巴氏染色试剂盒及其染色方法技术

本发明专利技术公开一种巴氏染色试剂盒及其染色方法。该试剂盒包括苏木素染液、返蓝液、伊红染液和清洗液。所述伊红染液是由以下浓度的物质配制而成：600‑900ml/L的乙醇、100‑400mL/L的甲醇、1‑4g/L的曙红Y、1‑4g/L的磷钨酸、0.01‑2g/L的固绿、1‑10mL/L的弱酸；所述清洗液是由溶剂油、无水乙醇和丙二醇甲醚醋酸酯按体积比10‑350:600‑950:10‑200混合而得。利用本发明专利技术的巴氏染色试剂盒染色快速，并且染色后颜色区别分明，有效地提高了诊断的效率。

Papanicolaou staining kit and its staining method

The invention discloses a Papanicolaou dyeing kit and a dyeing method thereof. The kit includes hematoxylin dye solution, blueback solution, eosin dye solution and cleaning solution. The eosin dyeing solution is made up of 600 900ml/L ethanol, 100 400mL/L methanol, 1 4g/L eosin Y, 1 4g/L phosphotungstic acid, 0.01 2g/L solid green, 1 10mL/L weak acid, and the cleaning solution is obtained by mixing solvent oil, anhydrous ethanol and propylene glycol methyl ether acetate at a volume ratio of 10:600 0:10. The Papanicolaou dyeing kit of the invention is fast in dyeing and has distinct color difference after dyeing, thus effectively improving the efficiency of diagnosis.

【技术实现步骤摘要】
巴氏染色试剂盒及其染色方法
本专利技术涉及体外诊断领域，具体涉及巴氏染色试剂盒及其染色方法。
技术介绍
巴氏染色法是脱落细胞染色中最好的染色方法，该染色法不但具有显示细胞核结构清晰，分色明显，透明度好，胞浆受色鲜艳等特点，而且所染标本不易脱色，可长久保存。目前，子宫颈炎、肺结核、胸膜炎、尿路感染等疾病成为我国临床上的常见疾病、多发病，这些疾病的发病率高，治愈时间长，如何诊断这些疾病成为一个研究的热点。液基薄层细胞学技术可辅助临床医生对上述疾病提早发现并制定正确的治疗方案，使患者尽快康复，减少痛苦，因而受到研究人员和临床医生的关注。液基薄层细胞学技术的重要步骤之一就是对细胞进行染色，而巴氏染色液是最常用的染色方法之一。利用巴氏染色液染色的标本细胞透明度好，结构清晰，制片色彩丰富而鲜艳。传统的巴氏染色手续繁杂，染色时间较长且难以掌握，并且需要单独透明更是增加了时长和操作步骤。因此，为了提高诊断的效率，亟需研发快速的巴氏染色。
技术实现思路
为解决上述现有技术问题，本专利技术提供了一种巴氏染色试剂盒及其染色方法。该巴氏染色试剂盒染色快速，并且染色后颜色区别分明，有效地提高了诊断的效率。一种巴氏染色试剂盒，该试剂盒包括苏木素染液、返蓝液、伊红染液和清洗液；其中，所述伊红染液是由以下浓度的物质配制而成：600-900ml/L的乙醇、100-400mL/L的甲醇、1-4g/L的曙红Y、1-4g/L的磷钨酸、0.01-2g/L的固绿、1-10mL/L的弱酸；所述清洗液是由溶剂油、无水乙醇和丙二醇甲醚醋酸酯按体积比10-350:600-950:10-200混合而得。在一个优选实施方式中，所述伊红染液是由以下浓度的物质配制而成：700-880mL/L的乙醇、120-300mL/L的甲醇、1.1-2g/L的曙红Y、1.5-3g/L的磷钨酸、0.05-1g/L的固绿、2-8mL/L的弱酸；所述清洗液是由溶剂油、无水乙醇和丙二醇甲醚醋酸酯按体积比50-250:650-900:50-150混合而得。在另一个优选实施方式中，伊红染液中，所述弱酸优选无水乙酸、无水碳酸、无水柠檬酸或无水磷酸中的任意一种，更优选地，所述弱酸为无水乙酸。在另一个优选实施方式中，所述苏木素染液是由以下浓度的物质配制而成：1-4g/L的苏木素、150-400mL/L的醇、10-40g/L的硫酸铝、0.1-4g/L的氧化剂、15-50mL/L的弱酸、余量为水；更优选地，所述苏木素染液是由以下浓度的物质配制而成：1.5-3g/L的苏木素、200-350mL/L的醇、12-25g/L的硫酸铝、0.12-2g/L的氧化剂、20-40mL/L的弱酸、余量为水。在另一个优选实施方式中，苏木素染液中，所述醇优选甲醇、乙醇、异丙醇和丙三醇中的一种或多种；所述氧化剂优选氧化汞或碘酸钠；所述弱酸优选乙酸、碳酸、柠檬酸或磷酸中的任意一种，更优选地，所述弱酸为乙酸。在另一个优选实施方式中，所述返蓝液为碱性溶液。所述碱性溶液包括饱和碳酸锂溶液、Scott促蓝液、氢氧化铵水溶液、Tris溶液。在另一个优选实施方式中，所述返蓝液是质量浓度为0.1-1g/L的Tris溶液；优选地，所述返蓝液是质量浓度为0.2-0.8g/L的Tris溶液。在另一个优选实施方式中，所述返蓝液中加入0.05-0.5g/L的柠檬酸；更优选地，所述返蓝液中加入0.08-0.2g/L的柠檬酸。一种巴氏染色试剂盒，该试剂盒包括苏木素染液、返蓝液、伊红染液和清洗液；所述苏木素染液是由以下浓度的物质配制而成：1-4g/L的苏木素、150-400mL/L的乙醇、10-40g/L的硫酸铝、0.1-4g/L的碘酸钠、15-50mL/L的乙酸、余量为水；所述返蓝液是由以下浓度的物质配制而成：0.1-1g/L的Tris、0.05-0.5g/L的柠檬酸、0.1-5mL/L的防腐剂、余量为水；所述伊红染液是由以下浓度的物质配制而成：600-900mL/L的乙醇、100-400mL/L的甲醇、1-4g/L的曙红Y、1-4g/L的磷钨酸、0.01-2g/L的固绿、1-10mL/L的无水乙酸；所述清洗液是由溶剂油、无水乙醇和丙二醇甲醚醋酸酯按体积比10-350:600-950:10-200混合而得。在一个优选实施方式中，巴氏染色试剂盒中，所述苏木素染液是由以下浓度的物质配制而成：1.5-3g/L的苏木素、200-350mL/L的乙醇、12-25g/L的硫酸铝、0.12-2g/L的碘酸钠、20-40mL/L的乙酸、余量为水；所述返蓝液是由以下浓度的物质配制而成：0.2-0.8g/L的Tris、0.08-0.2g/L的柠檬酸、0.2-3mL/L的防腐剂、余量为水；所述伊红染液是由以下浓度的物质配制而成：700-880mL/L的乙醇、120-300mL/L的甲醇、1.1-2g/L的曙红Y、1.5-3g/L的磷钨酸、0.05-1g/L的固绿、2-8mL/L的无水乙酸；所述清洗液是由溶剂油、无水乙醇和丙二醇甲醚醋酸酯按体积比50-250:650-900:50-150混合而得。更优选地，巴氏染色试剂盒中所述苏木素染液是由以下浓度的物质配制而成：2g/L的苏木素、300mL/L的乙醇、17g/L的硫酸铝、0.2g/L的碘酸钠、30mL/L的乙酸、余量为水；所述返蓝液是由以下浓度的物质配制而成：0.25g/L的Tris、0.09g/L的柠檬酸、0.5mL/L的防腐剂、余量为水；所述伊红染液是由以下浓度的物质配制而成：850mL/L的乙醇、150mL/L的甲醇、1.5g/L的曙红Y、2g/L的磷钨酸、0.1g/L的固绿、5mL/L的无水乙酸；所述清洗液是由溶剂油、无水乙醇和丙二醇甲醚醋酸酯按体积比50-250:650-900:50-150混合而得。一种用上述巴氏染色试剂盒染色的方法，该方法包括以下步骤：(1)固定向制成薄片的样品中加入固定剂固定60s后，吸净固定剂后干燥；(2)细胞核染色向步骤(1)干燥的样品中加入苏木素染液染色65-75s后；加入返蓝液蓝化25-35s；(3)细胞质染色向步骤(2)蓝化的样品中加入伊红染液染色65-75s后，吸净液体；(4)清洗并透明向步骤(3)伊红染色的样品中加入清洗液，清洗25-35s后封片。在一个实施方式中，所述固定剂优选为乙醇。在另一个优选实施方式中，所述苏木素染液染色是加入苏木素染液后，抽吸混匀并吸净液体，然后再加入苏木素染液静置60s后，吸净液体；所述伊红染液染色是加入伊红染液后，抽吸混匀并吸净液体，然后再加入伊红染液静置60s后，吸净液体。下面将详细地解释本专利技术。本专利技术中，苏木素染液是对细胞核染色，细胞核内的染色质主要是脱氧核糖核酸(DNA)，DNA的双螺旋结构中，两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木素碱性染料以离子或氢键结合而被染色。为了保证细胞核与细胞质染色分明，需用弱酸调节苏木素染色过程，但是由于酸能破坏苏木素的醌型结构，使色素与组织解离，因此合适量的弱酸既能苏木素染色成功又能保证细胞核与细胞质的染色分明。由于苏木素在酸性条件下处于红色离子状态，在碱性溶液中呈蓝色离子状态，所以经过苏木素染液染色后蓝化可以使细胞核呈蓝色。因此返蓝液为碱性溶液即可。本专利技术的返蓝液优选Tris溶液，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种巴氏染色试剂盒，该试剂盒包括苏木素染液、返蓝液、伊红染液和清洗液；其特征在于：所述伊红染液是由以下浓度的物质配制而成：600‑900mL/L的乙醇、100‑400mL/L的甲醇、1‑4g/L的曙红Y、1‑4g/L的磷钨酸、0.01‑2g/L的固绿、1‑10mL/L的弱酸；所述清洗液是由溶剂油、无水乙醇和丙二醇甲醚醋酸酯按体积比10‑350:600‑950:10‑200混合而得。

【技术特征摘要】
1.一种巴氏染色试剂盒，该试剂盒包括苏木素染液、返蓝液、伊红染液和清洗液；其特征在于：所述伊红染液是由以下浓度的物质配制而成：600-900mL/L的乙醇、100-400mL/L的甲醇、1-4g/L的曙红Y、1-4g/L的磷钨酸、0.01-2g/L的固绿、1-10mL/L的弱酸；所述清洗液是由溶剂油、无水乙醇和丙二醇甲醚醋酸酯按体积比10-350:600-950:10-200混合而得。2.根据权利要求1所述的巴氏染色试剂盒，其特征在于：所述伊红染液是由以下浓度的物质配制而成：700-880mL/L的乙醇、120-300mL/L的甲醇、1.1-2g/L的曙红Y、1.5-3g/L的磷钨酸、0.05-1g/L的固绿、2-8mL/L的弱酸；所述清洗液是由溶剂油、无水乙醇和丙二醇甲醚醋酸酯按体积比50-250:650-900:50-150混合而得。3.根据权利要求1所述的巴氏染色试剂盒，其特征在于：所述苏木素染液是由以下浓度的物质配制而成：1-4g/L的苏木素、150-400mL/L的醇、10-40g/L的硫酸铝、0.1-4g/L的氧化剂、15-50mL/L的弱酸、余量为水；优选地，所述苏木素染液是由以下浓度的物质配制而成：1.5-3g/L的苏木素、200-350mL/L的醇、12-25g/L的硫酸铝、0.12-2g/L的氧化剂、20-40mL/L的弱酸、余量为水。4.根据权利要求1所述的巴氏染色试剂盒，其特征在于：所述返蓝液为碱性溶液。5.根据权利要求4所述的巴氏染色试剂盒，其特征在于：所述返蓝液是质量浓度为0.1-1g/L的Tris溶液；优选地，所述返蓝液是质量浓度为0.2-0.8g/L的Tris溶液。6.根据权利要求5所述的巴氏染色试剂盒，其特征在于：所述返蓝液中加入0.05-0.5g/L的柠檬酸；优选地，所述返蓝液中加入0.08-0.2g/L的柠檬酸。7.一种巴氏染色试剂盒，该试剂盒包括苏木素染液、返蓝液、伊红染液和清洗液；其特征在于：所述苏木素染液是由以下浓度的物质配制而成：1-4g/L的苏木素、150-400mL/L的乙醇、10-40g/L的硫酸铝、0.1-4g/L的碘酸钠、15-50mL/L的乙酸、...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘静，赵光波，
申请(专利权)人：迈克生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51