The present invention discloses a method and kit for full-morphological immunofluorescence staining of human cells. Human cells are stained in full-morphology by direct immunofluorescence or indirect immunofluorescence using antibodies against nuclear antigen, nucleolar antigen and cytoplasmic antigen, and antibodies against related antigens in cell membrane and cytoplasm. The number, shape, size and distribution of nucleoli can be clearly and completely displayed, especially the nucleoli which can be calibrated. In addition, immunofluorescence staining can display the antigens of cells, so that human cells can be observed and analyzed in full morphology.
【技术实现步骤摘要】
人体细胞全形态免疫荧光染色方法及试剂盒
本专利技术总体涉及医学检测和分析领域,具体涉及人体细胞全形态免疫荧光染色方法及试剂盒。
技术介绍
人体细胞一般分为细胞膜、细胞浆(细胞质)和细胞核三部分,但在恶性细胞病理学检验时特别注重恶性细胞的细胞核和细胞核内的核仁之病理形态学变化。细胞核中的核仁是细胞核内的一个至关重要的细胞器,是细胞一切活动的枢纽。细胞核的变化尤其关键的是其核仁的变化是鉴定恶性细胞的病理形态学基础和核心证据。在电子显微镜下,细胞核中的核仁的结构分为:(1)纤维中心:纤维中心是核仁的最内层结构,占核仁总体积的5%。是核仁标志物的核仁纤维蛋白、核仁蛋白、核仁磷酸蛋白、RNA聚合酶I等的分布区域和所在地。纤维中心的数量、面积大小、形态等与细胞代谢活动、生长速度等密切相关,纤维中心实际上等同于细胞核的核仁中心,因而其数量、面积大小、形态及分布与细胞的恶性病理变化密切相关。(2)纤维组份:由4-10nm的纤维细丝构成,大约占核仁总体积的15%。它在核仁发生时首先形成与纤维中心紧密相连并环绕纤维中心。(3)颗粒组份:围绕着纤维组份,在致密型核仁中占75%左右。目前,检测恶性细胞或组织的方法或技术大致分为组织病理学检查、骨髓细胞学检查、脱落细胞检查和外周血循环肿瘤细胞(CTC)液相活检4种方法。组织病理学检查:主要用HE及组织化学染色检测和鉴定恶性细胞,可见整个细胞的基本结构如细胞膜、细胞桨和细胞核的细胞形态学结构,显现恶性细胞的核大、核畸形和核浆比失调的癌细胞之部分细胞病理学特征;其组织化学染色只能显示细胞膜和细胞中的某些抗原,用于病理学检查。它的主要技术 ...
【技术保护点】
1.一种人体细胞全形态直接免疫荧光染色方法,包括以下步骤:(1)提供和/或制备细胞特征性的荧光细胞学检测试剂,包括细胞固定液、细胞封闭液、洗涤液、稀释液、细胞膜与细胞核膜通透液、细胞核仁标志物的抗体荧光标记物、细胞核浆标志物的抗体荧光标记物、细胞膜和细胞浆抗原标志物的抗体荧光标记物、细胞核荧光染料;(2)配置抗体结合反应液:用稀释液分别稀释细胞核仁标志物的抗体荧光标记物、细胞核浆标志物的抗体荧光标记物、细胞膜和细胞浆抗原标志物的抗体荧光标记物,形成各抗体结合反应液;(3)制备人体细胞标本检测片;(4)用细胞固定液固定细胞,10‑50分钟;用洗涤液清洗1‑3次;(5)用细胞膜与细胞核膜通透液与细胞标本检测片温育5‑60分钟,弃净液体;(6)用细胞封闭液封闭10‑120分钟,弃净液体;(7)加入步骤(2)中的各抗体结合反应液,染色30‑90分钟、弃净液体,用洗涤液清洗1‑3次;(8)用细胞核荧光染料复染5‑30分钟;(9)用洗涤液轻微清洗细胞样本检测片2‑5次;(10)晾干待检。
【技术特征摘要】
1.一种人体细胞全形态直接免疫荧光染色方法,包括以下步骤:(1)提供和/或制备细胞特征性的荧光细胞学检测试剂,包括细胞固定液、细胞封闭液、洗涤液、稀释液、细胞膜与细胞核膜通透液、细胞核仁标志物的抗体荧光标记物、细胞核浆标志物的抗体荧光标记物、细胞膜和细胞浆抗原标志物的抗体荧光标记物、细胞核荧光染料;(2)配置抗体结合反应液:用稀释液分别稀释细胞核仁标志物的抗体荧光标记物、细胞核浆标志物的抗体荧光标记物、细胞膜和细胞浆抗原标志物的抗体荧光标记物,形成各抗体结合反应液;(3)制备人体细胞标本检测片;(4)用细胞固定液固定细胞,10-50分钟;用洗涤液清洗1-3次;(5)用细胞膜与细胞核膜通透液与细胞标本检测片温育5-60分钟,弃净液体;(6)用细胞封闭液封闭10-120分钟,弃净液体;(7)加入步骤(2)中的各抗体结合反应液,染色30-90分钟、弃净液体,用洗涤液清洗1-3次;(8)用细胞核荧光染料复染5-30分钟;(9)用洗涤液轻微清洗细胞样本检测片2-5次;(10)晾干待检。2.一种人体细胞全形态间接免疫荧光染色方法,包括以下步骤:(1)提供和/或制备细胞特征性的荧光细胞学检测试剂,包括细胞固定液、细胞封闭液、洗涤液、稀释液、细胞膜与细胞核膜通透液、非标记的细胞核仁标志物的抗体、标记的细胞核浆标志物的抗体、标记的细胞膜和细胞浆抗原标志物的抗体、荧光标记的第二抗体、细胞核荧光染料;(2)配制抗体结合反应液:用稀释液分别稀释非标记的细胞核仁标志物的抗体、标记的细胞核浆标志物的抗体、标记的细胞膜和细胞浆抗原标志物的抗体、荧光标记的第二抗体,形成各抗体结合反应液;(3)制备人体细胞标本检测片;(4)用细胞固定液固定细胞,10-50分钟;用洗涤液清洗1-3次;(5)用细胞膜与细胞核膜通透液与细胞标本检测片温育5-60分钟,弃净...
【专利技术属性】
技术研发人员:肖乐义,刘元柱,米明仁,杨勤英,李娟,
申请(专利权)人:青岛北大新世纪言鼎生物医学科技有限公司,
类型:发明
国别省市:山东,37
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。