一种葡萄糖检测反应液以及细胞液葡萄糖含量检测方法技术

本发明专利技术公开了一种葡萄糖检测反应液以及细胞液葡萄糖含量检测方法，本发明专利技术利用GOD、HRP能够催化显色剂的显色反应的原理，通过读取吸光度值作出标准曲线，计算葡萄糖含量；这样的方法在细胞培养过程中用少量细胞液样品即可完成葡萄糖含量检测，无需进行离心等前处理工作，简化检测步骤；测定用酶标仪即可完成，操作简便；检测线性范围为0‑12g/L，满足细胞培养检测需要；标曲拟合线性方程相关系数高，测定准确；本方法最多可同时检测89个细胞液样品；原料简单易得，单位检测成本低廉。

A method for the determination of glucose in reaction fluid and cell fluid

The invention discloses a glucose detection reaction solution and a method for detecting the glucose content in cell fluid. The method uses the principle that GOD and HRP can catalyze the color reaction of the chromogenic reagent, and calculates the glucose content by reading the absorbance value to draw a standard curve. This method can complete the glucose content detection with a small number of cell fluid samples in the process of cell culture without separation. Heart isopreprocessing simplifies the detection procedure; the determination can be accomplished by enzyme labeling instrument, and the operation is simple; the linear range of detection is 0 12g/L, which meets the needs of cell culture detection; the correlation coefficient of linear equation of curve fitting is high and the determination is accurate; this method can detect up to 89 cell fluid samples at the same time; the raw materials are simple and easy to obtain, and the unit detection cost is low.

【技术实现步骤摘要】
一种葡萄糖检测反应液以及细胞液葡萄糖含量检测方法
本专利技术涉及细胞培养中的葡萄糖监测领域，特别是一种葡萄糖检测反应液以及细胞液葡萄糖含量检测方法。
技术介绍
葡萄糖(Glucose)，有机化合物，分子式C6H12O6，是自然界分布最广且最为重要的一种单糖。葡萄糖在生物学领域具有重要地位，是活细胞的能量来源和新陈代谢中间产物，也是细胞的主要供能物质。在细胞培养，尤其是批次补料实验过程中，葡萄糖的监测及及时补充是维持细胞存活的基础。目前实验室细胞液葡萄糖含量主要由紫外分光光度计法或全自动生化分析仪检测，检测原理主要基于葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法、葡萄糖氧电极法等。仪器检测虽然自动化程度高，较为方便快捷，但受限于仪器通量，难以同时完成大批量细胞液样品检测。此外，利用生化分析仪检测Glucose受仪器限制，需要配套的试剂、标定物及质控物，单位细胞液样品成本较高。紫外法虽然成本相对较低，但需要细胞液样品量相对较多，不利于小体积细胞培养使用。这些现有技术的缺点在于：检测成本较高，细胞液样品量大，不能同时完成大批量细胞液样品检测，使用受仪器、耗材、资源等限制；市场需要一种在细胞培养过程中用少量细胞液样品即可快捷、准确、大量地完成葡萄糖含量检测的反应液和检测方法，本专利技术解决这样的问题。
技术实现思路
为解决现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种葡萄糖检测反应液以及细胞液葡萄糖含量检测方法，本专利技术利用GOD、HRP能够催化ABTS的显色反应的原理，通过读取吸光度值作出标准曲线，计算葡萄糖含量；这样的方法在细胞培养过程中用少量细胞液样品即可快捷、准确、大量地完成葡萄糖含量检测，降低单位细胞液样品检测成本。为了实现上述目标，本专利技术采用如下的技术方案：一种葡萄糖检测反应液，其特征在于，包括：葡萄糖检测反应液由显色剂、GOD、HRP和缓冲剂混合而成；所述GOD为葡萄糖氧化酶，HRP为辣根过氧化物酶。前述的一种葡萄糖检测反应液，葡萄糖检测反应液的配置体系显色剂溶液：缓冲液：GOD溶液：HRP溶液的比值范围为：4-7:1-4：1:1；显色剂溶液由显色剂用缓冲液稀释得到；GOD溶液由GOD溶解于缓冲液中得到；HRP溶液由HRP溶解于缓冲液中得到。前述的一种葡萄糖检测反应液，葡萄糖检测反应液的配置体系显色剂溶液：缓冲液：GOD溶液：HRP溶液的比值范围为:5：2：1：1；显色剂溶液由显色剂用缓冲液稀释得到；GOD溶液由GOD溶解于缓冲液中得到；HRP溶液由HRP溶解于缓冲液中得到。一种细胞液葡萄糖含量检测方法，包括如下步骤：在稀释板中加缓冲剂，细胞液样品，标准品；根据需要检测细胞液样品的个数，配制葡萄糖检测反应液；葡萄糖检测反应液由显色剂、GOD、HRP和缓冲剂混合而成；GOD为葡萄糖氧化酶，HRP为辣根过氧化物酶；在检测板中的每个孔中加入葡萄糖检测反应液，再在含有葡萄糖检测反应液的孔中加入细胞液样品，标准品；将含有细胞液样品，标准品的反应液避光放置20-60分钟，在酶标仪上用405nm的吸光波长检测细胞液样品糖浓度，作出标准曲线，计算细胞液样品葡萄糖含量。一种细胞液葡萄糖含量检测方法，包括如下步骤：在稀释板中加190ul缓冲剂，加入10ul细胞液样品，标准品；根据需要检测细胞液样品的个数，配制葡萄糖检测反应液；葡萄糖检测反应液由显色剂、GOD、HRP和缓冲剂混合而成；GOD为葡萄糖氧化酶，HRP为辣根过氧化物酶；在检测板中的每个孔中加入90ul葡萄糖检测反应液，再在含有葡萄糖检测反应液的孔中加入10ul的细胞液样品，标准品；将含有细胞液样品，标准品的反应液避光放置20-60分钟，在酶标仪上用405nm的吸光波长检测细胞液样品糖浓度，作出标准曲线，计算细胞液样品葡萄糖含量。前述的一种细胞液葡萄糖含量检测方法，葡萄糖检测反应液的配置体系为：显色剂溶液：缓冲液：GOD溶液：HRP溶液的比值范围为：4-7:1-4:1:1；显色剂溶液由显色剂用缓冲液稀释得到，2-8摄氏度保存；GOD溶液由GOD溶解于缓冲液中得到，2-8摄氏度保存；HRP溶液由HRP溶解于缓冲液中得到，2-8摄氏度保存。前述的一种细胞液葡萄糖含量检测方法，缓冲液采用PBS缓冲液。前述的一种细胞液葡萄糖含量检测方法，显色剂为ABTS，ABTS为2'-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸。前述的一种细胞液葡萄糖含量检测方法，若检测板采用96孔检测板，则同时检测细胞液样品的最大值为89个。前述的一种细胞液葡萄糖含量检测方法，若检测板采用384孔检测板，则同时检测细胞液样品的最大值为377个。本专利技术的有益之处在于：本专利技术利用GOD、HRP能够催化ABTS的显色反应的原理，通过读取吸光度值作出标准曲线，计算葡萄糖含量；本方法需要细胞液细胞液样品量仅为10微升，在细胞培养过程中用少量细胞液样品即可快捷、准确、大量地完成葡萄糖含量检测，降低单位细胞液样品检测成本；用本专利技术无需进行离心等前处理工作，简化检测步骤；测定用酶标仪即可完成，操作简便；检测线性范围为0-12g/L，满足细胞培养检测需要；标曲拟合线性方程相关系数高，测定准确；最多可同时检测89个细胞液样品；原料简单易得，单位检测成本低廉。附图说明图1是本专利技术的检测方法的流程图；图2是本专利技术验证实验得到的检测结果绘制的标准曲线。具体实施方式以下结合附图和具体实施例对本专利技术作具体的介绍。一种葡萄糖检测反应液，包括：葡萄糖检测反应液由显色剂、GOD、HRP和缓冲剂混合而成；所述GOD为葡萄糖氧化酶，HRP为辣根过氧化物酶。作为一种实施例，显色剂包括：ABTS、邻连甲苯胺、4-氨基安替比林-酚，ABTS为2'-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸作为一种实施例，缓冲剂包括：PBS缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液(Tris)、三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液(Tris-HCl)、组氨酸-盐酸缓冲液(His-HCl)、醋酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、2-(N-吗啉代)乙磺酸缓冲液(MES)、3-(N-玛琳代)丙磺酸缓冲液(MOPS)。葡萄糖检测反应液的配置体系为：ABTS溶液：缓冲液：GOD溶液：HRP溶液的比值范围为：4-7:1-4:1:1；作为一种实施例，比值可以选择：4:3:1:1，5：2：1：1，6:1:1:1；作为一种优选，比值为：5：2：1：1。ABTS溶液由ABTS用缓冲液稀释得到；GOD溶液由GOD溶解于缓冲液中得到；HRP溶液由HRP溶解于缓冲液中得到。原理为：葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase,GOD)，系统名称为β-D-葡萄糖氧化还原酶，GOD与辣根过氧化物酶(HRP)在有氧条件下能专一性地催化β-D-葡萄糖生成葡萄糖酸和过氧化氢，2'-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)在过氧化氢的作用下转变为可溶性绿色阳离子根，可使用405nm光谱读取吸光度值。细胞液样品葡萄糖含量越高，还原后生成的过氧化氢越多，颜色反应越明显，通过设置不同浓度的葡萄糖标准品与细胞液样品同时在透明96孔检测板中进行反应，反应10分钟后利用酶标仪读取吸光度值，作出标准曲线后即可利用标曲算出细胞液样品中葡萄糖含量。一种细胞液葡萄糖含量检测方法，包括如下步骤：步骤一，在稀释板中加190ulPBS缓冲剂，加入10ul细胞液样本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种葡萄糖检测反应液，其特征在于，包括：葡萄糖检测反应液由显色剂、GOD、HRP和缓冲剂混合而成；所述GOD为葡萄糖氧化酶，HRP为辣根过氧化物酶。

【技术特征摘要】
1.一种葡萄糖检测反应液，其特征在于，包括：葡萄糖检测反应液由显色剂、GOD、HRP和缓冲剂混合而成；所述GOD为葡萄糖氧化酶，HRP为辣根过氧化物酶。2.根据权利要求1所述的一种葡萄糖检测反应液，其特征在于，所述葡萄糖检测反应液的配置体系显色剂溶液：缓冲液：GOD溶液：HRP溶液的比值范围为:4-7:1-4:1:1；所述显色剂溶液由显色剂用缓冲液稀释得到；所述GOD溶液由GOD溶解于缓冲液中得到；所述HRP溶液由HRP溶解于缓冲液中得到。3.根据权利要求2所述的一种葡萄糖检测反应液，其特征在于，所述葡萄糖检测反应液的配置体系显色剂溶液：缓冲液：GOD溶液：HRP溶液的比值范围为:5：2：1：1；所述显色剂溶液由显色剂用缓冲液稀释得到；所述GOD溶液由GOD溶解于缓冲液中得到；所述HRP溶液由HRP溶解于缓冲液中得到。4.一种细胞液葡萄糖含量检测方法，其特征在于，包括如下步骤：在稀释板中加缓冲剂，细胞液样品，标准品；根据需要检测细胞液样品的个数，配制葡萄糖检测反应液；所述葡萄糖检测反应液由显色剂、GOD、HRP和缓冲剂混合而成；所述GOD为葡萄糖氧化酶，HRP为辣根过氧化物酶；在检测板中的每个孔中加入葡萄糖检测反应液，再在含有葡萄糖检测反应液的孔中加入细胞液样品，标准品；将含有细胞液样品，标准品的反应液避光放置20-60分钟，在酶标仪上用405nm的吸光波长检测细胞液样品糖浓度，作出标准曲线，计算细胞液样品葡萄糖含量。5.一种细胞液葡萄糖含量检测方法，其特征在于，包括如下步骤：在稀释板中加190ul缓冲剂，...

【专利技术属性】
技术研发人员：李浩强，唐慧娴，王一茹，董宇童，
申请(专利权)人：杭州皓阳生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33