检测去甲基卡波地那非、丙氧基艾地那非、N-乙基他达拉非和羟丙基去甲基他达拉非方法技术

本发明专利技术涉及食品药品检测方法，具体是用于补肾壮阳类中成药和抗疲劳类保健食品，或者非法宣称补肾壮阳和抗疲劳类食品中非法添加去甲基卡波地那非、N‑乙基他达拉非、丙氧基艾地那非和羟丙基去甲基他达拉非化学品的定性筛选和确证方法。该方法的原理为：试样经乙腈超声提取，过滤后，滤液供液相色谱‑串联质谱测定，外标法定量确认。该方法的实验结果均满足要求，表明本法可专属、灵敏、快速地初筛和确证补肾壮阳类中成药和抗疲劳类保健食品，或者非法宣称补肾壮阳和抗疲劳类食品中非法添加去甲基卡波地那非、N‑乙基他达拉非、丙氧基艾地那非和羟丙基去甲基他达拉非。

DETECTION OF DEMETHYL CAPODINAFIL, PROXYEIDENAFIL, N-ETHYL TADALAFIL AND HYDROXYPROPYL DEMETHYL TADALAFIL

The invention relates to a method for detecting food and drug, in particular to a qualitative screening and confirmation method for Chinese patent medicine for tonifying kidney and strengthening yang and health food for anti-fatigue, or illegally declaring that demethylcapotenafil, N ethyltadalafil, propoxy edenafil and hydroxypropyl demethyltadalafil are illegally added to Kidney-Tonifying and yang-strengthening and anti-fatigue food. The principle of the method is that the sample is extracted by acetonitrile, filtered and determined by liquid chromatography-tandem mass spectrometry, and quantitatively confirmed by external standard method. The experimental results of this method meet the requirements. It shows that this method can be used to screen and confirm Chinese patent medicines for tonifying kidney and strengthening yang and anti-fatigue health foods exclusively, sensitively and quickly, or illegally claim that demethylcapotenafil, N ethyltadalafil, propoxy adenafil and hydroxypropyl demethyltadalafil are illegally added to kidney and strengthening yang and anti-fatigue food.

【技术实现步骤摘要】
检测去甲基卡波地那非、丙氧基艾地那非、N-乙基他达拉非和羟丙基去甲基他达拉非方法
本专利技术涉及食品（含保健食品）、药品检测方法，具体是用于补肾壮阳类中成药和抗疲劳类保健食品，或者非法宣称补肾壮阳和抗疲劳类食品中非法添加去甲基卡波地那非、N-乙基他达拉非、丙氧基艾地那非和羟丙基去甲基他达拉非含量的高效液相色谱-串联质谱测定方法。
技术介绍
目前，在国内市场销售产品中发现有非法添加此去甲基卡波地那非、N-乙基他达拉非、丙氧基艾地那非和羟丙基去甲基他达拉非等4种物质，但还没有这些物质的筛查、定量和确证方法，且此化合物国内外未批准药用，未见其毒理学研究数据，毒性危害未知。为了保障人民群众的饮食用药安全，经过多次试验，并考虑一测多评，一种条件下尽可能筛选多个类似物，在前期方法学验证的基础上，建立去甲基卡波地那非、N-乙基他达拉非、丙氧基艾地那非和羟丙基去甲基他达拉非等4种物质的快速检验方法，供监督应用。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种针对补肾壮阳类中成药和抗疲劳类保健食品，或者非法宣称补肾壮阳和抗疲劳类食品中非法添加去甲基卡波地那非、N-乙基他达拉非、丙氧基艾地那非和羟丙基去甲基他达拉非的补充检验方法，该方法的原理为：试样经乙腈超声提取，过滤后，滤液供液相色谱-串联质谱测定，外标法定量确认。本专利技术是采用如下技术方案实现的：一种检测去甲基卡波地那非、丙氧基艾地那非、N-乙基他达拉非和羟丙基去甲基他达拉非的方法，包括如下步骤：（1）、试剂和材料1.1、试剂1.1.1、甲酸（HCOOH）：色谱纯。1.1.2、乙腈（C2H3N）：色谱纯。1.1.3、水为GB/T6682规定的一级水。1.2、试剂配制1.2.1、0.1%甲酸水溶液：取甲酸1mL用水稀释至1000mL。1.3、标准物质去甲基卡波地那非、N-乙基他达拉非、丙氧基艾地那非和羟丙基去甲基他达拉非的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表22。表221.4、标准溶液配制1.4.1、标准储备液：分别精密称取去甲基卡波地那非、N-乙基他达拉非、丙氧基艾地那非和羟丙基去甲基他达拉非各10.0mg，用乙腈溶解并稀释至25mL，摇匀，制成浓度为400μg/mL标准储备液，-20℃保存，保存期7天。1.4.2混合标准中间液Ⅰ：分别准确吸取去甲基卡波地那非、丙氧基艾地那非、羟丙基去甲基他达拉非和N-乙基他达拉非标准储备液0.1mL（去甲基卡波地那非0.5mL），乙腈定容至10mL，摇匀，制成4μg/mL（去甲基卡波地那非浓度为20μg/mL）的混合标准中间液Ⅰ，-20℃保存，保存期7天。1.4.3混合标准中间液Ⅱ：准确吸取混合标准中间液Ⅰ1.0mL于100mL容量瓶中，乙腈定容至刻度，摇匀，制成40ng/mL（去甲基卡波地那非浓度为200ng/mL）的混合标准中间液Ⅱ，-20℃保存，保存期7天。1.4.4、标准系列工作液的制备：分别准确吸取0.1mL、0.2mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL的混合标准中间液Ⅱ（1.4.3），用空白溶剂乙腈及空白基质提取液定容至10mL，将其稀释成浓度分别为0.4ng/mL、0.8ng/mL、2.0ng/mL、4.0ng/mL、6.0ng/mL、8.0ng/mL（去甲基卡波地那非浓度分别为2.0ng/mL、4.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、30.0ng/mL、40.0ng/mL）的标准系列工作液。临用时配制。（2）、仪器和设备2.1、高效液相色谱-串联质谱仪，配有电喷雾（ESI）离子源。2.2、天平：感量分别为0.1mg和1mg。2.3、超声波清洗器。（3）、分析步骤3.1、试样制备3.1.1、固态试样取适量混匀，研细，称取0.5g试样（精确至0.01g）于25mL容量瓶中，加入乙腈20mL，超声提取20min，放冷，乙腈定容至刻度，摇匀，用滤膜（0.22μm，有机相型）过滤，取续滤液，根据实际浓度适当稀释至标准曲线线性范围内，备用。3.1.2、液态试样取适量摇匀，吸取0.5mL于25mL容量瓶中，加入乙腈定容至刻度，摇匀，用滤膜（0.22μm，有机相型）过滤，取续滤液，根据实际浓度适当稀释至标准曲线线性范围内，备用。3.1.3、空白试验不加试样按试样同法处理，制得空白溶液。称取与试样等量的空白基质试样，按试样同法处理，制得空白基质试样溶液，备用。3.2、仪器参考条件3.2.1、色谱条件a）色谱柱：C18（2.0×150mm，3μm），或性能相当者；b）流动相：A为乙腈，B为0.1%甲酸水溶液（1.2.1），梯度洗脱程序见下表1：c）流速：300μL/min。d)柱温：35℃。e)进样量：2μL。表1流动相及梯度洗脱条件流动相梯度洗脱：时间段0-1min，流动相A10%，流动相B90%；时间段1-7min，流动相A10%到90%，流动相B90%到10%；时间段7~9min，流动相A90%，流动相B10%；时间段9-9.1min，流动相A90%到10%，流动相B10%到90%；时间段9.1~12min，流动相A10%，流动相B90%。注：在有共流出成分影响目标化合物检测时，可以适当调节流动相比例，使尽可能与干扰成分分离，减少干扰。3.2.2、质谱条件a）离子源：电喷雾离子源（ESI源）。b）扫描方式：正离子扫描（ESI+）。c）检测方式：多反应离子监测（MRM）。d）干燥气、雾化气、加热气等均为高纯氮气或其他合适气体，使用前应调节相应参数使质谱灵敏度达到检测要求，干燥气流速、加热气流速、雾化气流速、接口温度、脱溶剂管温度、加热器温度、碰撞能量等参数应优化至最佳灵敏度，监测离子对和定量离子对等信息详见如下。质谱参考条件：离子源：电喷雾离子源（ESI）；检测方式：多反应监测（MRM）；扫描方式：正离子扫描（ESI+）；雾化气流速：3.0L/min；加热气流速：10.0L/min；干燥气流速：10.0L/min；接口温度：300℃；脱溶剂管温度：250℃；加热器温度：400℃。3.3、定性测定按照高效液相色谱—串联质谱条件测定试样和标准工作溶液，记录试样和标准溶液中各化合物的色谱保留时间，当试样中检出与某标准品质量色谱峰保留时间一致的色谱峰（变化范围在±2.5%之内），并且试样色谱图中所选择的监测离子对的相对丰度比与相当浓度标准溶液的离子相对丰度比的偏差不超过表21规定的范围，可以确定试样中检出相应化合物。表21定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差3.4、定量测定3.4.1、标准曲线的制作将混合标准工作溶液（1.4.4）分别按仪器参考条件（3.2）进行测定，得到相应的标准溶液的色谱峰面积。以混合标准工作溶液的浓度为横坐标，以色谱峰的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。必合要时可用空白基质试样溶液（5.1.3）配制基质混标准工作溶液绘制标准曲线。3.4.2、试样溶液的测定将试样溶液（3.1）按仪器参考条件（3.2）进行测定，得到相应的样品溶液的色谱峰面积。根据标准曲线得到待测液中组分的浓度，平行测定次数不少于两次。3.4.3、空白基质试样溶液的测定空白基质试样溶液的测定同3.4.2。（4）、分析结果的表述将高效液相色谱-串联质谱测得浓度代入下式计算含量：…………………………………………（1）式本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测去甲基卡波地那非、丙氧基艾地那非、N‑乙基他达拉非和羟丙基去甲基他达拉非方法，其特征在于：试样经乙腈超声提取，过滤后，滤液供液相色谱‑串联质谱测定，外标法定量；具体包括如下步骤：（1）标准溶液配制1.1、标准储备液：分别称取去甲基卡波地那非、N‑乙基他达拉非、丙氧基艾地那非和羟丙基去甲基他达拉非各10.0mg，用乙腈溶解并稀释至25mL，摇匀，制成浓度为400μg/mL标准储备液，‑20℃保存；1.2、混合标准中间液Ⅰ：分别吸取丙氧基艾地那非、羟丙基去甲基他达拉非、N‑乙基他达拉非标准储备液0.1mL和吸取去甲基卡波地那非0.5mL，分别用乙腈定容至10mL，摇匀，制成丙氧基艾地那非、羟丙基去甲基他达拉非、N‑乙基他达拉非的浓度为4μg/mL，去甲基卡波地那非浓度为20μg/mL，作为混合标准中间液Ⅰ，‑20℃保存；混合标准中间液Ⅱ：准确吸取混合标准中间液Ⅰ1.0mL于100mL容量瓶中，乙腈定容至刻度，摇匀，制成丙氧基艾地那非、羟丙基去甲基他达拉非、N‑乙基他达拉非的浓度为40ng/mL，去甲基卡波地那非浓度为200ng/mL，作为混合标准中间液Ⅱ，‑20℃保存；1.3、标准系列工作液的制备：分别吸取0.1mL、0.2mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL的混合标准中间液Ⅱ，用空白溶剂乙腈及空白基质提取液定容至10mL，将其稀释成丙氧基艾地那非、羟丙基去甲基他达拉非、N‑乙基他达拉非的浓度分别为0.4ng/mL、0.8ng/mL、2.0ng/mL、4.0ng/mL、6.0ng/mL、8.0ng/mL，去甲基卡波地那非浓度分别为2.0ng/mL、4.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、30.0ng/mL、40.0ng/mL），作为标准系列工作液；（2）、试样制备2.1、固态试样称取0.5g试样于25mL容量瓶中，加入乙腈20mL，超声提取20min，放冷，乙腈定容至刻度，摇匀，用滤膜过滤，取续滤液，根据实际浓度适当稀释至标准曲线线性范围内，备用；2.2、液态试样吸取0.5mL于25mL容量瓶中，加入乙腈定容至刻度，摇匀，用滤膜过滤，取续滤液，根据实际浓度适当稀释至标准曲线线性范围内，备用；2.3、空白试验不加试样按试样同法处理，制得空白溶液；称取与试样等量的空白基质试样，按试样同法处理，制得空白基质试样溶液，备用；（3）、仪器参考条件3.1、色谱条件a）、色谱柱：C18；b）、流动相：A为乙腈，B为0.1%甲酸水溶液；c）、流速：300μL/min；d）、柱温：35℃；e）、进样量：2μL；3.2、质谱条件a）、离子源：电喷雾离子源；b）、扫描方式：正离子扫描；c）、检测方式：多反应离子监测；d）、干燥气、雾化气、加热气均为高纯氮气，使用前应调节相应参数使质谱灵敏度达到检测要求，干燥气流速、加热气流速、雾化气流速、接口温度、脱溶剂管温度、加热器温度、碰撞能量参数应优化至最佳灵敏度；（4）、定性测定按照高效液相色谱—串联质谱条件测定试样和标准工作溶液，记录试样和标准溶液中各化合物的色谱保留时间，当试样中检出与某标准品质量色谱峰保留时间一致的色谱峰，并且试样色谱图中所选择的监测离子对的相对丰度比与相当浓度标准溶液的离子相对丰度比的偏差不超过规定的范围，确定试样中检出相应化合物；（5）、定量测定5.1、标准曲线的制作将标准系列工作液分别按仪器参考条件进行测定，得到相应的标准溶液的色谱峰面积；以混合标准工作溶液的浓度为横坐标，以色谱峰的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；5.2、试样溶液的测定将试样溶液按仪器参考条件进行测定，得到相应的样品溶液的色谱峰面积；根据标准曲线得到待测液中组分的浓度，平行测定次数不少于两次；5.3、空白基质试样溶液的测定空白基质试样溶液的测定同5.2；（6）、分析结果的表述将高效液相色谱‑串联质谱测得浓度代入下式计算含量：...

【技术特征摘要】
1.一种检测去甲基卡波地那非、丙氧基艾地那非、N-乙基他达拉非和羟丙基去甲基他达拉非方法，其特征在于：试样经乙腈超声提取，过滤后，滤液供液相色谱-串联质谱测定，外标法定量；具体包括如下步骤：（1）标准溶液配制1.1、标准储备液：分别称取去甲基卡波地那非、N-乙基他达拉非、丙氧基艾地那非和羟丙基去甲基他达拉非各10.0mg，用乙腈溶解并稀释至25mL，摇匀，制成浓度为400μg/mL标准储备液，-20℃保存；1.2、混合标准中间液Ⅰ：分别吸取丙氧基艾地那非、羟丙基去甲基他达拉非、N-乙基他达拉非标准储备液0.1mL和吸取去甲基卡波地那非0.5mL，分别用乙腈定容至10mL，摇匀，制成丙氧基艾地那非、羟丙基去甲基他达拉非、N-乙基他达拉非的浓度为4μg/mL，去甲基卡波地那非浓度为20μg/mL，作为混合标准中间液Ⅰ，-20℃保存；混合标准中间液Ⅱ：准确吸取混合标准中间液Ⅰ1.0mL于100mL容量瓶中，乙腈定容至刻度，摇匀，制成丙氧基艾地那非、羟丙基去甲基他达拉非、N-乙基他达拉非的浓度为40ng/mL，去甲基卡波地那非浓度为200ng/mL，作为混合标准中间液Ⅱ，-20℃保存；1.3、标准系列工作液的制备：分别吸取0.1mL、0.2mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL的混合标准中间液Ⅱ，用空白溶剂乙腈及空白基质提取液定容至10mL，将其稀释成丙氧基艾地那非、羟丙基去甲基他达拉非、N-乙基他达拉非的浓度分别为0.4ng/mL、0.8ng/mL、2.0ng/mL、4.0ng/mL、6.0ng/mL、8.0ng/mL，去甲基卡波地那非浓度分别为2.0ng/mL、4.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、30.0ng/mL、40.0ng/mL），作为标准系列工作液；（2）、试样制备2.1、固态试样称取0.5g试样于25mL容量瓶中，加入乙腈20mL，超声提取20min，放冷，乙腈定容至刻度，摇匀，用滤膜过滤，取续滤液，根据实际浓度适当稀释至标准曲线线性范围内，备用；2.2、液态试样吸取0.5mL于25mL容量瓶中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：董培智，张禄，裴晓芬，杨国伟，张俊凤，行江水，
申请(专利权)人：山西省食品药品检验所山西省药品包装材料监测中心，
类型：发明
国别省市：山西,14