一种磁珠法提取DNA的试剂盒及提取方法技术

本发明专利技术专利公布了一种磁珠法提取DNA的试剂盒及提取方法，试剂盒包括消化裂解体系、结合体系、漂洗体系、洗脱体系四大体系。试剂盒提取方法包括：样品匀浆、细胞裂解、离心、DNA与磁珠结合、洗涤、DNA洗脱。本发明专利技术益处在于：(1)避免了复杂的液体处理过程，将整体的操作时间缩短了20min以上，使提取过程更为快捷；(2)磁珠转移过程中无液体残留，洗脱效率和PCR反应的成功率更高；(3)操作过程中，磁棒套可以多次使用，提高了耗材的效率，成本降低30％以上。

【技术实现步骤摘要】
一种磁珠法提取DNA的试剂盒及提取方法
本专利技术涉及一种提取DNA领域，尤其涉及一种磁珠法提取DNA的试剂盒及提取方法。
技术介绍
自从1980年第一台临床研究自动化样本处理装置被投入使用以来，越来越多的实验室自动化系统为解决实验室面临的挑战提供了机遇。由于具备快速、准确和重复可靠性强的工作能力，自动化系统的使用能够大大提高实验室工作效率，带来强大的高通量样本处理能力。市场的需求推动实验室自动化系统的快速发展，同时带动了核酸提取技术和市场的不断更新换代，在大趋势下全自动核酸提取系统将逐步代替人工操作。目前，多家国外知名厂商的核酸提取系统占据市场主导地位，垄断国内大部分市场，同时国产设备也在奋起直追，产品和技术都愈发成熟。整个国内市场，全自动微量DNA提取系统主要被QIAGEN、Hamilton以及Tecan等国外品牌所占据，其平台成本高，提取速率慢，在实际使用过程中现有的全自动提取平台往往无法应对突发紧急案件，从而成为实验室的鸡肋。DNA技术在法医物证领域起到越来越重要作用的同时，DNA提取系统也已经成为当今法医实验室必不可少的实验设施。当前实验室核酸提取系统多采用手工法或者半自动式，繁琐复杂，不但延迟了侦破案件的时间，也影响了案件的侦破效率，越来越成为制约案件侦破的瓶颈，导致一线工作人员对全自动处理系统的需求越来越急切。而成本低、效率高的全自动微量DNA提取工作平台成了大势所趋。本专利技术提供的DNA提取方法包括检材消化裂解、离心、结合、漂洗、洗脱等程序，实现全过程的自动化、一键式操作，可以实现低成本、高效、快速的DNA提取过程，为犯罪嫌疑人的排查和案件的侦破提供最有效的帮助。
技术实现思路
针对传统方案的不足和缺点，本专利技术提供一种磁珠法提取DNA的试剂盒及提取方法，能够克服传统方法的缺陷，从而达到高效率、低成本的目的。一种磁珠法提取DNA的试剂盒，包括消化裂解体系、结合体系、漂洗体系、洗脱体系四大体系。所述消化裂解体系包括消化缓冲液、蛋白酶、二硫苏糖醇。所述结合体系包括磁珠和结合液，所述磁珠为特定粒径和表面修饰的超顺磁性纳米颗粒，所述结合液为磁珠吸附DNA提供高盐低pH环境，使得DNA与磁珠表面羟基有效结合。所述漂洗体系为乙醇溶液。所述洗脱体系包括洗脱液。试剂盒提取DNA的方法：首先进行消化裂解，使得DNA从细胞中游离出来，再离心去除载体和其他固体杂质，磁珠在结合液环境中吸附DNA，磁铁吸附磁珠并弃去溶液，漂洗液洗去磁珠表面的可溶性杂质，洗脱液洗下磁珠吸附的DNA采用磁棒法的磁分离方式，通过特制的磁棒进行转移磁珠的同时转移样品，磁珠定向聚集在磁棒表面套有的专门磁套上，通过磁棒套的运动来实现磁珠从样本结合液到漂洗液，再到洗脱液的转移，从而完成核酸的自动化提取过程。所述试剂盒提取DNA方法的性能指标：DNA回收率≥70％；采用独立离心机，最大离心力1000g；磁珠回收率≥95％；单次最大样本处理量：48个样本；单次运行时间≤2h；单个样本最大处理体积：1300μl；最小洗脱体积：25μl；移液精度CV值≤5％；可存储操作程序≥500条。本专利技术的有益效果：(1)避免了复杂的液体处理过程，将整体的操作时间缩短了20min以上，使提取过程更为快捷；(2)磁珠转移过程中无液体残留，洗脱效率和PCR反应的成功率更高；(3)操作过程中，磁棒套可以多次使用，提高了耗材的效率，成本降低30％以上。附图说明图1为本专利技术的实施例操作流程图。具体制备方式下面结合附图与具体实例对本专利技术进行详细说明。如图1所示，一种磁珠法提取DNA的试剂盒提取方法如下：(1)样品匀浆：对消化缓冲液中化学试剂的种类及配比，并充分震荡摇匀，保证体系均匀，混合均匀后在室温25摄氏度下静置10分钟。(2)细胞裂解：将体系置于在50摄氏度的水浴中裂解20至30分钟，并对体系持续震荡，消化缓冲液、蛋白酶、二硫苏糖醇为消化裂解过程提供缓冲条件，在消化裂解过程中DNA与蛋白质分离，从细胞核中释放出来。(3)离心：采用独立离心机，最大离心力为1000g，离心时间2至5分钟，通过离心作用使得固液分离，去除载体和杂质。(4)DNA与磁珠结合：磁珠为特定粒径和表面修饰的超顺磁性纳米颗粒，结合液为磁珠吸附DNA提供高盐低pH环境，使得DNA与磁珠表面羟基有效结合，磁珠在结合液环境中吸附DNA，磁珠回收率稳定在95％以上。(5)洗涤：清洗磁珠表面的可溶性杂质，主要洗涤包括盐离子、蛋白质以及抑制性杂质，漂洗液的成分是乙醇溶液，洗涤次数为2次。(6)DNA洗脱：加入25μl的洗脱液，混合均匀，在低盐条件下洗脱磁珠表面结合的DNA，分离后可以收集纯化的DNA，在零下20至零下80摄氏度的条件下保存，DNA回收效率稳定在70％以上。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种磁珠法提取DNA的试剂盒，包括消化裂解体系、结合体系、漂洗体系、洗脱体系四大体系。

【技术特征摘要】
1.一种磁珠法提取DNA的试剂盒，包括消化裂解体系、结合体系、漂洗体系、洗脱体系四大体系。2.如权利要求1所述一种磁珠法提取DNA的试剂盒，其特征在于，所述消化裂解体系包括消化缓冲液、蛋白酶、二硫苏糖醇。3.如权利要求1所述一种磁珠法提取DNA的试剂盒，其特征在于，所述结合体系包括磁珠和结合液，所述磁珠为特定粒径和表面修饰的超顺磁性纳米颗粒，所述结合液为磁珠吸附DNA提供高盐低pH环境，使得DNA与磁珠表面羟基有效结合。4.如权利要求1所述一种磁珠法提取DNA的试剂盒，其特征在于，所述漂洗体系为乙醇溶液。5.如权利要求1所述一种磁珠法提取DNA的试剂盒，其特征在于，所述洗脱体系包括洗脱液。6.一种磁珠法提取DNA的试剂盒提取方法，其特征在于，(1)样品匀浆：对消化缓冲液中化学试剂的种类及配比，并充分震荡摇匀，保证体系均匀，混合均匀后在室温25摄氏度下静置10分钟；(2)细胞裂解：将体系置...

【专利技术属性】
技术研发人员：柏锦程，张振，
申请(专利权)人：江苏齐耀生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32