一种沙棘中5-羟色胺提取检验与含量测定的方法技术

本发明专利技术公开了一种沙棘中5‑羟色胺提取检验与含量测定的方法，涉及沙棘中吲哚衍生物的提取检验与含量测定领域，以沙棘果皮、果枝为原料，以沙棘果皮、果枝为原料，粉碎筛选，加入无水乙醇，超声波微波提取，离心过滤，浓缩至1/4，加入甲醇溶解，再加入正己烷混合萃取浓缩，加乙酸乙酯溶解，充分溶解后加入超纯水，分液，取乙酸乙酯相浓缩至干，加少量无水乙醇溶解，定容至50mL，利用TLC反射扫描测定含量，利用质谱仪测定样品分子量信息，用红外检测其官能团，利用旋光仪测定旋光度和比旋光度，蒸发结晶测定熔点。本发明专利技术方法省时省力，分离效果较好，纯度高，结果准确，是一种操作简单、效率高的提取检验与含量测定的方法。

A Method for Extraction, Detection and Content Determination of 5-HT in Hippophae rhamnoides

The invention discloses a method for extracting, testing and content determination of 5_hydroxytryptamine in seabuckthorn, which relates to the field of extracting, testing and content determination of indole derivatives in seabuckthorn. Using Seabuckthorn peel and fruit branch as raw materials, Seabuckthorn peel and fruit branch as raw materials, crushing and screening, adding anhydrous ethanol, ultrasonic microwave extraction, centrifugal filtration, concentrating to 1/4, adding methanol to dissolve, and adding positive addition. Hexane mixed extraction concentration, adding ethyl acetate to dissolve, adding ultra-pure water after full dissolution, separating liquid, taking ethyl acetate phase to dry, adding a small amount of anhydrous ethanol to dissolve, constant volume to 50 mL, using TLC reflection scanning to determine the content, using mass spectrometer to determine the molecular weight information of samples, using infrared detection of functional groups, using polarimeter to determine optical rotation and specific optical rotation, evaporative crystallization determination Melting point. The method of the invention saves time and effort, has good separation effect, high purity and accurate results, and is a simple and efficient method for extracting, testing and content determination.

【技术实现步骤摘要】
一种沙棘中5-羟色胺提取检验与含量测定的方法
本专利技术涉及沙棘中吲哚衍生物的提取检验与含量测定领域，具体为一种沙棘中5-羟色胺的提取纯化与检验方法。
技术介绍
沙棘，胡颓子科沙棘属，其化学成分主要有维生素类、蛋白质和氨基酸类、油和脂肪酸类、挥发油类、有机酸类、糖类、5-羟色胺、微量元素类、黄酮类、萜类及甾醇类等，生物活性物质有300种之多，其中，5-羟色胺以游离态和化合态存在于沙棘的根皮、茎皮和果实中。5-羟色胺又名血清素，分子式为C10H12N2O，简称5-HT，广泛存在于哺乳动物组织中，特别在大脑皮层质及神经突触内含量很高，它是一种抑制性的神经递质，是一种吲哚衍生物。5-羟色胺对人类的身体健康至关重要，能增强大脑记忆力，并能保护神经元免受“兴奋神经毒素”的损害。5-羟色胺是一种能产生愉悦情绪的信使，几乎影响到大脑活动的每一个方面：从调节情绪、精力、记忆力到塑造人生观。5-羟色胺水平较低的人群更容易发生抑郁、冲动行为、酗酒、自杀、攻击及暴力行为。5-羟色胺种类繁多，存在于动植物中。从加纳籽中提取分离5-HTP的方法在国内外已有很多报道，但这些方法普遍存在着操作步骤繁琐，有机溶剂用量大，不利于环境保护，溶剂和树脂单体残留等缺点。为解决沙棘中5-羟色胺的提取检验与含量测定操作繁琐，避免了手动刮点、萃取、重组，进而在质谱上注射分析获取质谱图的过程耗时耗力，含量测定结果易受到干扰而不准确的问题，本专利技术提供了一种省时省力、易于操作的可快速从沙棘中提取检测5-羟色胺并测定含量的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种沙棘中5-羟色胺提取检验与含量测定的方法，用以克服上述技术缺陷。本专利技术是通过如下技术方案来实现的：一种沙棘中5-羟色胺提取检验与含量测定的方法，以沙棘果皮、果枝为原料，采用超声波微波萃取对5-羟色胺进行粗提取，经薄层层析法分离，利用TLC反射扫描测定含量，利用质谱仪测定样品分子量信息，用红外检测其官能团，测定旋光度、比旋光度和熔点；具体为：以沙棘果皮、果枝为原料，粉碎筛选，加入无水乙醇，超声波微波萃取仪分三阶段提取，离心过滤，浓缩至1/4，加入甲醇溶解，再加入正己烷混合萃取浓缩，加乙酸乙酯溶解，充分溶解后加入超纯水，分液，取乙酸乙酯相浓缩至干，加少量无水乙醇溶解，定容至50mL，分别获得果皮样品溶液、果枝样品溶液，利用TLC反射扫描测定含量，利用质谱仪测定样品分子量信息，用红外检测其官能团，利用旋光仪测定旋光度和比旋光度，蒸发结晶测定熔点。进一步地，具体过程为：步骤a，以沙棘果皮、果枝为原料，粉碎筛选，取粉末分别加入无水乙醇，超声波微波萃取仪分三阶段提取，超声波功率恒定，获得提取液，以5000r/min离心，过滤，重复3次，浓缩至1/4，加入甲醇溶解，再加入正己烷混合后萃取，取甲醇相浓缩至固态，乙酸乙酯溶解，待充分溶解后再加入超纯水，待分液取乙酸乙酯相浓缩至干，获得5-羟色胺衍生物，加少量无水乙醇溶解，定容至50mL，备用；步骤b，L-5-羟色胺标准品加乙醇溶解，定容，充分溶解后得到0.02mg/mL的L-5-羟色胺标准品溶液，并将其置于2～4℃的冰箱中保存备用；步骤c，将层析板加热活化并冷却后，吸取样液，均匀点样，以正丁醇：冰醋酸：水=6:3:1(v/v)为沙棘果皮样品的展开剂，以正丁醇：冰醋酸：水=7:1:2(v/v)为沙棘果枝样品的展开剂，展开剂润洗倒入层析缸，保温20min，上行展开，待展开剂前沿距层析板顶端0.8～1.2cm处时，取出晾干，选取0.2％茚三酮乙醇溶液为显色剂，喷在晾干的层析板上，105℃保持4～5min，待其显色后取出，放入薄层色谱成像系统，于紫外波长254nm下，调节相应的曝光时间，光圈值，曝光率，观察层析情况，系统拍照，并标志；步骤d，分别吸取25uL5-羟色胺标准品溶液、样品溶液，点样，5-羟色胺标准品溶液点样数量为2，点样量为4uL、5uL，样品溶液点样数量为3，点样量为3uL，利用TLC反射扫描法测得3组样品中5-羟色胺的含量，并计算提取率；步骤e，将层析板放入TLC-CMS接口中，激光对准斑点中心处，各选样品和标准品色谱斑点进行检测，比对确定样品的分子信息；步骤f，待测斑点加入无水乙醇溶解，过滤取滤液，打开傅里叶红外光谱仪选择相应的工作界面，用擦镜纸擦干净点样中心处，测试背景，待测液点于中心处，测试样品，对谱图界面出现的红外谱图进行处理分析。步骤g，取待测液分别测定旋光度和比旋光度，记录数据并计算平均值；步骤h，将待测液加热蒸发至样品结晶，测量熔点。与现有技术相比较本专利技术的有益效果在于：采用超声波微波粗提取5-羟色胺，薄层层析保持了操作方便、设备简单、显色容易等特点，同时展开速率快，一般仅需15～20分钟；既适用于只有0.01μg的样品分离，又能分离大于500mg的样品作制备用，而且还可以使用如浓硫酸、浓盐酸之类的腐蚀性显色剂，能实现对5-羟色胺的分离纯化，使得5-羟色胺准确分离，本专利技术采用PlateExpressTM技术可直接从TLC薄层板上获取质谱图，其优点是不经过样品前处理，可快速从复杂混合物中获得目标物分子质量信息，并对其进行鉴定，是一种省时省力、易于操作的可快速从沙棘中提取检测5-羟色胺并测定含量的方法。附图说明图1为本专利技术的含量测定的流程图。图2为沙棘果皮样品TLC图像，图中A为L-5-羟色胺标准品所在斑点位置，B为沙棘样液所在斑点位置，C为未知斑点。图3为沙棘果枝样品TLC图像，图中A为L-5-羟色胺标准品所在斑点位置，B为沙棘样液所在斑点位置，C为未知斑点。图4为5-羟色胺标准品质谱图。图5为棘果皮样品质谱图。图6为沙棘果枝样品质谱图。图7为5-羟色胺标准品的红外光谱图。图8为沙棘果皮样品的红外光谱图。图9为沙棘果枝样品的红外光谱图。图10为L-5-羟色胺的结构式。图11为沙棘样品中5-羟色胺含量。具体实施方式以下结合附图，对本专利技术上述的和另外的技术特征和优点作更详细的说明。一种沙棘中5-羟色胺提取检验与含量测定的方法，以沙棘果皮、果枝为原料，采用超声波微波萃取对5-羟色胺进行粗提取，经薄层层析法分离，利用TLC反射扫描测定含量，利用质谱仪测定样品分子量信息，用红外检测其官能团，测定旋光度、比旋光度和熔点；具体为：以沙棘果皮、果枝为原料，粉碎筛选，加入无水乙醇，超声波微波萃取仪分三阶段提取，离心过滤，浓缩至1/4，加入甲醇溶解，再加入正己烷混合萃取浓缩，加乙酸乙酯溶解，充分溶解后加入超纯水，分液，取乙酸乙酯相浓缩至干，加少量无水乙醇溶解，定容至50mL，分别获得果皮样品溶液、果枝样品溶液，利用TLC反射扫描测定含量，利用质谱仪测定样品分子量信息，用红外检测其官能团，利用旋光仪测定旋光度和比旋光度，蒸发结晶测定熔点。请参阅图1所示，具体过程为：步骤a，以沙棘果皮、果枝为原料，粉碎筛选，取粉末分别加入无水乙醇，超声波微波萃取仪分三阶段提取，超声波功率恒定，获得提取液，以5000r/min离心，过滤，重复3次，浓缩至1/4，加入甲醇溶解，再加入正己烷混合后萃取，取甲醇相浓缩至固态，乙酸乙酯溶解，待充分溶解后再加入超纯水，待分液取乙酸乙酯相浓缩至干，获得5-羟色胺衍生物，加少量无水乙醇溶解，定容至50mL，备用；步骤b，L-5-羟色胺标准品本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种沙棘中5‑羟色胺提取检验与含量测定的方法，其特征在于，以沙棘果皮、果枝为原料，采用超声波微波萃取对5‑羟色胺进行粗提取，经薄层层析法分离，利用TLC反射扫描测定含量，利用质谱仪测定样品分子量信息，用红外检测其官能团，测定旋光度、比旋光度和熔点；具体为：以沙棘果皮、果枝为原料，粉碎筛选，加入无水乙醇，超声波微波萃取仪分三阶段提取，离心过滤，浓缩至1/4，加入甲醇溶解，再加入正己烷混合萃取浓缩，加乙酸乙酯溶解，充分溶解后加入超纯水，分液，取乙酸乙酯相浓缩至干，加少量无水乙醇溶解，定容至50mL，分别获得果皮样品溶液、果枝样品溶液，利用TLC反射扫描测定含量，利用质谱仪测定样品分子量信息，用红外检测其官能团，利用旋光仪测定旋光度和比旋光度，蒸发结晶测定熔点。

【技术特征摘要】
1.一种沙棘中5-羟色胺提取检验与含量测定的方法，其特征在于，以沙棘果皮、果枝为原料，采用超声波微波萃取对5-羟色胺进行粗提取，经薄层层析法分离，利用TLC反射扫描测定含量，利用质谱仪测定样品分子量信息，用红外检测其官能团，测定旋光度、比旋光度和熔点；具体为：以沙棘果皮、果枝为原料，粉碎筛选，加入无水乙醇，超声波微波萃取仪分三阶段提取，离心过滤，浓缩至1/4，加入甲醇溶解，再加入正己烷混合萃取浓缩，加乙酸乙酯溶解，充分溶解后加入超纯水，分液，取乙酸乙酯相浓缩至干，加少量无水乙醇溶解，定容至50mL，分别获得果皮样品溶液、果枝样品溶液，利用TLC反射扫描测定含量，利用质谱仪测定样品分子量信息，用红外检测其官能团，利用旋光仪测定旋光度和比旋光度，蒸发结晶测定熔点。2.根据权利要求1所述的一种沙棘中5-羟色胺提取检验与含量测定的方法，其特征在于，该具体过程为：步骤a，以沙棘果皮、果枝为原料，粉碎筛选，取粉末分别加入无水乙醇，超声波微波萃取仪分三阶段提取，超声波功率恒定，获得提取液，以5000r/min离心，过滤，重复3次，浓缩至1/4，加入甲醇溶解，再加入正己烷混合后萃取，取甲醇相浓缩至固态，乙酸乙酯溶解，待充分溶解后再加入超纯水，待分液取乙酸乙酯相浓缩至干，获得5-羟色胺衍生物，加少量无水乙醇溶解，定容至50mL，备用；步骤b，L-5-羟色胺标准品加乙醇溶解，定容，充分溶解后得到0.02mg/mL的L-5-羟色胺标准品溶液，并将其置于2～4℃的冰箱中保...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨卫民，秦永其，杜京旗，张利军，赵青红，
申请(专利权)人：吕梁学院，
类型：发明
国别省市：山西,14