The present invention relates to a differential protein detection method for the interaction of 5 phenyl (p-methyl phenyl)1H triazole with serum, including the following steps: mixing serum samples with 5 phenyl (p-methyl phenyl)1H 1, 2, 3 triazole compounds; removing high abundance proteins; measuring protein concentration by Bradford method; conducting two-dimensional electrophoresis experiments; film image processing and mass spectrometry identification. The invention also provides a preparation method of 5 phenyl 1 (p-methylphenyl) 1H triazole.
【技术实现步骤摘要】
一种5-苯基-1-(对甲基苯基)-1H-三唑与血清作用的差异蛋白检测方法
本专利技术属于有机合成及生物化学领域,具体涉及一种5-苯基-1-(对甲基苯基)-1H-三唑与血清作用的差异蛋白检测方法。
技术介绍
1,2,3-三氮唑化合物以其独特的五元芳香含氮杂环结构,可与其他取代基相缀合或并合形成多种类型具有药物活性的衍生物,又表现出低毒性及良好的生物活性,已在材料化学、药物化学、有机化学和有机金属化学等许多领域有广泛的应用,并愈来愈受到研究者的青睐。而蛋白质组学是一门在蛋白质水平上认识生命机理的学科,其学术理念和相关技术方法已被广泛应用于生命科学的各个领域,涉及多种重要的生物学现象,并已成为人类重大疾病诊断、治疗和寻找药物靶点的有效方法之一。小分子药物的作用靶点通常是蛋白质,而蛋白质组学是一种应用化学小分子来检测整个目标蛋白质组的手段,从整体水平上,观察蛋白质组的变化,发现差异表达蛋白并研究它的的生物功能以及与小分子的作用机理,从而找到新的药物靶点或者发现具有药用价值的小分子。人体血液中的蛋白质几乎与机体中所有的细胞、组织、器官有关,血液蛋白的动态变化可以直接反应机体的健康情况,是研究各类疾病相关标志物最有价值的标本。本专利技术化合物5-苯基-1-(对甲基苯基)-1H-1,2,3-三唑通过在模拟人生理温度条件下,进行血清与化合物相互结合的体外培养,并采用蛋白质组学研究方法结合MALDI-TOF-MS技术开展在化合物存在时的血清蛋白质组学研究,分析差异表达蛋白,寻找特定疾病的特异血清蛋白标志物或者发现新的疾病相关蛋白质,为疾病的诊断或治疗提供新的依据,为5-苯基 ...
【技术保护点】
1.一种5‑苯基‑1‑(对甲基苯基)‑1H‑1,2,3‑三唑与血清作用检测差异蛋白的方法,其特征在于包括如下步骤:(1)将血清蛋白与5‑苯基‑1‑(对甲基苯基)‑1H‑1,2,3‑三唑化合物溶液混合均匀得样品a,恒温培养得样品b;(2)去除样品b中的高丰度蛋白得样品c;(3)用Bradford法对样品c的蛋白浓度进行定量;(4)进行双向电泳实验①按每胶条蛋白质上样量1.3mg,上样总体积为455uL的标准水化上样,进行第一向等电聚焦;②第一向等电聚焦完毕后,将胶条平衡后转到聚丙烯酰胺凝胶进行第二垂直电泳实验;③电泳结束后进行考马斯亮蓝染色,脱色,保存,扫描分析;(5)胶片图像处理及质谱鉴定①凝胶图像分析,筛选出表达异常的蛋白点并做上标记;②差异蛋白点的酶解及质谱鉴定;(6)结果利用ImageMaster5.0凝胶图像分析软件获得20个差异表达蛋白质点,再通过NCBInr的Blast的检索,确定了其中1‑16、18‑20号差异表达蛋白的信息见下表,
【技术特征摘要】
1.一种5-苯基-1-(对甲基苯基)-1H-1,2,3-三唑与血清作用检测差异蛋白的方法,其特征在于包括如下步骤:(1)将血清蛋白与5-苯基-1-(对甲基苯基)-1H-1,2,3-三唑化合物溶液混合均匀得样品a,恒温培养得样品b;(2)去除样品b中的高丰度蛋白得样品c;(3)用Bradford法对样品c的蛋白浓度进行定量;(4)进行双向电泳实验①按每胶条蛋白质上样量1.3mg,上样总体积为455uL的标准水化上样,进行第一向等电聚焦;②第一向等电聚焦完毕后,将胶条平衡后转到聚丙烯酰胺凝胶进行第二垂直电泳实验;③电泳结束后进行考马斯亮蓝染色,脱色,保存,扫描分析;(5)胶片图像处理及质谱鉴定①凝胶图像分析,筛选出表达异常的蛋白点并做上标记;②差异蛋白点的酶解及质谱鉴定;(6)结果利用ImageMaster5.0凝胶图像分析软件获得20个差异表达蛋白质点,再通过NCBInr的Blast的检索,确定了其中1-16、18-20号差异表达蛋白的信息见下表,2.权利要求1所述的方法,其特征在于所述步骤(1)中5-苯基-1-(对甲基苯基)-1H-1,2,3-三唑化合物溶液为5-苯基-1-(对甲基苯基)-1H-1,2,3-三唑化合物的甲醇溶液...
【专利技术属性】
技术研发人员:何文英,吴禄勇,陈光英,冯华杰,刘荣强,段红叶,
申请(专利权)人:海南师范大学,
类型:发明
国别省市:海南,46
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