用于诊断结直肠息肉的血浆miRNA分子标志物、试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于诊断结直肠息肉的血浆miRNA分子标志物，所述miRNA为miR‑451a、miR‑223‑3p、miR‑21‑5p和miR‑16‑5p中的一种或多种。本发明专利技术首次发现SEQ ID NO.1～4所示的miRNA分子标志物能够用于诊断结直肠息肉，获得的诊断模型具有较高的诊断效率，尤其是合并4条miRNA的诊断模型，其AUC(95％CI)为0.838(0.806,0.870)。使用本发明专利技术提供的miRNA分子标志物诊断结直肠息肉，不仅操作简单、安全无创伤，而且具有高灵敏度、高特异性以及易于大量筛查的特点。

【技术实现步骤摘要】
用于诊断结直肠息肉的血浆miRNA分子标志物、试剂盒及其应用
本专利技术涉及临床检验诊断
，尤其涉及一种用于诊断结直肠息肉的血浆miRNA分子标志物、试剂盒及其应用。
技术介绍
结直肠息肉指结直肠粘膜面突向肠腔的隆起，可分为腺瘤性息肉和非腺瘤性息肉，是一种非常常见的疾病。患者常无任何临床症状，多数在进行其他检查时偶然发现，部分患者可表现为便血、腹泻、腹痛、粘液便或脓血便。许多研究表明，结直肠息肉是结直肠癌的癌前病变，摘除息肉能有效降低结直肠癌的发病率。因此，结直肠息肉的早发现、早诊断、早治疗具有重要的意义。目前，用于结直肠息肉的诊断方法主要有粪便隐血试验、直肠指诊、气钡双重造影和结肠镜检查。粪便隐血试验简单经济，但该法假阴性率高，可作为人群筛查的基本手段。气钡双重造影是诊断低位胃肠疾病的主要方法，阳性率较低，且直径小于1.0cm的息肉不容易被发现。结肠镜检查是发现结直肠息肉最重要的方法，但这是一种侵入性的检查方法，患者需承受一定的痛苦，可能出现一定的并发症，且价格昂贵，无法大规模推广。随着分子生物学的发展，结直肠息肉分子标志物的研究越来越深入。miRNA是一类内生的、长度约为20-24个核苷酸的小分子RNA，广泛存在于真核细胞，不具备编码功能，通过翻译抑制调控基因的表达，具有高度保守性、时序性和组织特异性。miRNA参与细胞分化、生物发育以及疾病的发生发展过程，在很多疾病的诊断和治疗中发挥了重大作用。结直肠息肉miRNA标志物的研究能辅助诊断结直肠息肉，且此方法更加简单经济、安全无创。目前，关于结直肠癌相关的miRNA标志物的研究已有大量报道，例如：申请公告号为CN106367477A和CN107746886A的专利技术专利申请文献公开了一种与结直肠癌辅助诊断相关的血清miRNA标志物及其应用，标志物为miR-19a-3p、miR-21和miR-425-5p中的一种或多种；以及miR-103a-3p、miR-127-3p、miR-151a-5p、miR-17-5p、miR-181a-5p、miR-18a-5p和miR-18b-5p中的一种或多种。申请公告号为CN105624271A的专利技术专利申请文献公开了一种与结直肠癌相关的miRNA及其应用，该标志物为miR-1290。申请公告号为CN108088999A的专利技术专利申请文献公开了一种与结直肠癌相关的miRNA标志物及其应用，所述标志物为miR-16、miR-21和miR-92a的组合。申请公告号为CN108004323A的专利技术专利申请文献公开了组织中与结直肠癌转移相关的miRNA标志物及其应用，标志物为miR-96、miR-99b、miR-155、let-7a和let-7b中的任意一种或几种。然而，以上研究均是针对于诊断结直肠癌的分子标志物的研究，对于结直肠息肉的诊断标志物却少有研究；而且，结直肠息肉为结直肠癌的癌前病变，诊断难度大于结直肠癌，结直肠癌适用的miRNA标志物不一定适用于结直肠息肉。结直肠癌的发生发展是一个多阶段的漫长过程，研究发现，近95％的结直肠癌是由息肉演变而来，经历正常黏膜→增生→腺瘤形成→腺瘤癌变的过程，一般需要5～10年的时间。这就为结直肠癌的预防提供了极有利的机会，如果能够在息肉腺瘤阶段就斩草除根，就能有效防止结直肠癌的发生。因此，有必要专门针对结直肠息肉的诊断标志物进行研究，以实现结直肠息肉的早发现、早诊断和早治疗，提前摘除息肉，有效降低结直肠癌的发病率。
技术实现思路
基于上述目的，本专利技术提供了一种用于诊断结直肠息肉的血浆miRNA分子标志物、试剂盒及其应用，能够辅助诊断结直肠息肉实现结直肠息肉的早发现和早诊断。具体技术方案如下：本专利技术提供了一种用于诊断结直肠息肉的血浆miRNA分子标志物，所述miRNA为miR-451a、miR-223-3p、miR-21-5p和miR-16-5p中的一种或多种。所述miR-451a的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；所述miR-223-3p的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；所述miR-21-5p的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示；所述miR-16-5p的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示。与健康对照相比，上述miRNA在结直肠息肉病人的血浆中存在差异表达，能够用于诊断结直肠息肉，获得的诊断模型具有较高的诊断效率，尤其是合并4条miRNA的诊断模型，其AUC(95％CI)为0.838(0.806,0.870)。本专利技术提供了血浆miRNA作为分子标志物在诊断结直肠息肉中的应用，所述miRNA为miR-451a、miR-223-3p、miR-21-5p和miR-16-5p中的一种或多种。更优选，所述miRNA为miR-451a、miR-223-3p、miR-21-5p和miR-16-5p的组合。本专利技术还提供了血浆miRNA作为分子标志物在制备诊断结直肠息肉的试剂盒中的应用，所述miRNA为miR-451a、miR-223-3p、miR-21-5p和miR-16-5p中的一种或多种。更优选，所述miRNA为miR-451a、miR-223-3p、miR-21-5p和miR-16-5p的组合。本专利技术还提供了一种基于血浆miRNA分子标志物诊断结直肠息肉的试剂盒，所述miRNA为miR-451a、miR-223-3p、miR-21-5p和miR-16-5p中的一种或多种。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：(1)本专利技术首次发现SEQIDNO.1～4所示的miRNA分子标志物能够用于诊断结直肠息肉，获得的诊断模型具有较高的诊断效率，尤其是合并4条miRNA的诊断模型，其AUC(95％CI)为0.838(0.806,0.870)。(2)使用本专利技术提供的miRNA分子标志物诊断结直肠息肉，不仅操作简单、安全无创伤，而且具有高灵敏度、高特异性以及易于大量筛查的特点。附图说明图1为实施例1中四种miRNAs在结直肠息肉组和健康对照组、结直肠癌组中的表达水平。图2为实施例1中四种miRNAs对结直肠息肉的诊断ROC曲线。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步描述，以下列举的仅是本专利技术的具体实施例，但本专利技术的保护范围不仅限于此。实施例11、研究对象血浆样本共包括300例结直肠息肉病例、300例结直肠癌病例和300例健康对照。所有结直肠息肉病例和健康对照均来自嘉善结直肠癌筛查队列，结直肠癌病例来自于浙江大学绍兴医院的肛肠科住院病例。病例组经病理学检查证实为结直肠息肉和结直肠癌，未曾接受任何药物或手术治疗，现病史、个人史、家族史、体格检查等资料详尽。2、标本采集每位研究对象抽取静脉血5ml装入抗凝真空采血管中，在1小时室温条件下进行下面的操作：将离心机转速调至3000转，4℃，离心10分钟。吸取上清至RNase-free的收集管中以备RNA提取实验。旋紧收集管管盖，在管壁上做好标记，至于-80℃冰箱保存备用。3、miRNA的定量检测3.1miRNA的提取采用天根生化科技有限公司miRcultSerum/plasmaisolationkit(型号：DP503)，用于提取血浆样品中的RNA，具体步骤如下：(1)在1.5mlEppendorf管中，加入200μl血浆和900μl裂解液MZA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于诊断结直肠息肉的血浆miRNA分子标志物，其特征在于，所述miRNA为miR‑451a、miR‑223‑3p、miR‑21‑5p和miR‑16‑5p中的一种或多种。

【技术特征摘要】
1.一种用于诊断结直肠息肉的血浆miRNA分子标志物，其特征在于，所述miRNA为miR-451a、miR-223-3p、miR-21-5p和miR-16-5p中的一种或多种。2.血浆miRNA作为分子标志物在诊断结直肠息肉中的应用，其特征在于，所述miRNA为miR-451a、miR-223-3p、miR-21-5p和miR-16-5p中的一种或多种。3.如权利要求2所述的血浆miRNA作为分子标志物在诊断结直肠息肉中的应用，其特征在于，所述miRNA为miR-451a、miR-223-3p、miR-21-5p和miR-16-5p的组合。4.血浆miR...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈坤，金明娟，叶丁，蒋丹捷，王建炳，唐梦龄，李其龙，顾思萌，林淑娟，章晓聪，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33