一种可检测8-OHdG的金、银纳米粒子手性二聚体制造技术

本发明专利技术公开了一种可检测8‑OHdG的金、银纳米粒子手性二聚体，属于分析化学技术领域。本发明专利技术的金、银纳米粒子手性二聚体具有高产率、高稳定性以及高生物相容性的优势；运用此二聚体建立的检测细胞内8‑OHdG含量变化的方法，可通过荧光信号实现细胞内8‑OHdG的原位成像，且具有高灵敏度、高选择性，在评价DNA损伤程度方面具有很好的应用前景。

A Chiral Dimer of Gold and Silver Nanoparticles for Detection of 8-OHdG

The invention discloses a chiral dimer capable of detecting 8 OHdG gold and silver nanoparticles, which belongs to the technical field of analytical chemistry. The gold and silver nanoparticles chiral dimer of the invention has the advantages of high yield, high stability and high biocompatibility; the method for detecting the change of 8 OHdG content in cells established by the dimer can realize in situ imaging of 8 OHdG content in cells by fluorescence signal, and has high sensitivity and selectivity, and has a good application prospect in evaluating DNA damage degree.

【技术实现步骤摘要】
一种可检测8-OHdG的金、银纳米粒子手性二聚体
本专利技术涉及一种可检测8-OHdG的金、银纳米粒子手性二聚体，属于分析化学

技术介绍
DNA是生命体的重要遗传物质，而DNA损伤是在生物体中一种普遍现象。在DNA损伤检测中，8-OHdG是氧化损伤生物标志物中最有代表性的一种，它可以通过影响DNA甲基化程度而间接影响基因表达，还能直接引起基因的突变和癌基因的表达，而且它与DNA链的断裂有关，因此，检测细胞内8-OHdG水平对评价DNA损伤程度有很大指导意义。目前，常用于检测细胞内8-OHdG水平的方法有32P后标记法、ELISA法、高效液相色谱法等，ELISA法具有前处理方法复杂的缺陷；高效液相色谱法成本高、检测周期长，且上述方法都是通过外源性的化学或生物物质及其代谢物检测细胞内8-OHdG水平、评价DNA损伤程度的。而外源性的化学或生物物质及其代谢物，经常会对细胞中的DNA造成氧化损伤继而引发相关疾病，因此，急需设计一种新的、灵敏的、可应用于细胞内检测8-OHdG水平、评价DNA损伤程度，且不会对细胞中的DNA造成氧化损伤的试剂及相关应用方法。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供了一种可检测8-OHdG的金、银纳米粒子手性二聚体。此二聚体具有高产率、高稳定性以及高生物相容性的优势；运用此二聚体建立的检测细胞内8-OHdG含量变化的方法，可通过荧光信号实现细胞内8-OHdG的原位成像，且具有高灵敏度、高选择性，在评价DNA损伤程度方面具有很好的应用前景。本专利技术的技术方案如下：本专利技术提供了一种可检测8-OHdG的金、银纳米粒子手性二聚体，所述金、银纳米粒子手性二聚体包含通过DNA3聚合在一起的聚合体1以及聚合体2；所述聚合体1是金纳米粒子与DNA1的聚合体；所述聚合体2是银纳米粒子与DNA2的聚合体；所述DNA3是8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的适配体序列；所述DNA1与DNA2分别与DNA3互补；所述DNA3的一端修饰有Cy5。在本专利技术的一种实施方式中，所述DNA1、DNA2、DNA3的核苷酸序列分别为SEQIDNO.1、SEQIDNO.2、SEQIDNO.3。在本专利技术的一种实施方式中，所述手性二聚体需与穿膜肽(TAT)进行偶联，得到表面修饰有穿膜肽的金、银纳米粒子手性二聚体。在本专利技术的一种实施方式中，所述穿膜肽的氨基酸序列为SEQIDNO.4。本专利技术提供了上述一种可检测8-OHdG的金、银纳米粒子手性二聚体的制备方法，所述方法为将金纳米粒子与银纳米粒子重悬于缓冲液中，得到含有金纳米粒子的缓冲液和含有银纳米粒子的缓冲液；分别向含有金纳米粒子的缓冲液和含有银纳米粒子的缓冲液中加入8-OHdG适配体序列的互补序列DNA1、DNA2进行反应，得到含有聚合体1的反应液1和含有聚合体2的反应液2；将反应液1和反应液2离心去上清除去未反应的DNA，用缓冲液重悬，得到重悬液1和重悬液2；将重悬液1和重悬液2混合并加入修饰有Cy5的8-OHdG适配体序列DNA3，并加入NaCl溶液进行反应，得到含有二聚体的反应液3；将反应液3离心去上清除去未反应的DNA3，并用缓冲液重悬，得到重悬液3；将重悬液3与穿膜肽混合进行偶联，得到含有表面修饰有穿膜肽的金、银纳米粒子手性二聚体的反应液4；将反应液4离心去除上清，得到表面修饰有穿膜肽的金、银纳米粒子手性二聚体。在本专利技术的一种实施方式中，所述DNA1、DNA2、DNA3的核苷酸序列分别为SEQIDNO.1、SEQIDNO.2、SEQIDNO.3；所述穿膜肽的核苷酸序列为SEQIDNO.4。在本专利技术的一种实施方式中，所述金纳米粒子与银纳米粒子需浓缩后再重悬于缓冲液中。在本专利技术的一种实施方式中，所述金纳米粒子与银纳米粒子的浓缩倍数为9-11倍。在本专利技术的一种实施方式中，所述金纳米粒子与银纳米粒子的浓缩倍数为10倍。在本专利技术的一种实施方式中，所述金纳米粒子的粒度为23-27nm；银纳米粒子的粒度为9-10nm。在本专利技术的一种实施方式中，所述金纳米粒子的粒度为25nm；银纳米粒子的粒度为10nm。在本专利技术的一种实施方式中，所述缓冲液为PB缓冲液。在本专利技术的一种实施方式中，所述PB缓冲液的浓度为9-11mmol/L。在本专利技术的一种实施方式中，所述PB缓冲液的浓度为10mmol/L。在本专利技术的一种实施方式中，所述PB缓冲液的pH为7-8。在本专利技术的一种实施方式中，所述PB缓冲液的pH为7.4。在本专利技术的一种实施方式中，所述含有金纳米粒子的缓冲液中，金纳米粒子的浓度为9-11nmol/L；含有银纳米粒子的缓冲液中，银纳米粒子的浓度为9-11nmol/L。在本专利技术的一种实施方式中，所述含有金纳米粒子的缓冲液中，金纳米粒子的浓度为10nmol/L；含有银纳米粒子的缓冲液中，银纳米粒子的浓度为10nmol/L。在本专利技术的一种实施方式中，所述DNA1与金纳米粒子的摩尔比为9-(11:1)；所述DNA2与银纳米粒子的摩尔比为9-(11:1)。在本专利技术的一种实施方式中，所述DNA1与金纳米粒子的摩尔比为10:1；所述DNA2与银纳米粒子的摩尔比为10:1。在本专利技术的一种实施方式中，所述反应液1的离心转速为7500-8500rpm、时间为9-11min。在本专利技术的一种实施方式中，所述反应液1的离心转速为8000rpm、时间为10min。在本专利技术的一种实施方式中，所述反应液2的离心转速为12000-14000rpm、时间为9-11min。在本专利技术的一种实施方式中，所述反应液2的离心转速为13000rpm、时间为10min。在本专利技术的一种实施方式中，所述DNA3与聚合体1与聚合体2的摩尔比均为9-(11:1)。在本专利技术的一种实施方式中，所述DNA3与聚合体1与聚合体2的摩尔比均为10:1。在本专利技术的一种实施方式中，所述NaCl溶液的浓度为4.5-5.5mol/L。在本专利技术的一种实施方式中，所述NaCl溶液的浓度为5mol/L。在本专利技术的一种实施方式中，所述反应液3中NaCl溶液的浓度为45-55mmol/L。在本专利技术的一种实施方式中，所述反应液3中NaCl溶液的浓度为50mmol/L。在本专利技术的一种实施方式中，所述反应液3需于室温避光反应22-26h。在本专利技术的一种实施方式中，所述反应液3需于室温避光反应24h。在本专利技术的一种实施方式中，所述反应液3的离心转速为7000-8000rpm、时间为18-22min。在本专利技术的一种实施方式中，所述反应液3的离心转速为13000rpm、时间为10min。在本专利技术的一种实施方式中，所述反应液3需于4℃避光保存。在本专利技术的一种实施方式中，所述重悬液3需在保护剂的保护下与穿膜肽混合进行偶联。在本专利技术的一种实施方式中，所述保护剂为SH-PEG-5000。在本专利技术的一种实施方式中，所述重悬液3中二聚体、SH-PEG-5000、穿膜肽的摩尔比为(1:450)-(550:1500)-2500。在本专利技术的一种实施方式中，所述重悬液3中二聚体、SH-PEG-5000、穿膜肽的摩尔比为1:500:2000。在本专利技术的一种实施方式中，所述偶联的时间为10-14h。在本专利技术的一种实施方式中，所述偶联的时间为12h。在本专利技术的一种实施方式中，所述反应液4的离心转速为650本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种可检测8‑OHdG的金、银纳米粒子手性二聚体，其特征在于，所述金、银纳米粒子手性二聚体包含通过DNA3聚合在一起的聚合体1以及聚合体2；所述聚合体1是金纳米粒子与DNA1的聚合体；所述聚合体2是银纳米粒子与DNA2的聚合体；所述DNA3是8‑羟基脱氧鸟苷(8‑OHdG)的适配体序列；所述DNA1与DNA2分别与DNA3互补；所述DNA3的一端修饰有Cy5。

【技术特征摘要】
1.一种可检测8-OHdG的金、银纳米粒子手性二聚体，其特征在于，所述金、银纳米粒子手性二聚体包含通过DNA3聚合在一起的聚合体1以及聚合体2；所述聚合体1是金纳米粒子与DNA1的聚合体；所述聚合体2是银纳米粒子与DNA2的聚合体；所述DNA3是8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的适配体序列；所述DNA1与DNA2分别与DNA3互补；所述DNA3的一端修饰有Cy5。2.如权利要求1所述的一种可检测8-OHdG的金、银纳米粒子手性二聚体，其特征在于，所述手性二聚体需与穿膜肽(TAT)进行偶联，得到表面修饰有穿膜肽的金、银纳米粒子手性二聚体。3.如权利要求1或2所述的一种可检测8-OHdG的金、银纳米粒子手性二聚体的制备方法，其特征在于，所述方法为将金纳米粒子与银纳米粒子重悬于缓冲液中，得到含有金纳米粒子的缓冲液和含有银纳米粒子的缓冲液；分别向含有金纳米粒子的缓冲液和含有银纳米粒子的缓冲液中加入8-OHdG适配体序列的互补序列DNA1、DNA2进行反应，得到含有聚合体1的反应液1和含有聚合体2的反应液2；将反应液1和反应液2离心去上清除去未反应的DNA，用缓冲液重悬，得到重悬液1和重悬液2；将重悬液1和重悬液2混合并加入修饰有Cy5的8-OHdG适配体序列DNA3，并加入NaCl溶液进行反应，得到含有二聚体的反应液3；将反应液3离心去上清除去未反应的DNA3，并用缓冲液重悬，得到重悬液3；将重悬液3与穿膜肽混合进行偶联，得到含有表面修饰有穿膜肽的金、银纳米粒子手性二聚体的反应液4；将反应液4离心去除上清，得到表面修饰有穿膜肽的金、银纳米粒子手性二聚体。4.如权利要求3所述的一种可检测8-O...

【专利技术属性】
技术研发人员：匡华，王秀秀，胥传来，徐丽广，马伟，刘丽强，吴晓玲，宋珊珊，胡拥明，
申请(专利权)人：江南大学，无锡迪腾敏生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32