一种测定黑加仑二次萌发芽内呼吸速率的方法技术

一种测定黑加仑二次萌发芽内呼吸速率的方法属于植物生长技术领域，该方法包括以下步骤：选取黑加仑二次萌发芽进行处理，利用YSI‑53型生物氧检测器与Oxytherm液相氧电极自动测定系统测定溶液中氧的浓度的下降程度，是一种确定黑加仑二次萌发芽内的总呼吸速率及各呼吸途径的呼吸速率的方法。这种测定黑加仑二次萌发芽内呼吸速率的方法具有高效、精准的特点。

A Method for Determining the Respiration Rate of Blackcurrant during Secondary Germination

A method for determining the respiration rate in the secondary germination of blackcurrant belongs to the field of plant growth technology. The method includes the following steps: selecting the secondary germination of blackcurrant for treatment, using YSI_53 biological oxygen detector and Oxytherm liquid oxygen electrode automatic measuring system to determine the decline degree of oxygen concentration in solution, and determining the total respiration rate in the secondary germination of blackcurrant. Methods of respiratory rate and respiratory pathway. This method of measuring the respiration rate in the second germination of blackcurrant has the characteristics of high efficiency and accuracy.

【技术实现步骤摘要】
一种测定黑加仑二次萌发芽内呼吸速率的方法
本专利技术属于植物生长
，主要涉及一种测定黑加仑二次萌发芽内呼吸速率的方法。
技术介绍
黑穗醋栗(R.nigrumL)俗称黑加仑(Blackcurrant)，别名黑豆果、斯马劳金等，在植物学上分类属虎耳草科(Saxifragaceae)茶藨子属(SubgenRibes)植物。黑穗醋栗果实为紫黑色小浆果，营养丰富，风味独特，果实内含有糖、有机酸和各种维生素。黑穗醋栗是我国独具特色的小浆果树种，也是目前最受国内外市场欢迎的小浆果之一，也是实现农民增收增效的优良经济树种，市场前景良好，极具发展潜力。黑加仑在生产实践中发现在黑龙江地区的某些品种枝梢存在较严重的“二次萌发”问题，即在果实采摘后，叶片衰落，一年生枝芽逐步膨大，枝条中上部芽多萌发，株丛二次萌发的枝条达90％以上，该现象致使树体营养大量流失，树势遭到较大程度破坏，严重影响了树体第2年的发育甚至影响到黑穗醋栗产业的发展，但目前有关二次萌发问题研究鲜见报道。呼吸作用遍及植物体的每一个生活细胞，是植物新陈代谢的重要组成部分，为其生命活动提供原料和能量。同样的，在果树的芽休眠和芽萌发过程中，呼吸作用相关的生理生化变化同样存在，据研究表明，在芽休眠和解除的过程中，其内的呼吸代谢途径的呼吸速率和相应的关键酶活性都发生了显著变化，确定黑加仑二次萌发芽内呼吸速率的变化有利于为揭示黑穗醋栗二次萌发的内在机理提供基础依据，并为黑穗醋栗二次萌发的人工调控提供技术和数据支撑，为黑穗醋栗的优质安全生产提供科学依据，而且能丰富果树芽萌发的理论。选取黑加仑二次萌发芽进行处理，利用YSI-53型生物氧检测器与Oxytherm液相氧电极自动测定系统测定溶液中氧的浓度的下降程度，确定黑加仑二次萌发芽内的总呼吸速率，通过添加各途径相应浓度的抑制剂，确定各呼吸途径的呼吸速率。这种测定黑加仑二次萌发芽内呼吸速率的方法具有高效、精准的特点
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种测定黑加仑二次萌发芽内呼吸速率的方法，达到简单，高速，精准测定黑加仑二次萌发芽呼吸速率的目的。本专利技术所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：1.一种测定黑加仑二次萌发芽内呼吸速率的方法，其特征在于通过测定溶液中氧的浓度的下降程度来确定芽内呼吸速率的方法，包括以下步骤：(1)选取黑加仑二次萌发后的一年生枝条，剥离处理后的枝条的上部芽，除去鳞片，纵向切成两个半芽，电子天平称一定质量大小基本一致的样品；(2)去除运动芽中的任何空气，将每个样品置于具有一定体积缓冲液的注射器中。将注射器倒置，使得注射器中的空气可以被清除。注射器的开口端用手指阻塞，然后旋转回来，柱塞在顶部。多次拉动柱塞抽气直到切除的芽沉入注射器的底部，以此保证芽运动中的任何空气空间都被缓冲液替代；(3)将切除的芽放置在氧热电极控制单元的反应室中。将一定体积的缓冲液吸入反应室，然后进行氧电极反应试验；(4)将螺帽盖放置在反应室上，测量程序开始运行。当反应曲线稳定时，读数代表总呼吸速率。然后将反应室中的磁力搅拌棒暂停，从而可将呼吸抑制剂分别加入到反应室中。测量重复三次，计算特定途径呼吸速率。2、根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述的样品质量为0.03-0.05g。3、根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述的缓冲液为磷酸盐缓冲盐水(PBS)，体积4-6mL，ph6.7-6.9。4、根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述的实验条件是试验温度为25℃，反应介质为2.0mL，pH6.7-6.9的PBS缓冲液。5、根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)所述的呼吸抑制剂为9-11mmolL-1NaF(抑制EMP)，49-51mmolL-1丙二酸(抑制TCA途径)和9-11mmolL-1Na3PO4(抑制PPP)；计算公式为：特定途径的呼吸速率(抑制性呼吸)＝总呼吸速率-余留呼吸速率。每个呼吸途径呼吸总量的比例(％)＝(呼吸途径/总呼吸)×100，呼吸速率为单位为lmolO2g-1FWh-1。一种测定黑加仑二次萌发芽内呼吸速率的方法属于植物生长
，该方法包括以下步骤：选取黑加仑二次萌发芽进行处理，利用YSI-53型生物氧检测器与Oxytherm液相氧电极自动测定系统测定溶液中氧的浓度的下降程度，是一种确定黑加仑二次萌发芽内的总呼吸速率及各呼吸途径的呼吸速率的方法。这种测定黑加仑二次萌发芽内呼吸速率的方法具有高效、精准的特点。附图说明附图1为方法技术路线图具体实施方式实施例1：(1)选取黑加仑二次萌发后的一年生枝条，剥离处理后的枝条的上部芽，除去鳞片，纵向切成两个半芽，电子天平称取0.03-0.05g大小基本一致的样品；(2)去除运动芽中的任何空气，将每个样品置于具有4-6mL，ph6.7-6.9的磷酸盐缓冲盐水(PBS)的注射器中。将注射器倒置，使得注射器中的空气可以被清除。注射器的开口端用手指阻塞，然后旋转回来，柱塞在顶部。多次拉动柱塞抽气直到切除的芽沉入注射器的底部，以此保证芽运动中的任何空气空间都被缓冲液替代；(3)将切除的芽放置在氧热电极控制单元的反应室中。将缓冲液吸入反应室，然后进行氧电极反应试验，温度为25℃，反应介质为2.0mL，pH6.7-6.9的PBS缓冲液；(4)将螺帽盖放置在反应室上，测量程序开始运行。当反应曲线稳定时，读数代表总呼吸速率。然后将反应室中的磁力搅拌棒暂停，从而可将呼吸抑制剂9-11mmolL-1NaF加入到反应室中。测量重复三次，计算特定途径EMP呼吸速率。实施例2：(1)选取黑加仑二次萌发后的一年生枝条，剥离处理后的枝条的上部芽，除去鳞片，纵向切成两个半芽，电子天平称取0.03-0.05g大小基本一致的样品；(2)去除运动芽中的任何空气，将每个样品置于具有4-6mL，ph6.7-6.9的磷酸盐缓冲盐水(PBS)的注射器中。将注射器倒置，使得注射器中的空气可以被清除。注射器的开口端用手指阻塞，然后旋转回来，柱塞在顶部。多次拉动柱塞抽气直到切除的芽沉入注射器的底部，以此保证芽运动中的任何空气空间都被缓冲液替代；(3)将切除的芽放置在氧热电极控制单元的反应室中。将缓冲液吸入反应室，然后进行氧电极反应试验，温度为25℃，反应介质为2.0mL，pH6.7-6.9的PBS缓冲液；(4)将螺帽盖放置在反应室上，测量程序开始运行。当反应曲线稳定时，读数代表总呼吸速率。然后将反应室中的磁力搅拌棒暂停，从而可将呼吸抑制剂49-51mmolL-1丙二酸加入到反应室中。测量重复三次，计算特定途径TCA呼吸速率。实施例3：(1)选取黑加仑二次萌发后的一年生枝条，剥离处理后的枝条的上部芽，除去鳞片，纵向切成两个半芽，电子天平称取0.03-0.05g大小基本一致的样品；(2)去除运动芽中的任何空气，将每个样品置于具有4-6mL，ph6.7-6.9的磷酸盐缓冲盐水(PBS)的注射器中。将注射器倒置，使得注射器中的空气可以被清除。注射器的开口端用手指阻塞，然后旋转回来，柱塞在顶部。多次拉动柱塞抽气直到切除的芽沉入注射器的底部，以此保证芽运动中的任何空气空间都被缓冲液替代；(3)将切除的芽放置在氧热电极控制单元的反应室中。将缓冲液本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种测定黑加仑二次萌发芽内呼吸速率的方法，其特征在于通过测定溶液中氧的浓度的下降程度来确定芽内呼吸速率的方法，包括以下步骤：(1)选取黑加仑二次萌发后的一年生枝条，剥离处理后的枝条的上部芽，除去鳞片，纵向切成两个半芽，电子天平称一定质量大小基本一致的样品；(2)去除运动芽中的任何空气，将每个样品置于具有一定体积缓冲液的注射器中；将注射器倒置，使得注射器中的空气可以被清除；注射器的开口端用手指阻塞，然后旋转回来，柱塞在顶部；多次拉动柱塞抽气直到切除的芽沉入注射器的底部，以此保证芽运动中的任何空气空间都被缓冲液替代；(3)将切除的芽放置在氧热电极控制单元的反应室中；将一定体积的缓冲液吸入反应室，然后进行氧电极反应试验；(4)将螺帽盖放置在反应室上，测量程序开始运行；当反应曲线稳定时，读数代表总呼吸速率；然后将反应室中的磁力搅拌棒暂停，从而可将呼吸抑制剂分别加入到反应室中；测量重复三次，计算特定途径呼吸速率。

【技术特征摘要】
1.一种测定黑加仑二次萌发芽内呼吸速率的方法，其特征在于通过测定溶液中氧的浓度的下降程度来确定芽内呼吸速率的方法，包括以下步骤：(1)选取黑加仑二次萌发后的一年生枝条，剥离处理后的枝条的上部芽，除去鳞片，纵向切成两个半芽，电子天平称一定质量大小基本一致的样品；(2)去除运动芽中的任何空气，将每个样品置于具有一定体积缓冲液的注射器中；将注射器倒置，使得注射器中的空气可以被清除；注射器的开口端用手指阻塞，然后旋转回来，柱塞在顶部；多次拉动柱塞抽气直到切除的芽沉入注射器的底部，以此保证芽运动中的任何空气空间都被缓冲液替代；(3)将切除的芽放置在氧热电极控制单元的反应室中；将一定体积的缓冲液吸入反应室，然后进行氧电极反应试验；(4)将螺帽盖放置在反应室上，测量程序开始运行；当反应曲线稳定时，读数代表总呼吸速率；然后将反应室中的磁力搅拌棒暂停，从而可将呼吸抑制剂分别加入到反应室中...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦栋，霍俊伟，张妍，员盎然，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23