一种治疗类风湿性关节炎中药组合物的检测方法技术

本发明专利技术属于中药组合物领域，具体涉及一种治疗类风湿性关节炎中药组合物的检测方法。本发明专利技术所述治疗类风湿性关节炎的中药组合物由昆明山海棠、淫羊藿、菟丝子和枸杞子组成，该检测方采用一测多评法，建立了同时测定黄酮类化合物：金丝桃苷、朝藿苷A、朝藿苷C、朝藿苷B、淫羊藿苷、木犀草素、槲皮素、川陈皮素、山奈酚和宝藿苷Ⅰ的检测方法，以金丝桃苷为内参物，有效地控制了昆明山海棠、淫羊藿、菟丝子和枸杞子产品质量，方法简单便捷，为更好地保证治疗类风湿性关节炎中药组合物临床疗效奠定基础，也为富含黄酮类化合物的中药检测提供参考。

A method for the determination of traditional Chinese medicine compositions for the treatment of rheumatoid arthritis

The invention belongs to the field of traditional Chinese medicine compositions, in particular to a detection method of traditional Chinese medicine compositions for treating rheumatoid arthritis. The traditional Chinese medicine composition for treating rheumatoid arthritis is composed of Begonia kunming, Herba Epimedii, Cuscuta chinensis and Lycium barbarum. The detection prescription adopts one test and multi-evaluation method, and establishes a detection prescription for simultaneous determination of flavonoids: hyperoside, Icariin A, Icariin C, Icariin B, luteolin, quercetin, Sichuan Chen Pi, Kaempferol and Paeoside I. METHODS: With Hyperoside as internal reference, the quality of crabapple, epimedium, dodder and wolfberry fruits in Kunming Mountain was effectively controlled. The method was simple and convenient, which laid a foundation for better ensuring the clinical efficacy of traditional Chinese medicine compositions for rheumatoid arthritis, and also provided a reference for the detection of flavonoid-rich Chinese medicine.

【技术实现步骤摘要】
一种治疗类风湿性关节炎中药组合物的检测方法
本专利技术属于中药组合物领域，具体涉及一种治疗类风湿性关节炎中药组合物的检测方法。
技术介绍
类风湿关节炎是一种病因未明的慢性、以炎性滑膜炎为主的系统性疾病。其特征是手、足小关节的多关节、对称性、侵袭性关节炎症，经常伴有关节外器官受累及血清类风湿因子阳性，可以导致关节畸形及功能丧失，治疗类风湿性关节炎的药主要为非甾体抗炎药、糖皮质激素、生物制剂和中药制剂，中药以及中药制剂治疗表现出整体调节、多层次、多靶点的特点，而且还能缓解和对抗西药毒副作用，近年来越来越受到人们的重视。在治疗类风湿性关节炎中药组合物中，多以含有黄酮类化合物发挥疗效，如处方由昆明山海棠、淫羊藿、菟丝子和枸杞子四味中药组成的治疗类风湿性关节炎中药组合物，其具有补肾通络、祛风除湿的功效，主治类风湿关节炎属风湿痹阻兼肾虚证，现代药理学和临床研究还表明，该组合物具有抗炎、抗肿瘤、抗菌、抗病毒、免疫抑制等作用，用于免疫性疾病，如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、慢性肾炎等。随着对中药组合物的使用增多，对其质量评价方法也备受关注，治疗类风湿性关节炎中药组合物的单味药材中化学成分有黄酮类、生物碱、萜类、糖苷类等多种有效成分，其中以黄酮类化合物居多，可用来评价中药组合物的质量。专利文献CN201711130716.3公开了一种检测鱼腥草黄酮类成分含量的HPLC方法，包括以下步骤：(1)供试品溶液制备：取鱼腥草粉末，用低级醇提取，过滤得供试品溶液；(2)对照品溶液制备：取金丝桃苷和槲皮苷对照品，混合，加低级醇配置成混合对照品溶液；(3)分别将供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪检测，色谱条件如下：色谱柱：C18色谱柱；流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.1％磷酸水溶液；洗脱程序：等度洗脱30min，A与B的体积比为18～22：82～78；检测波长：205nm；(4)根据检测结果计算得到鱼腥草中金丝桃苷和槲皮苷的含量。该方法中采用标准曲线法，分别建立了金丝桃苷和槲皮苷的标准曲线，该检测方法准确可靠，简便快速，为提高鱼腥草质量控制水平奠定了基础，但对于中药组合物的质量控制并不简便，需测定多种黄酮类化合物的标准曲线，耗费人力、物力、财力，并且有些有效成分因难以提取纯化，难以获得纯度符合建立标准曲线的对照品，使实际含量检测难以执行，不建议作为中药组合物的质量控制。本领域公知，现有技术多采用外标法或内标法测定中药组合物中多指标成分含量，但外标法或内标法需要提供多种指标成分的对照品以及内标物，检测过程中耗费大量物资，为实现绿色环保节约的产业化目标，有必要提供一种简便、可同时检测多种有效成分的治疗类风湿性关节炎中药组合物的方法。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种治疗类风湿性关节炎中药组合物的检测方法，所述治疗类风湿性关节炎中药组合物的由昆明山海棠、淫羊藿、菟丝子和枸杞子组成，本专利技术以金丝桃苷、朝藿苷A、朝藿苷C、朝藿苷B、淫羊藿苷、木犀草素、槲皮素、川陈皮素、山奈酚和宝藿苷Ⅰ10种黄酮类化合物作为检测指标，可同时测定10种黄酮类成分的含量，以评价治疗类风湿性关节炎中药组合物中昆明山海棠、淫羊藿、菟丝子和枸杞子的质量，提高其应用的可行性和适用性。为了达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案：本专利技术提供了一种治疗类风湿性关节炎中药组合物的检测方法，所述治疗类风湿性关节炎的中药组合物由昆明山海棠、淫羊藿、菟丝子和枸杞子组成；该检测方法以金丝桃苷、朝藿定B、朝藿定A、朝藿定C、淫羊藿苷、木犀草素、槲皮素、川陈皮素、山奈酚和宝藿苷Ⅰ作为昆明山海棠、淫羊藿、菟丝子和枸杞子的检测指标，检测步骤如下：S1混合对照品溶液的制备：精密称定金丝桃苷、朝藿定B、朝藿定A、朝藿定C、淫羊藿苷、木犀草素、槲皮素、川陈皮素、山奈酚和宝藿苷Ⅰ对照品，80％甲醇溶液溶解定容、摇匀，得含有96.8μg/ml金丝桃苷、119.04μg/ml朝藿定B、213.2μg/ml朝藿定A、257.32μg/ml朝藿定C、390μg/ml淫羊藿苷、4.136μg/ml木犀草素、42.24μg/ml槲皮素、16.69μg/ml川陈皮素、24.416μg/ml山奈酚和17.984μg/ml宝藿苷Ⅰ的混合对照品溶液；S2待测样品的制备：精密称量治疗类风湿性关节炎中药组合物粉末，置于具塞锥形瓶中，精密加入乙醇溶液20ml，所述治疗类风湿性关节炎中药组合物粉末与乙醇溶液物液比为1g:(66-68)ml，称定重量，超声20-40min，超声功率240-260W，室温冷却，称定重量，乙醇溶液补足减轻的重量，摇匀，转速为10000r/min离心10min，取上清液用0.22μm微孔滤膜过滤，即得待测样品；S3色谱条件：高效液相检测法，流动相A相为乙腈，B相为0.2％磷酸溶液，流速1.0mL/min，柱温30℃，取步骤S1中混合对照品溶液和S2中待测样品10μL，进样，梯度洗脱，检测，洗脱时间和条件如下：方法中，以金丝桃苷为内参物，分别计算朝藿定B、朝藿定A、朝藿定C、淫羊藿苷、木犀草素、槲皮素、川陈皮素、山奈酚、宝藿苷Ⅰ的相对校正因子f，f的计算公式如下：fs/i＝fs/fi＝(As×Ci)/(Ai×Cs)式中As为内参物对照品S的峰面积，Cs为内参物对照品S的浓度，Ai为某待测成分对照品i的峰面积，Ci为某待测成分对照品i的浓度，按照外标法测定内参物峰面积As，利用各成分的f和内参物的实测值，计算待测样品成分的含量。进一步地，所述的治疗类风湿性关节炎中药组合物的检测方法中步骤S2中超声时间为30min。进一步地，所述的治疗类风湿性关节炎中药组合物的检测方法中步骤S2中的乙醇溶液为80％(v/v)乙醇水溶液。进一步地，所述的治疗类风湿性关节炎中药组合物的检测方法中步骤S3的高效液相检测法的检测器为多波长选择的安捷伦二极管阵列(DAD)检测器，型号1200。进一步地，所述的治疗类风湿性关节炎中药组合物的检测方法中步骤S3中色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶反相色谱柱，柱长250mm，内径4.6mm，填料孔径5μm，厂家为美国沃特世公司，型号为symmetryShieldTM。进一步地，所述的治疗类风湿性关节炎中药组合物的检测方法中步骤S3中对照品混合液中朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ检测波长为270nm，川陈皮素检测波长为325nm，金丝桃苷、槲皮素、木犀草素、山奈酚检测波长为360nm。本专利技术的治疗类风湿性关节炎中药组合物中含有大量的黄酮类成分，本专利技术利用高效液相检测法，采用一测多评法，利用中药组合物中有效成分内在函数关系和比例关系，只测定1个有效成分(性质稳定且易得到的对照品)来实现多个成分(性质不稳定且难得到的对照品)的同时测定。本专利技术的治疗类风湿性关节炎中药组合物的检测方法具体以金丝桃苷为内参物，对昆仙胶囊中黄酮类成分：金丝桃苷、朝藿苷A、朝藿苷C、朝藿苷B、淫羊藿苷、木犀草素、槲皮素、川陈皮素、山奈酚和宝藿苷Ⅰ进行含量测定，其中以金丝桃苷为内参物，建立朝藿苷A、朝藿苷C、朝藿苷B、淫羊藿苷、木犀草素、槲皮素、川陈皮素、山奈酚和宝藿苷Ⅰ的相对校正因子，利用相对校正因子计算昆仙胶囊样品中成分的含量，按照中药新药质量标准研究的技术要求，建立治疗类风湿性关节炎中药组合物本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种治疗类风湿性关节炎中药组合物的检测方法，所述治疗类风湿性关节炎的中药组合物由昆明山海棠、淫羊藿、菟丝子和枸杞子组成，其特征在于，该检测方法以金丝桃苷、朝藿定B、朝藿定A、朝藿定C、淫羊藿苷、木犀草素、槲皮素、川陈皮素、山奈酚和宝藿苷Ⅰ作为昆明山海棠、淫羊藿、菟丝子和枸杞子的检测指标；检测步骤如下：S1混合对照品溶液的制备：精密称定金丝桃苷、朝藿定B、朝藿定A、朝藿定C、淫羊藿苷、木犀草素、槲皮素、川陈皮素、山奈酚和宝藿苷Ⅰ对照品，80％甲醇溶液溶解定容、摇匀，得含有96.8μg/ml金丝桃苷、119.04μg/ml朝藿定B、213.2μg/ml朝藿定A、257.32μg/ml朝藿定C、390μg/ml淫羊藿苷、4.136μg/ml木犀草素、42.24μg/ml槲皮素、16.69μg/ml川陈皮素、24.416μg/ml山奈酚和17.984μg/ml宝藿苷Ⅰ的混合对照品溶液；S2样品的制备：精密称量治疗类风湿性关节炎中药组合物粉末，置于具塞锥形瓶中，精密加入乙醇溶液20ml，所述治疗类风湿性关节炎中药组合物粉末与乙醇溶液物液比为1g:(66‑68)ml，称定重量，超声20‑40min，超声功率240‑260W，室温冷却，称定重量，乙醇溶液补足减轻的重量，摇匀，转速为10000r/min离心10min，取上清液用0.22μm微孔滤膜过滤，即得待测样品；S3色谱条件：高效液相检测法，流动相A相为乙腈，B相为0.2％磷酸溶液，流速1.0mL/min，柱温30℃，取步骤S1中混合对照品溶液和S2中待测样品，进样，梯度洗脱，洗脱时间和条件如下：...

【技术特征摘要】
1.一种治疗类风湿性关节炎中药组合物的检测方法，所述治疗类风湿性关节炎的中药组合物由昆明山海棠、淫羊藿、菟丝子和枸杞子组成，其特征在于，该检测方法以金丝桃苷、朝藿定B、朝藿定A、朝藿定C、淫羊藿苷、木犀草素、槲皮素、川陈皮素、山奈酚和宝藿苷Ⅰ作为昆明山海棠、淫羊藿、菟丝子和枸杞子的检测指标；检测步骤如下：S1混合对照品溶液的制备：精密称定金丝桃苷、朝藿定B、朝藿定A、朝藿定C、淫羊藿苷、木犀草素、槲皮素、川陈皮素、山奈酚和宝藿苷Ⅰ对照品，80％甲醇溶液溶解定容、摇匀，得含有96.8μg/ml金丝桃苷、119.04μg/ml朝藿定B、213.2μg/ml朝藿定A、257.32μg/ml朝藿定C、390μg/ml淫羊藿苷、4.136μg/ml木犀草素、42.24μg/ml槲皮素、16.69μg/ml川陈皮素、24.416μg/ml山奈酚和17.984μg/ml宝藿苷Ⅰ的混合对照品溶液；S2样品的制备：精密称量治疗类风湿性关节炎中药组合物粉末，置于具塞锥形瓶中，精密加入乙醇溶液20ml，所述治疗类风湿性关节炎中药组合物粉末与乙醇溶液物液比为1g:(66-68)ml，称定重量，超声20-40min，超声功率240-260W，室温冷却，称定重量，乙醇溶液补足减轻的重量，摇匀，转速为10000r/min离心10min，取上清液用0.22μm微孔滤膜过滤，即得待测样品；S3色谱条件：高效液相检测法，流动相A相为乙腈，B相为0.2％磷酸溶液，流速1.0mL/min，柱温30℃，取步骤S1中混合对...

【专利技术属性】
技术研发人员：张雪，彭富全，何风雷，刘敏，
申请(专利权)人：广州白云山陈李济药厂有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44