The invention discloses a method for the determination of glucose by TMB fluorescence spectroscopy catalyzed by enzymes, which is characterized by the following steps: (1) preparing a standard solution system of glucose with known concentration and determining its fluorescence peak intensity value at 380 nm; (2) preparing a blank control solution system and determining its fluorescence peak intensity value as F0; (3) calculating F=F_F0; (4) using F to determine the fluorescence peak intensity of glucose. Sugar concentration as working curve; (5) Prepare the sample solution, determine its fluorescence peak intensity value as F sample, calculate F sample = F sample F0; (6) Calculate the concentration of glucose in the sample according to the working curve. This method uses enzymatic oxidation of TMB to produce fluorescent products, and uses the reaction products as fluorescent molecular probes to make the fluorescence peak intensity linearly related to the concentration of the tested substance. The method is simple, selective and sensitive for quantitative determination of the target substance.
【技术实现步骤摘要】
一种用酶催化氧化TMB荧光光谱测定葡萄糖的方法
本专利技术涉及分析化学领域,具体是一种用酶催化氧化TMB荧光光谱测定葡萄糖的方法。
技术介绍
葡萄糖(glucose)是最重要的活细胞能量来源之一,在医药上常用作营养剂,其在生物医药方面应用非常广泛,因此,检测葡萄糖的含量具有重要的意义。目前,葡萄糖的检测方法有比色法、电化学法、荧光法、化学发光法等方法。有文献报道了现有技术有下面几种方法:一种具有催化活性的多元素掺杂的碳点(ME-CDs),该碳点被作为一个比色传感器应用于葡萄糖的检测,该方法线性范围为0.20-2.50mmol/L、检出限为0.06mmol/L,该方法特异性较好,但灵敏度低;用Pt纳米簇材料,在H2O2存在的条件下,它可以催化氧化3,3',5,5'-四甲基联苯二胺(TMB)显色,可用于检测0-400μmol/L葡萄糖,检出限为0.28μmol/L,该方法将具有催化活性的银纳米粒子嵌入棉纤维中,建立了一个纳米酶催化快速检测葡萄糖的光度法;一种MoS2/GO复合物用于检测葡萄糖的含量,该方法线性范围为0.83μmol/L-65nmol/L;以一种石墨烯-碳的氮化物(g-C3N4)/氧化铁-铜的纳米结构,用于非酶电化学测定0.6μmol/L-2.0mmol/L葡萄糖,检出限为0.3μmol/L一个与定容结构相结合的射频贴片(radiofrequencypatch)生物传感器用于监测葡萄糖含量,该方法线性范围为50–600mg/dL、检出限为15.22mg/dL;一种基于MnO2-酚醛树脂(PFR)的纳米复合材料的荧光检测策略,用于检测血液中的葡萄糖 ...
【技术保护点】
1.一种用酶催化氧化TMB荧光光谱测定葡萄糖的方法,其特征是,包括如下步骤:(1)制备已知浓度的葡萄糖标准溶液体系:于不同的刻度试管中,依次加入1μL‑40μL 500μmol/L葡萄糖标准溶液、10μL‑50μL 0.11mg/mL葡萄糖氧化酶溶液、100μL‑200μL 0.02mol/L pH 7.4PBS缓冲溶液和50μL‑150μL 0.5mmol/L TMB溶液,摇匀、于40℃水浴反应20min,冰水终止反应,用二次蒸馏水定容至1.5mL;(2)制备空白对照溶液体系:采用步骤(1)的方法不加葡萄糖标准溶液制备空白对照溶液体系;(3)分别取按步骤(1)、(2)制备的葡萄糖标准溶液体系及空白对照溶液体系倾入石英比色皿中,在荧光光谱仪上,设定仪器参数以280nm为激发波长扫描获得体系的荧光光谱,测定380nm处的荧光强度值为F,同时测定空白对照溶液体系的荧光强度值为F0,计算ΔF=F‑F0;(4)依据ΔF对葡萄糖的浓度关系做工作曲线;(5)依照步骤(1)的方法制备样品溶液,其中加入的葡萄糖标准溶液替换为样品溶液,并按步骤(3)的方法测定样品溶液的荧光峰强度值为F样品,计算ΔF样品 ...
【技术特征摘要】
1.一种用酶催化氧化TMB荧光光谱测定葡萄糖的方法,其特征是,包括如下步骤:(1)制备已知浓度的葡萄糖标准溶液体系:于不同的刻度试管中,依次加入1μL-40μL500μmol/L葡萄糖标准溶液、10μL-50μL0.11mg/mL葡萄糖氧化酶溶液、100μL-200μL0.02mol/LpH7.4PBS缓冲溶液和50μL-150μL0.5mmol/LTMB溶液,摇匀、于40℃水浴反应20min,冰水终止反应,用二次蒸馏水定容至1.5mL;(2)制备空白对照溶液体系:采用步骤(1)的方法不加葡萄糖标准溶液制备空白对照溶液体系;...
【专利技术属性】
技术研发人员:蒋治良,姚东梅,李重宁,梁爱惠,
申请(专利权)人:广西师范大学,
类型:发明
国别省市:广西,45
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