一种宫颈癌及其癌前病变检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种宫颈癌及其癌前病变检测试剂盒及其应用。本发明专利技术提供了用于检测如下miRNAs的物质在制备用于诊断或辅助诊断宫颈癌和/或其癌前病变的产品中的应用：hsa‑miR‑20a、hsa‑miR‑625‑3p、hsa‑miR‑1274a、hsa‑miR‑26b、hsa‑miR‑484、hsa‑miR‑574‑3p、hsa‑miR‑191、hsa‑miR‑1274b和hsa‑miR‑146b。本发明专利技术miRNA组合用于筛查宫颈癌及其癌前病变，可对宫颈癌和/或其癌前病变风险进行早期预警，提高早诊比例。基于此制备的检测血浆miRNA的试剂盒仅需要病人血浆而不需要任何其它组织，通过定量PCR检测血浆miRNA水平提高检测灵敏度，丰富检测宫颈癌及其癌前病变手段，提高宫颈癌及其癌前病变早期发现比例。

【技术实现步骤摘要】
一种宫颈癌及其癌前病变检测试剂盒及其应用
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种宫颈癌及其癌前病变检测试剂盒及其应用。
技术介绍
宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，占全国女性恶性肿瘤的第二位，仅次于乳腺癌。据统计，世界每年约有50万左右的宫颈癌新发病例，占所有癌症新发病例的5％，其中的80％以上的病例发生在发展中国家。我国每年约有新发病例13万，占世界宫颈癌新发病例总数的28％。《2017中国肿瘤登记年报》数据显示，我国宫颈癌发病率为15.17/10万，死亡率为3.98/10万。宫颈癌已成为威胁我国女性生命和健康的重要疾病，是亟待解决的重大公共卫生问题。宫颈癌总体5年生存率约为55％，但不同宫颈癌分期生存率在相差很大。例如，I期宫颈癌生存率是85％，II期迅速下降到60％，而III期患者的比例仅为30％，IV期则仅有10％。因此早期诊断对病人及时接受治疗至关重要。但宫颈癌早期多无明显症状，大多数宫颈癌确诊时，往往已处于中晚期，疗效及预后较差。此外，宫颈癌的发生和发展有一个渐进的演变过程，时间可以从数年到数十年，一般认为这个演变过程经过这样几个阶段：轻度、中度和重度上皮内瘤样病变(cervicalintraepithelialneoplasia，CIN)、早期浸润癌、浸润癌。CIN可分为3期，即轻度上皮内瘤样病变(CINI)，中度上皮内瘤样病变(CINII)，和重度上皮内瘤样病变(CINIII)，原位癌归类于CINIII期。CINI可逆转为正常，而CINII和CINIII进展为癌的可能性却很大，虽然进展为宫颈癌的时间长短不同，但一般是不可逆的过程。2006年ASCCP循证医学共识指南认为CINII，CINIII为宫颈癌前病变，应治疗。如果能在癌前病变阶段做出早期诊断，进行早期治疗，就有可能预防宫颈癌的发生，提高宫颈癌的治愈率和生存率。因此，需要有效准确的宫颈癌诊断方法。目前，宫颈癌的常规诊断方式主要有宫颈细胞学检查、阴道镜检查和宫颈病理学检查等。虽然这些方法在诊断早期和中晚期宫颈癌患者上有一定的价值，但是其灵敏度和特异性都不高，且创伤性较大，而且对早期患者的诊断能力有限。因此，我们亟需发现更加明确而有效的标志物，对宫颈癌或其癌前病变做出早期诊断，有助于早期治疗，提高治愈率和生存率。MicroRNA(简写为miRNA)是一类在转录后水平调节基因表达的长度约为22个核苷酸的真核生物内源性小分子单链RNA。已有报道证明miRNA的异常表达与肿瘤的发生、发展密切相关，miRNA起到类似癌基因或抑癌基因一样的功能。许多研究表明，游离miRNA的表达异常与多种肿瘤、炎症、感染性疾病有关，显示了其可作为潜在的疾病包括肿瘤的诊断标志物。研究证实循环miRNA在肿瘤发生早期即发生明显的异常表达，可用于肿瘤早期诊断，循环miRNA作为肿瘤诊断标志物，具有非侵入、可动态监测的优点，是对早期肿瘤患病诊断技术的良好补充。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种宫颈癌及其癌前病变检测试剂盒及其应用。第一方面，本专利技术要求保护一种用于检测如下各miRNA的物质在制备用于诊断或辅助诊断宫颈癌和/或其癌前病变的产品中的应用：hsa-miR-20a、hsa-miR-625-3p、hsa-miR-1274a、hsa-miR-26b、hsa-miR-484、hsa-miR-574-3p、hsa-miR-191、hsa-miR-1274b和hsa-miR-146b；所述检测具体为定量或相对定量检测。所述用于诊断或辅助诊断宫颈癌和/或其癌前病变的产品可为宫颈癌或其癌前病变检测试剂盒。进一步地，所述“用于检测如下各miRNA的物质”可为如下(a1)或(a2)：(a1)引物对组甲，由如下组成：用于检测hsa-miR-20a的引物对1；用于检测hsa-miR-625-3p的引物对2；用于检测hsa-miR-1274a的引物对3；用于检测hsa-miR-26b的引物对4；用于检测hsa-miR-484的引物对5；用于检测hsa-miR-574-3p的引物对6；用于检测hsa-miR-191的引物对7；用于检测hsa-miR-1274b的引物对8和用于检测hsa-miR-146b的引物对9。所述引物对1由SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示的两条单链DNA组成；所述引物对2由SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示的两条单链DNA组成；所述引物对3由SEQIDNo.5和SEQIDNo.6所示的两条单链DNA组成；所述引物对4由SEQIDNo.7和SEQIDNo.8所示的两条单链DNA组成；所述引物对5由SEQIDNo.9和SEQIDNo.10所示的两条单链DNA组成；所述引物对6由SEQIDNo.11和SEQIDNo.12所示的两条单链DNA组成；所述引物对7由SEQIDNo.13和SEQIDNo.14所示的两条单链DNA组成；所述引物对8由SEQIDNo.15和SEQIDNo.16所示的两条单链DNA组成；所述引物对9由SEQIDNo.17和SEQIDNo.18所示的两条单链DNA组成。(a2)成套单链DNA甲，由如下组成：用于检测hsa-miR-20a的所述引物对1和单链探针1；用于检测hsa-miR-625-3p的所述引物对2和单链探针2；用于检测hsa-miR-1274a的所述引物对3和单链探针3；用于检测hsa-miR-26b的所述引物对4和单链探针4；用于检测hsa-miR-484的所述引物对5和单链探针5；用于检测hsa-miR-574-3p的所述引物对6和单链探针6；用于检测hsa-miR-191的所述引物对7和单链探针7；用于检测hsa-miR-1274b的所述引物对8和单链探针8；以及用于检测hsa-miR-146b的所述引物对9和单链探针9。所述单链探针1的核苷酸序列如SEQIDNo.19所示；所述单链探针2的核苷酸序列如SEQIDNo.20所示；所述单链探针3的核苷酸序列如SEQIDNo.21所示；所述单链探针4的核苷酸序列如SEQIDNo.22所示；所述单链探针5的核苷酸序列如SEQIDNo.23所示；所述单链探针6的核苷酸序列如SEQIDNo.24所示；所述单链探针7的核苷酸序列如SEQIDNo.25所示；所述单链探针8的核苷酸序列如SEQIDNo.26所示；所述单链探针9的核苷酸序列如SEQIDNo.27所示。第二方面，本专利技术要求保护如下任一产品：(A1)前文所述的引物对组甲或所述的成套单链DNA甲(A2)一种宫颈癌和/或其癌前病变检测试剂盒，含有所述引物对组甲或所述成套单链DNA甲。进一步地，所述试剂盒中还可含有引物对组乙或成套单链DNA乙。所述引物对组乙，由如下组成：用于检测ath-miR159a的引物对10；用于检测hsa-miR-1228的引物对11；用于检测hsa-miR-16的引物对12。所述引物对10由SEQIDNo.28和SEQIDNo.29所示的两条单链DNA组成；所述引物对11由SEQIDNo.31和SEQIDNo.32示的两条单链DNA组成；所述引物对12由SEQIDNo.34和SEQIDNo.35所示的两条单链DNA组成。所述成套单链DNA乙，由如下组成：用于检测ath-miR159a的所述本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于检测如下各miRNA的物质在制备用于诊断或辅助诊断宫颈癌和/或其癌前病变的产品中的应用：hsa‑miR‑20a、hsa‑miR‑625‑3p、hsa‑miR‑1274a、hsa‑miR‑26b、hsa‑miR‑484、hsa‑miR‑574‑3p、hsa‑miR‑191、hsa‑miR‑1274b和hsa‑miR‑146b。

【技术特征摘要】
1.用于检测如下各miRNA的物质在制备用于诊断或辅助诊断宫颈癌和/或其癌前病变的产品中的应用：hsa-miR-20a、hsa-miR-625-3p、hsa-miR-1274a、hsa-miR-26b、hsa-miR-484、hsa-miR-574-3p、hsa-miR-191、hsa-miR-1274b和hsa-miR-146b。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述“用于检测如下各miRNA的物质”为如下(a1)或(a2)：(a1)引物对组甲，由如下组成：用于检测hsa-miR-20a的引物对1；用于检测hsa-miR-625-3p的引物对2；用于检测hsa-miR-1274a的引物对3；用于检测hsa-miR-26b的引物对4；用于检测hsa-miR-484的引物对5；用于检测hsa-miR-574-3p的引物对6；用于检测hsa-miR-191的引物对7；用于检测hsa-miR-1274b的引物对8和用于检测hsa-miR-146b的引物对9；所述引物对1由SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示的两条单链DNA组成；所述引物对2由SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示的两条单链DNA组成；所述引物对3由SEQIDNo.5和SEQIDNo.6所示的两条单链DNA组成；所述引物对4由SEQIDNo.7和SEQIDNo.8所示的两条单链DNA组成；所述引物对5由SEQIDNo.9和SEQIDNo.10所示的两条单链DNA组成；所述引物对6由SEQIDNo.11和SEQIDNo.12所示的两条单链DNA组成；所述引物对7由SEQIDNo.13和SEQIDNo.14所示的两条单链DNA组成；所述引物对8由SEQIDNo.15和SEQIDNo.16所示的两条单链DNA组成；所述引物对9由SEQIDNo.17和SEQIDNo.18所示的两条单链DNA组成；(a2)成套单链DNA甲，由如下组成：用于检测hsa-miR-20a的所述引物对1和单链探针1；用于检测hsa-miR-625-3p的所述引物对2和单链探针2；用于检测hsa-miR-1274a的所述引物对3和单链探针3；用于检测hsa-miR-26b的所述引物对4和单链探针4；用于检测hsa-miR-484的所述引物对5和单链探针5；用于检测hsa-miR-574-3p的所述引物对6和单链探针6；用于检测hsa-miR-191的所述引物对7和单链探针7；用于检测hsa-miR-1274b的所述引物对8和单链探针8；以及用于检测hsa-miR-146b的所述引物对9和单链探针9；所述单链探针1的核苷酸序列如SEQIDNo.19所示；所述单链探针2的核苷酸序列如SEQIDNo.20所示；所述单链探针3的核苷酸序列如SEQIDNo.21所示；所述单链探针4的核苷酸序列如SEQIDNo.22所示；所述单链探针5的核苷酸序列如SEQIDNo.23所示；所述单链探针6的核苷酸序列如SEQIDNo.24所示；所述单链探针7的核苷酸序列如SEQIDNo.25所示；所述单链探针8的核苷酸序列如SEQIDNo.26所示；所述单链探针9的核苷酸序列如SEQIDNo.27所示。3.如下任一产品：(A1)权利要求2中所述的引物对组甲或成套单链DNA甲；(A2)一种宫颈癌和/或其癌前病变检测试剂盒，含有权利要求2所述的引物对组甲或成套单链DNA甲。4.根据权利要求3所述的产品，其特征在于：所述试剂盒中还含有引物对组乙或成套单链DNA乙；所述引物对组乙，由如下组成：用于检测ath-miR159a的引物对10；用于检测hsa-miR-1228的引物对11；用于检测hsa-miR-16的引物对12；所述引物对10由SEQIDNo.28和SEQIDNo.29所示的两条单链DNA组成；所述引物对11由SEQIDNo.31和SEQIDNo.32示的两条单链DNA组成；所述引物对12由SEQIDNo...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨春花，郭弘妍，张智，刘莹莹，邢婉丽，程京，
申请(专利权)人：博奥生物集团有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11