta 2 MG) provided by the invention not only improves the stability of latex reagent, but also takes into account the detection sensitivity and linear range. The test kit significantly improves the sensitivity and stability of the test reagent, has good freeze resistance, and can be used for analysis of various automatic biochemical analyzers with good adaptability.

【技术实现步骤摘要】
一种β2微球蛋白测定试剂盒及其检测方法
本专利技术属于生物检测
，尤其涉及一种β2微球蛋白(β2-MG)测定试剂盒及其检测方法。
技术介绍
β2微球蛋白(β2-microglobulin，β2-MG)是一种内源性低分子量血清蛋白质，是由淋巴细胞、血小板、多形核白细胞产生的一种小分子球蛋白，分子质量为11800，由99个氨基酸组成的单链多肽，在免疫应答中起重要作用。血清β2-MG极易通过肾小球滤过膜，滤过的β2-MG99.9％在近端肾小管吸收，并在肾小管上皮细胞中分解破坏，不再返流入血。正常人β2-MG的合成速度和细胞膜释放的量是非常恒定的，从而使β2-MG含量保持稳定水平。β2微球蛋白的升高可反映肾小球滤过功能受损或滤过负荷是否增加的情况，临床上检测血或尿中的β2-MG浓度为临床肾功能测定、肾移植成活、糖尿病肾病、重金属镉、汞中毒以及某些恶性肿瘤的临床诊断提供较早、可靠和灵敏的指标。基于β2-MG的特性和临床应用价值，加之因β2-MG血清浓度较低，测定方法需较高的分析灵敏度及特异性，其检测方法也在不断发展。临床上测定β2-MG的方法有单向免疫扩散法、放射免疫分析法(RIA)、酶联免疫吸附法(ELISA)、时间分辨荧光免疫分析法、胶乳增强免疫比浊法等。单向免疫扩散法、放射免疫分析法、荧光免疫分析法等测定方法都为非均相检测，操作复杂且耗时长，不便广泛临床应用且不适合急诊样本的检测。近年来，应用较多的是胶乳免疫比浊法，此方法为均相测定，具有检测快速精准、灵敏度高、特异性强、精密度好、成本较低，且检测样本量少，可进行少量样本和急诊样本的测定等优点。其基本原理是：将抗体包被在胶乳颗粒上，与相应抗原发生免疫反应后，形成聚集颗粒，在一定波长下，通过测定聚集物所产生的浊度，即可测出标本中被检物的含量。现有胶乳免疫比浊法，部分采用化学偶联法将特异性抗体结合于多种粒径组合的复合胶乳上，虽可兼顾检测灵敏度和线性范围，但胶乳试剂制备操作繁琐，易导致复合胶乳重复性差、稳定性差等。且胶乳试剂制备过程中，多采用超声波处理技术及离心与重悬，操作繁琐，制备时间较长，试剂均一性和稳定性较难控制。此外，β2微球蛋白测定试剂盒属于临床生化诊断试剂盒，需要在低温(2～8℃)状态下贮存及运输，否则会破坏试剂的稳定性，进而影响检测准确性。目前，临床生化诊断试剂盒的冷链运输需要专门的冷链运输工具，包括冷藏车、冷藏船、冷藏集装箱等，但这些运输工具结构复杂，且成本极高，仅仅适合大批量运输，难以满足单个或小批量多次运输的需求。对此，市面上销售的β2微球蛋白测定试剂盒，在小批量运输过程中普遍采用具有隔热、防水、抗震、抗老化和价格低廉等特点的独立泡沫保温箱，添加若干块在-20℃～-30℃预冷的冰袋，再将β2微球蛋白测定试剂盒放入泡沫保温箱内的方式进行贮运或运输。中国专利申请CN105606822A公开了一种β2-微球蛋白检测试剂盒，包括试剂R1、试剂R2，所述的试剂R1为含PEG6000和NaCl的缓冲液，所述的试剂R2为β2-微球蛋白抗体致敏聚苯乙烯胶乳颗粒与缓冲液的混合物，含小牛血清白蛋白和葡萄糖等，但耐候性较差，可能存在贮运或运输过程中试剂盒成分发生冻结进而导致质量受影响的问题。因此，提供一种能够解决抗冻问题而又不影响试剂盒检测性能的β2微球蛋白(β2-MG)测定试剂盒具有重要意义。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术提供一种β2微球蛋白测定试剂盒，该试剂盒基于胶乳免疫透射比浊法(PETIA)，采用化学偶联法将特异性抗体结合于单一粒径的胶乳颗粒表面，避免了多种粒径组合复合胶乳的重复性差及操作繁琐的问题，同时兼顾了检测灵敏度和线性范围，无需多次超声、离心和重悬即可获得稳定的胶乳试剂。通过特定的制备方法以及添加特定的抗冻剂等优化反应体系，即使β2微球蛋白测定试剂盒的温度低于0℃，甚至低至-20℃贮存1周，也能有效保证其试剂的稳定性，同时其检测灵敏度高、特异性强、精密度好、成本较低，可以实现对β2微球蛋白的准确检测。此外，专利技术人在对小批量运输过程中的独立泡沫保温箱等贮运或运输方式进行研究发现，这类贮运或运输方式存在以下不足：包装简易，恒温效果差，如果试剂盒的位置放置不是非常合理，运输过程中会因震荡或挤压造成局部与冰袋直接接触，因冰袋在-20℃～-30℃预冷，当冰袋放入泡沫保温箱时，受温度直接传导效应，泡沫保温箱和生化诊断试剂盒瞬时温度会低于0℃，从而极可能导致试剂盒产生冻结，使试剂盒中相关组分受到严重影响而达不到预期要求或变质，影响其使用。因此，具备抗冻性能的β2微球蛋白测定试剂盒，对于保障试剂盒在贮运或运输过程中的质量稳定具有重要意义。专利技术人通过大量实验筛选出适合β2微球蛋白测定试剂盒的抗冻剂，使试剂盒在低于0℃，甚至在-20℃的低温下贮存1周，也能有效保证试剂盒中试剂的稳定性。同时该检测试剂盒的检测灵敏度高、特异性强、精密度好、成本较低，可以实现对β2微球蛋白的准确检测。本专利技术的目的将通过下面的详细描述来进一步体现和说明。本专利技术提供一种β2微球蛋白测定试剂盒，包括试剂R1、试剂R2，所述试剂R1包含如下浓度的组分：第一缓冲液20～100mmoL/L、无机盐5g/L～30g/L、促凝剂5g/L～20g/L、防腐剂0.1g/L～2g/L；所述试剂R2包含如下浓度的组分：第二缓冲液80～150mmoL/L、稳定剂20g/L～100g/L、抗冻剂5g/L～40g/L、无机盐5g/L～40g/L、表面活性剂5g/L～30g/L、封闭剂5g/L～30g/L、乳胶颗粒抗人β2-MG抗体结合乳液0.02g/L～0.12g/L、防腐剂0.05g/L～2g/L。优选地，试剂R1与试剂R2的体积比为4:1。优选地，所述试剂R1包含如下浓度的组分：第一缓冲液60～100mmoL/L、无机盐5g/L～20g/L、促凝剂10g/L～20g/L、防腐剂1g/L～2g/L；所述试剂R2包含如下浓度的组分：第二缓冲液80～120mmoL/L、稳定剂60g/L～100g/L、抗冻剂5g/L～20g/L、无机盐5g/L～40g/L、表面活性剂5g/L～30g/L、封闭剂5g/L～30g/L、乳胶颗粒抗人β2-MG抗体结合乳液0.04g/L～0.10g/L、防腐剂0.05g/L～2g/L。更优选地，所述试剂R1包含如下浓度的组分：第一缓冲液80mmoL/L、无机盐10g/L、促凝剂15g/L、防腐剂1.5g/L；所述试剂R2包含如下浓度的组分：第二缓冲液100mmoL/L、稳定剂80g/L、抗冻剂10g/L、无机盐14.5g/L、表面活性剂10g/L、封闭剂20g/L、乳胶颗粒抗人β2-MG抗体结合乳液0.06g/L、防腐剂1.5g/L。优选地，所述抗冻剂为甜菜碱。通过加入一定量的甜菜碱，在起到抗冻效果的同时，不会对β2微球蛋白测定试剂盒的检测性能造成影响或干扰。优选地，所述第一缓冲液为磷酸盐缓冲液(PBS)，所述第二缓冲液为MOPS缓冲液，所述无机盐为NaCl，所述促凝剂为聚乙二醇6000，所述表面活性剂为Tween-20，所述封闭剂为牛血清白蛋白(BSA)，所述稳定剂为海藻糖，所述防腐剂为Proclin300。优选地，所述乳胶颗粒抗人β2-MG抗体结合乳液是由羧基化胶乳微本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种β2微球蛋白测定试剂盒，其特征在于：包括试剂R1、试剂R2，所述试剂R1包含如下浓度的组分：第一缓冲液20～100mmoL/L、无机盐5g/L～30g/L、促凝剂5g/L～20g/L、防腐剂0.1g/L～2g/L；所述试剂R2包含如下浓度的组分：第二缓冲液80～150mmoL/L、稳定剂20g/L～100g/L、抗冻剂5g/L～40g/L、无机盐5g/L～40g/L、表面活性剂5g/L～30g/L、封闭剂5g/L～30g/L、乳胶颗粒抗人β2‑MG抗体结合乳液0.02g/L～0.12g/L、防腐剂0.05g/L～2g/L。

【技术特征摘要】
1.一种β2微球蛋白测定试剂盒，其特征在于：包括试剂R1、试剂R2，所述试剂R1包含如下浓度的组分：第一缓冲液20～100mmoL/L、无机盐5g/L～30g/L、促凝剂5g/L～20g/L、防腐剂0.1g/L～2g/L；所述试剂R2包含如下浓度的组分：第二缓冲液80～150mmoL/L、稳定剂20g/L～100g/L、抗冻剂5g/L～40g/L、无机盐5g/L～40g/L、表面活性剂5g/L～30g/L、封闭剂5g/L～30g/L、乳胶颗粒抗人β2-MG抗体结合乳液0.02g/L～0.12g/L、防腐剂0.05g/L～2g/L。2.根据权利要求1所述的β2微球蛋白测定试剂盒，其特征在于：所述试剂R1包含如下浓度的组分：第一缓冲液60～100mmoL/L、无机盐5g/L～20g/L、促凝剂10g/L～20g/L、防腐剂1g/L～2g/L；所述试剂R2包含如下浓度的组分：第二缓冲液80～120mmoL/L、稳定剂60g/L～100g/L、抗冻剂5g/L～20g/L、无机盐5g/L～40g/L、表面活性剂5g/L～30g/L、封闭剂5g/L～30g/L、乳胶颗粒抗人β2-MG抗体结合乳液0.04g/L～0.10g/L、防腐剂0.05g/L～2g/L。3.根据权利要求2所述的β2微球蛋白测定试剂盒，其特征在于：所述试剂R1包含如下浓度的组分：第一缓冲液80mmoL/L、无机盐10g/L、促凝剂15g/L、防腐剂1.5g/L；所述试剂R2包含如下浓度的组分：第二缓冲液100mmoL/L、稳定剂80g/L、抗冻剂10g/L、无机盐14.5g/L、表面活性剂10g/L、封闭剂20g/L、乳胶颗粒抗人β2-MG抗体结合乳液0.06g/L、防腐剂1.5g/L。4.根据权利要求1至3中任一项所述的β2微球蛋白测定试剂盒，其特征在于：所述抗冻剂为甜菜碱。5.根据权利要求1至3中任一项所述的β2微球蛋白测定试剂盒，其特征在于：所述第一缓冲液为磷酸盐缓冲液，所述第二缓冲液为...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘光华，杨玉军，刘秋明，许翠，
申请(专利权)人：广州市伊川生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44