一种甾体化合物的分析方法技术

本发明专利技术公开的是一种甾体化合物的分析方法，解决了现有技术中均需要通过多种检测方法相结合，导致现有分析方法操作十分复杂，且检测结果也不一定准确的问题。本发明专利技术包括1)分别取已知种类的单一杂质和奥贝胆酸溶解于流动相中配置成终浓度为0.1～0.2mg/mL的对照品溶液，进行高效液相色谱仪检测，生成不同的单一杂质的对照品图谱，将图谱曲线进行合并制成对照图谱，并计算出对照图谱中每种单一杂质的波面积Sd；2)将待测样品溶于流动相中得到与对照品溶液相同浓度的待测溶液，在相同高效液相色谱仪检测条件下检测生成待测样品图谱，采用待测样品图谱与对照图谱对比即可得到杂质的种类和含量。本发明专利技术具有检测更加简单，效果更加显著等优点。

A Method for the Analysis of Steroid Compounds

The present invention discloses an analytical method for steroid compounds, which solves the problem that the existing analytical methods need to be combined by various detection methods in the prior art, resulting in very complex operation of the existing analytical methods, and the detection results are not necessarily accurate. The invention comprises the following steps: 1) dissolving known single impurities and Obeicholic acid in mobile phase into control solution with final concentration of 0.1-0.2 mg/mL, detecting by high performance liquid chromatography, generating reference spectra of different single impurities, merging the spectra curves into control spectra, and calculating the wave area Sd of each single impurity in the control spectra; The samples were dissolved in mobile phase to obtain the same concentration of the solution to be tested as the control solution. The samples were detected under the same conditions of high performance liquid chromatography. The types and contents of impurities could be obtained by comparing the samples to be tested with the control ones. The invention has the advantages of simpler detection and more remarkable effect.

【技术实现步骤摘要】
一种甾体化合物的分析方法
本专利技术涉及一种质量检测方法，具体涉及的是一种甾体化合物的分析方法。
技术介绍
甾体母核，指的是它的基本碳架具有一个"环戊烷并多氢菲"的母核和三个侧链。化学结构中都具有甾体母核。据C17链不同，其可以分为胆酸类、强心苷、甾醇和昆虫变态激素、C21甾体类、甾体皂苷和甾体生物碱等。甾体化合物广泛存在于动植物体内，许多具有各种生物活性，它们的应用非常广泛，有些被采用治疗疾病或发展生产，如治疗过敏性疾病的氢化可的松、避孕药黄体酮、利尿剂安体舒通、合成甾体激素的薯蓣皂甙元、强心作用的狄戈辛、蟾毒甙等都是甾体化合物。奥贝胆酸属法尼醇X受体激动剂，通过活化法尼醇X受体，间接抑制细胞色素7A1(CYP7A1)的基因表达。由于CYP7A1是胆酸生物合成的限速酶，因此奥贝胆酸可以抑制胆酸合成，用于治疗原发性胆汁性肝硬化(PBC)和非酒精性脂肪性肝病。奥贝胆酸作为PBC的二线治疗药物，用于熊去氧胆酸响应不足或不耐受患者，有望取代熊去氧胆酸的治疗地位。奥贝胆酸由美国Intercept制药公司研发成功，是二十年来首个研发用于治疗胆汁淤积性肝病的药物，市场潜力巨大。奥贝胆酸及其中间体均属于甾体化合物，但在现有技术中，由于奥贝胆酸大都都是从生物体中提取获得，在制备获得的成品中不仅仅包含有奥贝胆酸，也包含有奥贝胆酸的中间体以及其他杂质，因而在制备完成后，需要结合多种检测方法才能有效检测出成品中各物质的具体种类和含量，现有分析方法操作十分复杂，检测结果也不一定准确。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决现有技术中均需要通过多种检测方法相结合，导致现有分析方法操作十分复杂，且检测结果也不一定准确的问题；提供解决上述问题的一种甾体化合物的分析方法。为达到上述目的，本专利技术的技术方案如下：一种甾体化合物的分析方法，包括：1)分别取已知种类的单一杂质和奥贝胆酸溶解于流动相中配置成终浓度为0.1～0.2mg/mL的对照品溶液，将对照品溶液在流动相流速为0.5mL/min～0.8mL/min、检测波长为250nm～270nm、色谱柱温度为35℃～50℃的检测条件下进行高效液相色谱仪检测，生成不同的单一杂质的对照品图谱，将图谱曲线进行合并制成对照图谱，并计算出对照图谱中每种单一杂质的波面积Sd；2)将待测样品溶于流动相中得到与对照品溶液相同浓度的待测溶液，在相同高效液相色谱仪检测条件下检测生成待测样品图谱，采用待测样品图谱与对照图谱对比即可得到杂质的种类，计算相应杂质种类的波面积Sc，通过Sc与Sd对比计算即可测得相应杂质在待测样品中的含量。通过本专利技术的方法，可以只需分别对已知杂质进行一次高效液相色谱仪检测，即可有效将其添加到对照品图谱中，完善对照品图谱的构建，进而，在后期待测样品检测时，无需重复的分别采用不同的杂质作为对照进行检测分析，只需对待测样品图谱进行一次检测即可获得待测样品图谱，通过待测样品图谱与对照图谱进行对比，即可有效实现待测样品中杂质的分析检测，获得杂质的种类的含量，检测更加简单，效果更加显著。进一步，所述流动相为体积比为30︰50～60︰10～20的甲醇、乙腈和磷酸缓冲液的混合溶液。优选地，所述甲醇、乙腈和磷酸缓冲液的体积比30︰57︰13。进一步，所述对照品溶液和待测溶液的终浓度为0.15mg/mL。进一步，所述高效液相色谱仪检测的条件为：流动相流速为0.6mL/min、检测波长为260nm、色谱柱温度为42℃。进一步，所述高效液相色谱仪的进样体积为10μL。通过上述参数的优化，能获得最佳的峰分离度，由于含量与峰的面积大小相关，进而获得更加准确的杂质的含量，效果十分显著。本专利技术与现有技术相比，具有以下优点及有益效果：1、本专利技术能有效检测出成品中各物质的组成和含量，检测更加简单，效果更加显著；2、本专利技术能获得最佳的峰分离度，由于含量与峰的面积大小相关，进而获得更加准确的杂质的含量，效果十分显著。具体实施方式下面结合实施例，对本专利技术作进一步地详细说明，但本专利技术的实施方式不限于此。实施例1一种甾体化合物的分析方法，包括：1)分别取已知种类的单一杂质和奥贝胆酸溶解于流动相中配置成终浓度为0.15mg/mL的对照品溶液，将对照品溶液在流动相流速为0.6mL/min、检测波长为260nm、色谱柱温度为42℃的检测条件下进行高效液相色谱仪检测，生成不同的单一杂质的对照品图谱，将图谱曲线进行合并制成对照图谱，并计算出对照图谱中每种单一杂质的波面积Sd；2)将待测样品溶于流动相中得到与对照品溶液相同浓度的待测溶液，在相同高效液相色谱仪检测条件下检测生成待测样品图谱，采用待测样品图谱与对照图谱对比即可得到杂质的种类，计算相应杂质种类的波面积Sc，通过Sc与Sd对比计算即可测得相应杂质在待测样品中的含量。其中，所述高效液相色谱仪的进样体积为10μL。甲醇、乙腈和磷酸缓冲液的体积比30︰57︰13；对照品溶液中单一杂质与奥贝胆酸之间的质量比为符合行标或国标的最高含量。实施例2本实施例与实施例1的不同在于，参数的不同，具体设置如下：1)分别取不同的杂质和奥贝胆酸溶解于流动相中配置成终浓度为0.15mg/mL的对照品溶液，其中杂质为奥贝胆酸和杂质总质量的0.015％，将对照品溶液在流动相流速为1mL/min、检测波长为280nm、色谱柱温度为35℃的检测条件下进行高效液相色谱仪检测，生成不同杂质情况下的对照品图谱，将图谱曲线进行合并制成对照图谱，并计算出对照图谱中不同杂质的波面积Sd；高效液相色谱仪的进样体积为10μL；所述流动相为体积比为20︰50︰30的甲醇、乙腈和磷酸缓冲液的混合溶液。2)将待测样品溶于流动相中得到与对照品溶液相同浓度的待测溶液，在相同高效液相色谱仪检测条件下检测生成待测样品图谱，采用待测样品图谱与对照图谱对比即可得到杂质的种类，计算相应杂质种类的波面积Sc，通过Sc与Sd对比计算即可测得相应杂质在待测样品中的含量。通过上述实施例1和实施例2的检测结果对比可知，实施例2中的波峰分离程度不佳，检测出杂质的含量不够准确，实施例1中不仅仅波峰分离程度佳，能有效确定待测样品中的种类，还能有效检测出相应杂质的含量，效果十分显著。上述实施例仅为本专利技术的优选实施例，并非对本专利技术保护范围的限制，但凡采用本专利技术的设计原理，以及在此基础上进行非创造性劳动而作出的变化，均应属于本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种甾体化合物的分析方法，其特征在于，包括：1)分别取已知种类的单一杂质和奥贝胆酸溶解于流动相中配置成终浓度为0.1～0.2mg/mL的对照品溶液，将对照品溶液在流动相流速为0.5mL/min～0.8mL/min、检测波长为250nm～270nm、色谱柱温度为35℃～50℃的检测条件下进行高效液相色谱仪检测，生成不同的单一杂质的对照品图谱，将图谱曲线进行合并制成对照图谱，并计算出对照图谱中每种单一杂质的波面积Sd；2)将待测样品溶于流动相中得到与对照品溶液相同浓度的待测溶液，在相同高效液相色谱仪检测条件下检测生成待测样品图谱，采用待测样品图谱与对照图谱对比即可得到杂质的种类，计算相应杂质种类的波面积Sc，通过Sc与Sd对比计算即可测得相应杂质在待测样品中的含量。

【技术特征摘要】
1.一种甾体化合物的分析方法，其特征在于，包括：1)分别取已知种类的单一杂质和奥贝胆酸溶解于流动相中配置成终浓度为0.1～0.2mg/mL的对照品溶液，将对照品溶液在流动相流速为0.5mL/min～0.8mL/min、检测波长为250nm～270nm、色谱柱温度为35℃～50℃的检测条件下进行高效液相色谱仪检测，生成不同的单一杂质的对照品图谱，将图谱曲线进行合并制成对照图谱，并计算出对照图谱中每种单一杂质的波面积Sd；2)将待测样品溶于流动相中得到与对照品溶液相同浓度的待测溶液，在相同高效液相色谱仪检测条件下检测生成待测样品图谱，采用待测样品图谱与对照图谱对比即可得到杂质的种类，计算相应杂质种类的波面积Sc，通过Sc与Sd对比计算即可测得相应杂质在待测...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜琳，吴进，张翔，向世明，宋立波，杜烨，彭捷，黄清东，
申请(专利权)人：四川百特芳华医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51