一种莲子中农药联苯吡菌胺的定量检测方法技术

本发明专利技术提供一种莲子中农药联苯吡菌胺的定量检测方法，包括以下步骤：(1)样品制备：取干莲子样品，粉碎，过30目筛，装入洁净容器密封；(2)样品提取：取试样加入水、乙腈、冰乙酸，匀浆，加入氯化钠，离心，取上清液,蒸发浓缩，得到浓缩液，(3)样品净化：将浓缩液萃取，洗脱，收集洗脱液浓缩，用30％乙腈水溶液溶解，过0.22μm有机滤膜，得待测液；(4)采用超高效液相色谱‑串联质谱法进行分析检测待测液，计算待测液中联苯吡菌胺的测定值。本发明专利技术可准确、高效的检测出莲子中农药联苯吡菌胺的残留含量，同时还易于操作。

Quantitative determination of bifepiramide in lotus seeds

The present invention provides a quantitative detection method of diphenylpyramidine in lotus seeds, which includes the following steps: (1) sample preparation: taking dry lotus seeds samples, crushing them, passing through 30 mesh sieve, and sealing them in clean containers; (2) sample extraction: adding water, acetonitrile, glacial acetic acid, homogenate, adding sodium chloride, centrifuging, extracting supernatant, evaporating and concentrating, and obtaining concentrated solution; (3) sample purification: adding water, acetonitrile, glacial acetic acid, acetic acid, homogenate and sodium chloride to extract supernatant Concentrated liquid extraction, elution, collection eluent concentration, dissolution with 30% acetonitrile aqueous solution, through 0.22 micron organic filter membrane, the liquid to be measured; (4) Ultra-high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry was used to analyze and detect the liquid to be measured, and the determination value of bifenopyramidine in the solution to be measured was calculated. The invention can accurately and efficiently detect the residual content of the pesticide diphenylpyramidine in lotus seeds, and is also easy to operate.

【技术实现步骤摘要】
一种莲子中农药联苯吡菌胺的定量检测方法
本专利技术具体涉及一种莲子中农药联苯吡菌胺的定量检测方法。
技术介绍
联苯吡菌胺(bixafen)化学名称为N-(3',4'-二氯-5-氟联苯基-2-基)-3-(二氟甲基)-1-甲基吡唑-4-酰胺，是由拜耳作物科学公司开发的吡唑酰胺类杀菌剂，是目前增长最快的琥珀酸脱氢酶抑制剂(SDHI)类杀虫剂中的重要成员。2006年公开，2010年首登，2011年上市，现已在包括欧盟18国、智利和澳大利亚等在内的诸多国家登记和上市。联苯吡菌胺为内吸性杀菌剂，具有广泛的杀菌谱，专用于叶面喷雾，可有效防治作物上由子囊菌、担子菌和半知菌引起的重要病害。莲子，是睡莲科水生草本植物莲的种子，是我国一种历史悠久的天然保健品，因其具有丰富的营养价值以及优良的保健作用受到越来越多人的青睐。近年来，莲子产品出口量逐年增加，在推动地方外向型经济的发展中起到重要作用。在莲子的种植过程中按照莲藕的生长发育规律，一般分为幼苗期、成苗期、花果期、结藕期、休眠期等5个时期。其中莲子的成苗期、花果期和结藕期均在春夏季节，病菌繁殖较快，容易得叶枯病和叶锈病。试验证明，联苯吡菌胺等农药，对大叶类作物上的诸多病害展现了优良防效，如叶枯病(Septoriatritici)、叶锈病(Pucciniatriticina)、条锈病(Pucciniastriiformis)和黄斑病(Pyrenophoratritici-repentis)等，并能防治对甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂产生抗性的壳针孢属病原菌引起的叶斑病(Septoriatritici)，在防治病菌害中起着至关重要的作用。但农药在防治病虫害的同时也可能污染到果实本身，进而导致最终莲子产品的农药残留。2018年5月4日，欧盟委员会发布2018/687法规，修订(EC)No396/2005法规的附件Ⅱ和Ⅲ，主要修订联苯吡菌胺、氯虫苯甲酰胺、异丙噻菌胺等酰胺类农药在粮食、果蔬等部分食品中最大残留限量。我国是莲子生产、销售和出口大国，随着莲子产品国际市场日益繁荣，如何提高产品质量，有效应对发达国家的技术壁垒，成为当前莲子出口面临的重点课题。因此研究和制定莲子中新型农药联苯吡菌胺的定量检测方法具有重要意义。目前，国内外且未见莲子中联苯吡菌胺的检测方法报道。此外，经由ISO,ASTM,GB,SN等标准查新未见相关标准发布，经专利网查询也未见相关专利报道。因此急需开发准确、高效的莲子中新型农药联苯吡菌胺的定量检测技术。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题，在于提供一种莲子中农药联苯吡菌胺的定量检测方法，可准确、高效的检测出莲子中农药联苯吡菌胺的残留含量，同时还易于操作。本专利技术是这样实现的：一种莲子中农药联苯吡菌胺的定量检测方法，包括以下步骤：(1)样品制备：取干莲子样品，放入多功能粉碎机粉碎，过30目筛，装入洁净容器密封并做好标识，常温保存，备用；(2)样品提取：从制备样中称取试样于具塞离心管中，加入水、乙腈、冰乙酸，匀浆，加入氯化钠，离心，取上清液,转移至鸡心瓶中，45℃水浴旋转蒸发浓缩，得到浓缩液，待净化；(3)样品净化：取固相萃取柱安装于固相萃取装置上，加入无水硫酸钠，先用乙腈+甲苯预淋，当液面达到硫酸钠顶部时，迅速将试样浓缩液转入柱上，更换收集瓶收集，再用乙腈+甲苯2-3次洗涤鸡心瓶，再用15mL乙腈+甲苯洗脱固相萃取柱，收集洗脱液45℃浓缩至近干，氮气吹干，用30％乙腈水溶液溶解，过0.22μm有机滤膜，得待测液，待测；(4)采用超高效液相色谱-串联质谱法进行分析检测，以获得待测液中被测物即联苯吡菌胺的响应值，根据待测液中被测物的响应情况选取响应值相应的标准工作液进行色谱分析，标准工作液设有包含零点在内的五个浓度梯度，且标准工作液和待测液中联苯吡菌胺的响应值均应在仪器线性响应范围内，并同时设置空白对照；(5)将超高效液相色谱-串联质谱检测所获得的分取比例及联苯吡菌胺的峰面积代入下式(1)进行计算，以获得待测液中联苯吡菌胺的测定值；其中：X—试样中联苯吡菌胺残留含量，mg/kg；A—待测液中联苯吡菌胺的峰面积；As—标准工作溶液中联苯吡菌胺的峰面积；c—标准工作溶液中联苯吡菌胺浓度，mg/L；V—待测液最终定容体积，mL；m—试样的质量，g；R—分取比例。进一步地，所述检测方法中步骤(1)-(3)具体如下：(1)样品制备：取干莲子样品，放入多功能粉碎机粉碎，过30目筛，试验分为两份，装入洁净容器密封并做好标识，常温保存，备用；(2)样品提取：从制备样中称取试样3.0g于50mL具塞离心管中，加入5mL水，30mL乙腈，0.5mL冰乙酸，匀浆2min，加入5.0g氯化钠，5000r/min离心5min，取上清液15mL,转移至100mL鸡心瓶中，45℃水浴旋转蒸发浓缩至1mL，得到浓缩液，待净化；(3)样品净化：取固相萃取柱，安装于固相萃取装置上，加入3g无水硫酸钠，先用3mL乙腈+甲苯预淋，当液面达到硫酸钠顶部时，迅速将试样浓缩液转入柱上，更换收集瓶收集，再用乙腈+甲苯洗涤鸡心瓶2-3次，每次3mL,再用15mL乙腈+甲苯洗脱固相萃取柱，收集洗脱液45℃浓缩至近干，氮气吹干，用30％乙腈水溶液1.5mL溶解，过0.22μm有机滤膜，得待测液，待测。进一步地，所述步骤(4)中，所述超高效液相色谱-串联质谱的条件为：A.超高效液相色谱条件为:色谱柱：XR-C18柱，50mm×2.1mm，1.7μm；流动相a：5mmol/L乙酸铵和0.1％甲酸的水溶液；流动相b：乙腈；流速：0.3mL/min；进样量：10μL；柱温：40℃；B.质谱条件：离子源：电喷雾ESI，正离子；扫描方式：多反应监测MRM；雾化气、窗帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气。进一步地，所述超高效液相色谱仪流动相梯度洗脱程序如下：进一步地，所述质谱仪的监测离子对、定量离子对、去簇电压、碰撞气体能量、碰撞池出口电压如下：本专利技术具有如下优点：本专利技术在检测莲子中农药联苯吡菌胺的残留含量方面具有准确性高、效率高、易于操作等优点，填补了我国在莲子中新型农药联苯吡菌胺的检测技术上的空白。【具体实施方式】本专利技术涉及一种莲子中新型农药联苯吡菌胺的检测方法，包括以下步骤：(1)样品制备：取1000g代表性干莲子样品，四分法取样，放入多功能粉碎机粉碎，过30目筛，试验分为两份，装入洁净容器密封并做好标识，常温保存，备用；(2)样品提取：从制备样中称取试样3.0g(精确至0.01g)于50mL具塞离心管中，加入5mL水，30mL乙腈，0.5mL冰乙酸，匀浆2min，加入5.0g氯化钠，5000r/min离心5min，取上清液15mL,转移至100mL鸡心瓶中，45℃水浴旋转蒸发浓缩至1mL，待净化；(3)样品净化：取固相萃取柱(氨基填料，500mg/3mL)安装于固相萃取装置上，加入3g无水硫酸钠，先用3mL乙腈+甲苯(3:1,V:V)预淋，当液面达到硫酸钠顶部时，迅速将试样浓缩液转入柱上，更换收集瓶收集，再用乙腈+甲苯(3:1,V:V)3次洗涤鸡心瓶，每次3mL,再用15mL乙腈+甲苯(3:1,V:V)洗脱固相萃取柱，收集洗脱液45℃浓缩至近干，氮气吹干，用30％乙腈水溶液1.5mL溶解,过0.22μm有机滤膜，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种莲子中农药联苯吡菌胺的定量检测方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)样品制备：取干莲子样品，放入多功能粉碎机粉碎，过30目筛，装入洁净容器密封并做好标识，常温保存，备用；(2)样品提取：从制备样中称取试样于具塞离心管中，加入水、乙腈、冰乙酸，匀浆，加入氯化钠，离心，取上清液,转移至鸡心瓶中，45℃水浴旋转蒸发浓缩，得到浓缩液，待净化；(3)样品净化：取固相萃取柱安装于固相萃取装置上，加入无水硫酸钠，先用乙腈+甲苯预淋，当液面达到硫酸钠顶部时，迅速将试样浓缩液转入柱上，更换收集瓶收集，再用乙腈+甲苯2‑3次洗涤鸡心瓶，再用15mL乙腈+甲苯洗脱固相萃取柱，收集洗脱液45℃浓缩至近干，氮气吹干，用30％乙腈水溶液溶解，过0.22μm有机滤膜，得待测液，待测；(4)采用超高效液相色谱‑串联质谱法进行分析检测，以获得待测液中被测物即联苯吡菌胺的响应值，根据待测液中被测物的响应情况选取响应值相应的标准工作液进行色谱分析，标准工作液设有包含零点在内的五个浓度梯度，且标准工作液和待测液中联苯吡菌胺的响应值均应在仪器线性响应范围内，并同时设置空白对照；(5)将超高效液相色谱‑串联质谱检测所获得的分取比例及联苯吡菌胺的峰面积代入下式(1)进行计算，以获得待测液中联苯吡菌胺的测定值；...

【技术特征摘要】
1.一种莲子中农药联苯吡菌胺的定量检测方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)样品制备：取干莲子样品，放入多功能粉碎机粉碎，过30目筛，装入洁净容器密封并做好标识，常温保存，备用；(2)样品提取：从制备样中称取试样于具塞离心管中，加入水、乙腈、冰乙酸，匀浆，加入氯化钠，离心，取上清液,转移至鸡心瓶中，45℃水浴旋转蒸发浓缩，得到浓缩液，待净化；(3)样品净化：取固相萃取柱安装于固相萃取装置上，加入无水硫酸钠，先用乙腈+甲苯预淋，当液面达到硫酸钠顶部时，迅速将试样浓缩液转入柱上，更换收集瓶收集，再用乙腈+甲苯2-3次洗涤鸡心瓶，再用15mL乙腈+甲苯洗脱固相萃取柱，收集洗脱液45℃浓缩至近干，氮气吹干，用30％乙腈水溶液溶解，过0.22μm有机滤膜，得待测液，待测；(4)采用超高效液相色谱-串联质谱法进行分析检测，以获得待测液中被测物即联苯吡菌胺的响应值，根据待测液中被测物的响应情况选取响应值相应的标准工作液进行色谱分析，标准工作液设有包含零点在内的五个浓度梯度，且标准工作液和待测液中联苯吡菌胺的响应值均应在仪器线性响应范围内，并同时设置空白对照；(5)将超高效液相色谱-串联质谱检测所获得的分取比例及联苯吡菌胺的峰面积代入下式(1)进行计算，以获得待测液中联苯吡菌胺的测定值；其中：X—试样中联苯吡菌胺残留含量，mg/kg；A—待测液中联苯吡菌胺的峰面积；As—标准工作溶液中联苯吡菌胺的峰面积；c—标准工作溶液中联苯吡菌胺浓度，mg/L；V—待测液最终定容体积，mL；m—试样的质量，g；R—分取比例。2.根据权利要求1所述的一种莲子中农药联苯吡菌胺的定量检测方法，其特征在于：所述检测方法中步骤(1)-(3)具体如下：(1)样品制备：取干莲子样品，...

【专利技术属性】
技术研发人员：张云，谢向机，陈泽宇，
申请(专利权)人：张云，
类型：发明
国别省市：福建,35