洋葱伯克霍尔德菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderia cepacia)WY6‑5及其应用，保藏号为：CCTCC M 2018248。该洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderia cepacia)WY6‑5在磷降解、抑菌及促进植物生长、制备二甲基二硫醚中具有很好的应用。

【技术实现步骤摘要】
洋葱伯克霍尔德菌及其应用
本专利技术属于微生物肥料
，具体涉及洋葱伯克霍尔德菌及其应用。
技术介绍
中国是农业生产大国，同时也是一个粮食生产和消耗大国，土壤肥力对粮食产量的稳定和社会发展具有重要意义。长期以来，由于对化学肥料的过度依赖，导致土壤组份失衡，造成土壤酸化、板结、盐渍化等，严重制约着粮食产量的增长和品质的提升。改善土壤环境，提高土壤肥力，是目前乃至将来很长一段时间内研究的重点。为此，2015年，中国农业部制订了《到2020年化肥使用量零增长行动方案》，计划到2020年实现农药和化肥的零增长计划，解决土壤持续恶化问题。磷是农作物生长必需的三大营养元素之一，是植物体多种功能有机物的组成成分，对植物生长至关重要。然而，在我国，磷肥的利用率极低，仅有5-10％，95％以上的磷肥施用后，短期内即被土壤中的Ca2+、Fe3+、Al3+等离子固定，形成难溶性的磷酸钙/铁/铝等矿物质，无法被植物吸收利用。如何改善土壤中的磷肥状况，提高土壤中的可溶性磷含量，是目前研究的热点。土壤中微生物种类繁重、功能多样，已报道多种微生物可将难溶磷转化为植物可利用的可溶性磷，提高土壤肥力。朱培淼等人(朱培淼等，高效解磷细菌的筛选及其对玉米苗期生长的促进作用[J].应用生态学报,2007)筛选到一株解磷微生物K3，可降解土壤中的无机磷，对植物生长具有明显的促进作用。王婧(王婧，桔黄假单胞菌JD37菌株对植物的促生作用及其微生物肥料的研制[D].上海,上海师范大学,2012)筛选到一株橘黄假单胞菌JD37，具有较好的解磷效果，田间试验表明，对植物生长具有明显的促进作用。除此之外，芽孢杆菌、欧文氏菌、假单胞菌、土壤杆菌、沙雷氏菌、青霉菌和黄杆菌等均被报道具有解磷活性。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种洋葱伯克霍尔德菌及其应用。基于上述目的，本专利技术采取了如下技术方案：洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderiacepacia)WY6-5，其保藏号为CCTCCM2018248。该菌株的16SrDNA核酸序列如列表SEQIDNO:1。所述的洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderiacepacia)WY6-5在磷降解、抑菌及促进植物生长、制备二甲基二硫醚中的应用。本专利技术通过微生物学方法，以信阳毛尖茶100年树龄的茶树根际土壤为材料，分离到一株具有降解难溶性磷的洋葱伯克霍尔德菌，将其命名为洋葱伯克霍尔德菌BurkholderiacepaciaWY6-5，并将该菌株于2018年05月03日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCCM2018248。本专利技术针对我国土壤肥力降低，可溶性磷含量匮乏进行研究，旨在开发。研究中筛选到一株高效解磷微生物，可降解土壤中难溶性无机磷和有机磷，提高土壤磷肥肥力，促进植物生长，同时可产生挥发性抑菌物质，具有较好的生防潜能，为研发新型的抑菌微生物肥料提供新材料。所得洋葱伯克霍尔德菌在土壤中广泛存在，其能够高效降解难溶性的有机磷和无机磷，将其转化为植物可以吸收利用的可溶性磷，对提高土壤中的磷肥含量，促进植物生长具有重要意义。同时该菌株还可产生挥发性的抑菌物质，对包括禾谷镰刀菌在内的8种植物病原真菌具有明显抑制作用，后期可以作为高效生防菌剂开发生物菌肥。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：1)本专利技术筛选的洋葱伯克霍尔德菌WY6-5为百年茶龄茶树根际土壤微生物，为耐酸性茶树根际土壤的特异菌种，具有较好的应用前景；2)本专利技术筛选的洋葱伯克霍尔德菌WY6-5首次证明可同时降解难溶性的无机磷和有机磷，可提高水体或土壤中有效磷的含量，改善土壤状况，减少化学肥料的使用和危害；3)本专利技术筛选的洋葱伯克霍尔德菌WY6-5可降解无机磷，显著提高土壤磷肥含量，在植物盆栽试验中，促进植物生长，是良好的微生物菌肥材料；4)本专利技术筛选的洋葱伯克霍尔德菌WY6-5可产生挥发性抑菌代谢物质，抑制多种病原真菌的生长，且培养简单，效果明显，可作为生防菌株和微生物菌肥，发挥双重作用，应用前景广泛；5)本专利技术筛选的洋葱伯克霍尔德菌WY6-5产生的挥发性物质抑菌效果显著，分析后证明主要产生二甲基二硫醚，抑菌效果显著，可作为潜在杀菌剂使用。附图说明：WY6-5保藏日期：2018年5月3日，保藏单位：中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号NO：M2018248。序列表SEQIDNO：1是本专利技术分离的洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderiacepacia)WY6-5的16SrDNA的序列；图1为洋葱伯克霍尔德菌WY6-5对难溶性无机磷和难溶性有机磷的降解作用；图2为洋葱伯克霍尔德菌WY6-5的菌落形态；图3为洋葱伯克霍尔德菌WY6-5及其近缘种菌株基于16SrDNA序列的系统发育树分析；图4为洋葱伯克霍尔德菌WY6-5在液体摇培(A)和土壤培养(B)条件下对难溶性无机磷的降解作用；图5为洋葱伯克霍尔德菌WY6-5对盆栽玉米生长的影响；图6为洋葱伯克霍尔德菌WY6-5产生挥发性抑菌物质的广谱抑菌作用；图7为洋葱伯克霍尔德菌WY6-5的挥发性气体检测结果。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步说明。实施例1高效解磷菌株的分离与筛选1)高效解磷菌株的分离通过微生物学方法，从信阳市百年树龄茶树取根际土壤，用于微生物分离，称取1g土样，放入2mL的离心管中，加入1mL无菌水后混匀，依次稀释至10-6。取100μL菌悬液，涂布于难溶性磷培养基(无机磷或有机磷)表面，37℃下培养3～5天。在培养基表面挑取具有透明圈直径较大、透明度高的菌株，作为备选菌株，取单菌落划线培养于牛肉膏蛋白胨培养基(牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，NaCl5.0g，琼脂15.0g，蒸馏水1000mL，pH7.2-7.4)。所述无机磷培养基配方为：(NH4)2SO40.5g，MgSO40.3g，NaCl0.3g，Ca3(PO4)28.0g，葡萄糖10.0g，MnSO4(11％)1mL，FeSO4(1％)1mL，琼脂21g，水1L，pH7.2)；所述有机磷培养基配方：((NH4)2SO40.5g，MnSO4(11％)1mL，FeSO4(1％)1mL，NaCl0.3g，KCl0.3g，CaCO35g，卵磷脂0.8g，酵母膏0.8g，琼脂21g，水1L，pH7.0)培养3～5天后，筛选降解效果显著单菌落，获得纯培养。2)高效解磷菌株的筛选采用滤纸片培养法，解无机磷菌株于NA培养基培养24h后，用无菌水将其冲洗下来，调整菌液浓度至108cfu/ml；制备无机磷和有机磷培养平板，凝固后在培养皿中对称两点分别打孔(5mm)和贴滤纸片，分别加入20μl菌液,37℃下培养3～5天，测量溶磷圈的直径。经过上述筛选，获得一株既解难溶性无机磷又可降解难溶性有机磷的菌株WY6-5(图1)，培养3天后，其溶磷圈直径可达1cm。实施例2解磷菌株WY6-5的鉴定(1)WY6-5的形态学鉴定WY6-5于NA培养基培养后获得单菌落，菌落乳白色，不透明，边缘规则，表面光滑且湿润，菌落粘稠且突起，革兰氏染色阴性(图2)。(2)WY6-5的分子生物学鉴定WY6-5于NB培养液(牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，NaCl5.0g，蒸馏水1000mL，pH7.2-7.4)培养48h，收集菌体，采本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.洋葱伯克霍尔德菌（Burkholderia cepacia）WY6‑5，其保藏号为CCTCC NO: M 2018248。

【技术特征摘要】
1.洋葱伯克霍尔德菌（Burkholderiacepacia）WY6-5，其保藏号为CCTCCNO:M2018248。2.如权利要求1所述的洋葱伯克霍尔德菌WY6-5，其特征在于，该菌株的16...

【专利技术属性】
技术研发人员：宫安东，朱梓钰，万海燕，吕翠华，董飞燕，魏芬芬，廖玉才，张静柏，程琳，张在宝，袁红雨，
申请(专利权)人：信阳师范学院，青岛瀚普生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：河南,41