一种特异性产生新琼四糖的β-琼胶酶及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种特异性产生新琼四糖的β‑琼胶酶及其应用。所述β‑琼胶酶为一种新型β‑琼胶酶AgaB6，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术提供的β‑琼胶酶为一种人工设计的新型β‑琼胶酶，β‑琼胶酶AgaB6的N端为催化区（T1‑D306），C端设计了一段由150个氨基酸组成的铰链区（G307‑Y456），该区域可改变酶对底物的识别能力，可显著增强其降解产物的均一性。其氨基酸序列与已有的β‑琼胶酶序列相似度仅为54%。本发明专利技术所述的β‑琼胶酶AgaB6产物均一，降解产物中新琼四糖的比例高达92.3%。另外，本发明专利技术所述的β‑琼胶酶AgaB6性质稳定，产量大，具有一定的工业化应用潜质。

【技术实现步骤摘要】
一种特异性产生新琼四糖的β-琼胶酶及其应用
本专利技术涉及一种特异性产生新琼四糖的β-琼胶酶及其应用，属于生物

技术介绍
琼胶是石花菜等红藻的细胞壁组成成分，是海洋中含量最多的海藻多糖之一。琼胶的结构复杂，由1,3连接的β-D-半乳吡喃糖和1,4连接的3,6-内醚-α-L-半乳吡喃糖残基反复交替连接组成骨架，并包含硫酸基、甲基等取代基。琼胶酶是指能够降解琼胶，产生琼胶寡糖的一类糖苷水解酶，主要来源于海洋细菌，少部分来源于陆生环境中的细菌和海洋软体动物。根据琼胶酶降解琼脂糖时的糖苷键和产物不同，琼胶酶可以分成两大类：α-琼胶酶和β-琼胶酶。α-琼胶酶作用于琼脂糖的α-1,3糖苷键，生成琼寡糖；β-琼胶酶作用于β-1,4糖苷键，降解产物为新琼寡糖（2-6糖）。β-琼胶酶降解所产生的新琼四糖具有多种生理活性，如抑菌，抗肿瘤，免疫增强效应等。新琼四糖对肠道菌群的生长还具有显著的益生元效应。寡糖自身的理化性质接近，分离纯化得到单一组分需要进行凝胶过滤层析，产率低、成本高，是阻碍其高值化应用的重要瓶颈。因此，发现一种β-琼胶酶可特异性降解琼胶，产生的降解产物中寡糖成分单一具有重要的应用意义。但是，目前报道的β-琼胶酶酶解产物成分复杂，通常包含有新琼二糖、四糖和六糖。目前尚未见报道有均一性产生新琼四糖的β-琼胶酶。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术的不足，提供了一种具有降解产物均一特性的β-琼胶酶及其应用。本专利技术提供的β-琼胶酶为一种人工设计的新型β-琼胶酶，β-琼胶酶AgaB6的N端为催化区（T1-D306），C端设计了一段由150个氨基酸组成的铰链区（G307-Y456），该区域可改变酶对底物的识别能力，可显著增强其降解产物的均一性。其氨基酸序列与已有的β-琼胶酶序列相似度仅为54%。本专利技术所述的β-琼胶酶AgaB6产物均一，降解产物中新琼四糖的比例高达92.3%。一方面，本专利技术提供一种具有产物均一特性的β-琼胶酶AgaB6，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。SEQIDNO.1：TEYTLRVDAKKTINNSTVDGKAGFSAYKSYPTRSIAQLPGFRPGTVPAPRLSKYGGDLTRSWQATGFIRVQQDKGFAAAFPSAQDGTRKFLQANGFNGTGAWSATKDIQAENARADKPLAYTINLDFMSKYGDKRGGTYVQPGHKGYPNDVIFAFEPEWPAFCEEQAKLAEPFAKDANVLGHFSDNEIPFLPKLLPQVLALRDPAQPAYVAALDWLKTQKTDTAHTDQHRQDFLAFVAERYFSIVAKAMKKYDPNHMYQDNDPTIVGAEPSNTNANKGIVDNYLEPYTPLLDKMRELNQQMYLLADYFDKRQPVVRADTFSLWWDDGRNGTYMLLYADTALSIAAASVAAPYFRNTQFTGVNAVGIDMLLYGTNFNDVANFSLSPYQIWMSGYQLTGTDDDGDGLNNLAEFALGGNPTNPSENGYVPVFGKGMSNMVYVYPRRKDAGLTYWLETST另一方面，本专利技术还提供一种具有产物均一特性的β-琼胶酶AgaB6对应的核酸序列，如SEQIDNO.2所示。SEQIDNO.2：ACCGAGTACACCCTCCGCGTGGACGCGAAGAAGACCATCAACAACTCGACCGTGGACGGCAAGGCGGGCTTCTCGGCGTACAAGTCGTACCCGACCCGCTCGATCGCGCAGCTCCCGGGCTTCCGCCCGGGCACCGTGCCGGCGCCGCGCCTCTCGAAGTACGGCGGCGACCTCACCCGCTCGTGGCAGGCGACCGGCTTCATCCGCGTGCAGCAGGACAAGGGCTTCGCGGCGGCGTTCCCGTCGGCGCAGGACGGCACCCGCAAGTTCCTCCAGGCGAACGGCTTCAACGGCACCGGCGCGTGGTCGGCGACCAAGGACATCCAGGCGGAGAACGCGCGCGCGGACAAGCCGCTCGCGTACACCATCAACCTCGACTTCATGTCGAAGTACGGCGACAAGCGCGGCGGCACCTACGTGCAGCCGGGCCACAAGGGCTACCCGAACGACGTGATCTTCGCGTTCGAGCCGGAGTGGCCGGCGTTCTGCGAGGAGCAGGCGAAGCTCGCGGAGCCGTTCGCGAAGGACGCGAACGTGCTCGGCCACTTCTCGGACAACGAGATCCCGTTCCTCCCGAAGCTCCTCCCGCAGGTGCTCGCGCTCCGCGACCCGGCGCAGCCGGCGTACGTGGCGGCGCTCGACTGGCTCAAGACCCAGAAGACCGACACCGCGCACACCGACCAGCACCGCCAGGACTTCCTCGCGTTCGTGGCGGAGCGCTACTTCTCGATCGTGGCGAAGGCGATGAAGAAGTACGACCCGAACCACATGTACCAGGACAACGACCCGACCATCGTGGGCGCGGAGCCGTCGAACACCAACGCGAACAAGGGCATCGTGGACAACTACCTCGAGCCGTACACCCCGCTCCTCGACAAGATGCGCGAGCTCAACCAGCAGATGTACCTCCTCGCGGACTACTTCGACAAGCGCCAGCCGGTGGTGCGCGCGGACACCTTCTCGCTCTGGTGGGACGACGGCCGCAACGGCACCTACATGCTCCTCTACGCGGACACCGCGCTCTCGATCGCGGCGGCGTCGGTGGCGGCGCCGTACTTCCGCAACACCCAGTTCACCGGCGTGAACGCGGTGGGCATCGACATGCTCCTCTACGGCACCAACTTCAACGACGTGGCGAACTTCTCGCTCTCGCCGTACCAGATCTGGATGTCGGGCTACCAGCTCACCGGCACCGACGACGACGGCGACGGCCTCAACAACCTCGCGGAGTTCGCGCTCGGCGGCAACCCGACCAACCCGTCGGAGAACGGCTACGTGCCGGTGTTCGGCAAGGGCATGTCGAACATGGTGTACGTGTACCCGCGCCGCAAGGACGCGGGCCTCACCTACTGGCTCGAGACCTCGACC另一方面，本专利技术还提供一种具有产物均一特性的β-琼胶酶AgaB6的制备方法。另一方面，本专利技术还提供了所述β-琼胶酶AgaB6在水解琼胶中的应用。另一方面，本专利技术还提供了所述β-琼胶酶AgaB6在制备新琼寡糖中的应用。另一方面，一种水解琼胶的方法，所选用的β-琼胶酶为AgaB6。优选：所述酶解条件中反应温度为10~60℃。最适反应温度为40℃。优选：所述酶解条件中反应pH为6.0~9.0。最适反应pH为6.6。优选：所述产物均一特性中降解主产物为新琼四糖，可占到产物总量的92.3%。有益效果：1.本专利技术的β-琼胶酶Ag本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有产物均一特性的β‑琼胶酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种具有产物均一特性的β-琼胶酶，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。2.如权利要求1所述的β-琼胶酶所对应的核苷酸序列，所述核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。3.如权利要求1所述的β-琼胶酶在水解大分子琼胶中的应用。4.如权利要求3所述应用，其特征是，主产物为新琼四糖，降解产物具有均一...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴中宝，
申请(专利权)人：吴中宝，
类型：发明
国别省市：山东,37