一株暹罗芽孢杆菌及其在防治番茄根结线虫病上的应用制造技术

本发明专利技术公开了一株暹罗芽孢杆菌及其在防治番茄根结线虫病上的应用。该菌株为暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)LK0006，保藏编号为CGMCC No.15215。实验表明，在离体条件下，发酵液稀释25倍，作用48h，对线虫的抑制率为90.35％；发酵液稀释25、50、100倍后可以明显抑制卵的孵化。在盆栽条件下，暹罗芽孢杆菌LK0006可湿性粉剂200倍防治番茄根结线虫病效果显著，防治效果达到75.02％，且番茄生长健壮，无药害产生，因而在生物防治番茄根结线虫病中具有应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一株暹罗芽孢杆菌及其在防治番茄根结线虫病上的应用
本专利技术属于微生物应用领域。具体而言，本专利技术涉及一株暹罗芽孢杆菌及其在防治番茄根结线虫病上的应用，以及采用该暹罗芽孢杆菌制备的生物防治制剂。
技术介绍
番茄(学名：LycopersiconesculentumMill.)为茄科番茄属一年生或多年生草本植物，中国各地普遍栽培，且许多地区均有温室或塑料大棚栽培。近年来，在保护地栽培中由于长年连作，复种指数增加，加之重茬严重，番茄根结线虫病发生日趋严重，一般可造成减产10％-20％，严重可达30％-40％，甚至绝产，已成为番茄生产的主要障碍之一。根结线虫属于线虫门、侧尾腺口纲、垫刃目、异皮总科、根结线虫属。全世界已报道的根结线虫有85种，其中在我国分布最为广泛的是南方根结线虫、北方根结线虫、花生根结线虫和爪哇根结线虫等4种。危害番茄的主要是南方根结线虫(Meloidogyneincognita)侵染引起。番茄根结线虫主要侵染番茄根部，尤其侧根受害多。根上形成很多近球状瘤状物，似念珠状相互连接，初表面白色，后变褐色或黑色，受害根结部常有龟裂，地上部表现萎缩或黄化，天气干燥时易萎蔫或枯萎。病部产生肥肿畸形瘤状根结，呈鸡爪状，解剖根结可见很小的乳白色线虫埋于其内。一般在根结之上可生出细弱新根，再度染病，则形成根结状肿瘤。线虫以成虫或卵在病组织里或以幼虫在土壤中越冬。病土和病肥是发病主要来源。该线虫发育适温25-30℃，幼虫遇低温失去活动能力，48-60℃经5分钟致死，在土中存活一年，2年即全部死亡。该病发生后，造成番茄根系受到损伤，输导组织被破坏，阻碍了水分和养分的正常运输，功能衰退。番茄植株地上部表现为：发育不良、叶片黄化、植株矮小，其结果较少且小，番茄果实脱落，产量低，果实品质差。在中午气温较高时，地上部植株呈萎蔫状态；早晚气温较低或浇水充足时，暂时萎蔫又可恢复正常。随着病情的发展，植株逐渐枯死。防治番茄根结线虫的方法主要有农业、化学和生物防治方法及改变栽培措施等。农业防治主要有：1、因地制宜选育和种植抗病品种；2、与葱蒜韭或禾本科作物轮作，有条件的实行水旱轮作或高温焖棚；3、培育无病壮苗，防止定植番茄病苗；上述存在很大的应用局限性且前期投入高。化学杀线虫剂主要有：有机磷类(噻唑膦、灭线磷、辛硫磷、甲拌磷等)、氨基甲酸酯类(克百威、丁硫克百威、杀螟丹等)，其中市场上数量较多的克百威、灭线磷和溴甲烷等因其高毒性和对生态环境的不可逆破坏近年内已被列为禁用药或限用药。噻唑膦因其兼具触杀性和内吸传导性对根际及入侵植物体内的线虫都有很好的灭杀作用，且持效期长，药效迅速，防治效果可达90％以上，但缺点是成本较高。而阿维菌素的优势在于成本不到前者的一半，而且易被微生物分解，无残留，但缺点在于致死缓慢，持效期短，对入侵植物体的线虫无作用。生物防治如链霉菌中阿维链霉菌发酵产的阿维菌素，淡紫似青霉等。作用慢，防治效果欠佳，不能满足市场需求。由于设施蔬菜复种指数高，线虫个体小，生命力顽强，以及农事操作频繁，加之土壤环境复杂，导致线虫防治效果不好，很难彻底清除线虫病害的侵扰。虽然目前化学杀线虫剂占据主要市场，但随着各国政府对环保的严格要求以及民众对安全性农产品的迫切需要，安全环保型杀线剂成为大势所趋。
技术实现思路
为了针对番茄根结线虫病进行防治，本专利技术经诱变筛选获得一株暹罗芽孢杆菌LK0006，该菌株容易在在番茄根系周围定殖，且防治番茄根结线虫的效果好，具有良好的应用前景。本专利技术所提供的菌株为暹罗芽孢杆菌(Bacillussiamensis)LK0006，它是以从山东省龙口市新嘉街道包家村番茄种植大棚中分离获得的一株暹罗芽孢杆菌(Bacillussiamensis)菌株LK0000为出发菌株，经过紫外诱变的正突变株离体筛选和活体试验，获得的一株对番茄根结线虫具有较强杀线虫效果的生防菌株。此菌株已于2018年1月15日保藏于中国微生物保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏号为CGMCCNo.15215。本专利技术暹罗芽孢杆菌(Bacillussiamensis)LK0006CGMCCNo.15215培养方法或繁殖方法：(1)普通培养保存采用LB培养基，配方为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，琼脂15-20g，蒸馏水1000mL，pH调至7.0-7.2；(2)实验室液体培养采用LB液体培养基，配方为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，蒸馏水1000mL，pH调至7.0-7.2；(3)种子液培养基配方：按质量百分比计，豆饼粉3.00％，玉米粉4.00％，葡萄糖0.40％，鱼粉0.50％，磷酸二氢钾0.03％，轻质碳酸钙1.20％，硫酸铵0.30％，氯化钠0.10％，剩余为水，pH调至7.0-7.2。(4)大量发酵培养基配方：同(3)中种子液培养基配方。本专利技术还公开了一种包括所述的暹罗芽孢杆菌LK0006的生物防治制剂。本专利技术所述的生物防治制剂的制备方法，包括以下步骤：(1)制备暹罗芽孢杆菌LK0006的种子液：将暹罗芽孢杆菌LK0006从试管斜面中挑取少量细菌，移至种子液培养基中，26～30℃摇床振荡培养20～28h，此为种子液；(2)将步骤(1)制备的种子液在无菌环境下接种到含已灭菌的大量发酵培养基的发酵罐中，26～30℃下恒温培养32～40h，得到发酵液；(3)将步骤(2)培养的发酵液中添加载体，喷雾干燥得到暹罗芽孢杆菌LK0006菌粉；(4)暹罗芽孢杆菌LK0006菌粉可以进一步加入农业上常用的助剂如湿润剂、填充剂等制成生物防治制剂。本专利技术提供一种用于防治番茄根结线虫病的方法，所述方法包括向发生根结线虫病的番茄根部施用暹罗芽孢杆菌LK0006或者其发酵液或者本专利技术的生物防治制剂。实验表明，本专利技术的暹罗芽孢杆菌LK0006具有菌株新颖、高效、抗逆性强的特点，在离体条件下，发酵液稀释25倍，作用48h，对线虫的抑制率为90.35％；发酵液稀释25、50、100倍后可以明显抑制卵的孵化。在盆栽条件下，暹罗芽孢杆菌LK0006可湿性粉剂200倍防治番茄根结线虫病效果显著，防治效果达到75.02％，且番茄生长健壮，无药害产生，因而在生物防治番茄根结线虫病中具有重要应用前景。同时相比其它的防治根结线虫病的生物菌剂，本专利技术的暹罗芽孢杆菌在土壤中，通过番茄根系分泌物，LK0006更容易识别番茄根系，更容易在在番茄根系周围定殖，并且通过番茄根系分泌的糖类、氨基酸以及维生素等获取生长和繁殖所需的营养，因此更适合于防治番茄的根结线虫病。具体实施方式下面结合具体实施例来进一步描述本专利技术，本专利技术的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是示例性的，并不对本专利技术的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本专利技术的精神和范围下可以对本专利技术技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本专利技术的保护范围内。实施例1：暹罗芽孢杆菌菌株LK0006的诱变筛选与鉴定一、菌株的诱变及筛选(1)出发菌株LK0000的分离芽孢杆菌的分离：土样的采集，在山东省龙口市新嘉街道包家村番茄种植大棚地块，采用5点取样法，分别采集地块四周和中央深度在10本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)LK0006，所述菌株的保藏编号为CGMCC No.15215。

【技术特征摘要】
1.暹罗芽孢杆菌(Bacillussiamensis)LK0006，所述菌株的保藏编号为CGMCCNo.15215。2.权利要求1所述的暹罗芽孢杆菌菌株LK0006在防治番茄根结线虫病中的用途。3.权利要求1所述的暹罗芽孢杆菌菌株LK0006的发酵方法，其特征是，(1)制备暹罗芽孢杆菌LK0006的种子液：将暹罗芽孢杆菌LK0006菌株移至种子液培养基中，26～30℃摇床振荡培养20～28h，此为种子液；(2)将步骤(1)制备的种子液接种到大量发酵培养基的发酵罐中，26-30℃下恒温培养32～40h。4.如权利要求3所述的暹罗芽孢杆菌菌株LK0006的发酵方法，其特征是，制备暹罗芽孢杆菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：牛兆颖，王凤娇，张淑凤，刘新，李宁，邱振豪，张淑静，牛赡光，
申请(专利权)人：青岛秾贝尔生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37