一种葛根总黄酮及多糖提取物的制备方法及应用技术

本发明专利技术属于生物与新医药中轻工和化工生物技术的天然产物有效成份的分离提取技术，涉及提取与应用领域，具体为提供一种葛根总黄酮及多糖提取物的制备方法及应用。本发明专利技术提取前采用木瓜蛋白酶对葛根进行处理，促进各种有效成分的浸出。酶解处理后的葛根采用高压水提‑‑醇沉法提取多糖，显著缩短提取时间，提高效率，提高多糖提取率。葛根多糖提取后的滤渣利用乙醇沉淀后收集的乙醇滤液重复利用提取黄酮类成分，显著提高了葛根的利用率，也减少有机溶剂的使用，减少成本。采用超声‑微波辅助提取滤渣，提高葛根黄酮类成分的提取率。此外，本发明专利技术制备的葛根总黄酮及多糖提取物对肿瘤细胞增殖具有抑制作用。

【技术实现步骤摘要】
一种葛根总黄酮及多糖提取物的制备方法及应用
本专利技术属于生物与新医药中轻工和化工生物技术的天然产物有效成份的分离提取技术，涉及提取与应用领域，具体为一种葛根总黄酮及多糖提取物的制备方法及应用。
技术介绍
葛根为豆科植物葛的块根，其性凉，味甘辛，具有发表解肌、升阳透疹、解热生津等功效。葛根黄酮是葛根资源中的一类重要功能性成分，已被证实有改善颈项强痛、缓解心绞痛、降血压、治疗视网膜动脉阻塞、增强免疫功能、降血糖、改善脑循环、改善学习记忆能力、抗肿瘤、解酒等功效。有关葛根黄酮的提取方法有微波辅助提取、溶剂提取、超高压提取等。近年来，超声和微波辅助萃取技术广泛应用于植物有效成分的提取，但葛根黄酮的超声--微波辅助技术提取研究未见报道。目前，对葛根有效成分的研究大多集中于其黄酮类成分，对其多糖的研究相对较少。大量研究表明，多糖除有免疫调节、抗肿瘤的生物学效应外，还具有抗衰老、降血糖和抗凝血等作用，且对机体毒副作用小。因此，葛根黄酮类成分和多糖均是葛根重要的功能性成分，联合使用才能更好的发挥葛根的保健功能。本专利技术的目的在于解决现有技术的不足，提供一种葛根总黄酮及多糖提取物的制备方法及应用，提高葛根提取物中总黄酮和多糖的提取率，有效发挥葛根提取物的保健功效。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供如下技术方案：（1）挑选合格的葛根进行切片、粉碎至30目得到葛根粉，备用；（2）向葛根粉中加入木瓜蛋白酶和Tris-HCL缓冲液恒温酶解4～6h，将酶解物料投入高压反应釜中，加入水，设置磁力搅拌速率为200r/min，氮气加压提取，提取完毕后过滤，取滤液、滤渣备用；滤液在45℃条件下真空浓缩至原体积的10%～15%，加入无水乙醇，静置待沉淀完全，过滤，收集沉淀物和乙醇滤液；沉淀物在60℃条件下真空干燥0.5～1.0h，粉碎，即得葛根多糖提取物；（3）将步骤（2）中提取后得到的滤渣投入提取罐中，加入水和步骤（2）收集的乙醇滤液，超声--微波辅助提取，过滤，取滤液；将滤液与步骤（2）收集剩余的乙醇滤液混合，在45℃条件下减压浓缩成浸膏状，在60～70℃条件下真空干燥，粉碎，即得葛根总黄酮提取物。（4）将步骤（2）和（3）制得的葛根多糖提取物与葛根总黄酮提取物混合30min，得葛根总黄酮及多糖提取物。优选的，所述步骤（2）中木瓜蛋白酶添加量为2.5%。优选的，所述步骤（2）中Tris-HCL缓冲液的PH值为6。优选的，所述步骤（2）中酶解条件为50～60℃恒温酶解。优选的，所述步骤（2）中高压提取条件为提取压力0.7～1.0MPa，温度100～120℃，提取时间0.5～1h。优选的，所述步骤（2）中浓缩液按体积比1:20～1:30加入无水乙醇，静置3～5h。优选的，所述步骤（3）中提取溶剂、水和步骤（2）收集的乙醇滤液分别按料液比1:15～1:20g/ml和1:20～1:30g/ml加入提取罐中。优选的，所述步骤（3）中超声-微波辅助提取条件为微波功率100～120W、超声功率50W，提取0.5～1h。与现有技术相比，本专利所述的一种葛根总黄酮及多糖提取物的制备方法及应用具有以下有益效果，提取前采用木瓜蛋白酶对葛根进行处理，促进各种有效成分的浸出。酶解处理后的葛根采用高压水提--醇沉法提取多糖，显著缩短提取时间，提高提取效率，提高多糖含量。葛根多糖提取后的滤渣及醇沉后收集的乙醇滤液重复利用提取黄酮类成分，显著提高了葛根的利用率，也减少有机溶剂的使用，减少成本。采用超声-微波辅助提取滤渣，提高葛根黄酮类成分的提取率。具体实施方式【实施例1】一种葛根总黄酮及多糖提取物的制备方法，包括如下步骤：（1）挑选合格的葛根进行切片、粉碎至30目得到葛根粉，备用；（2）向葛根粉中加入2.5%的木瓜蛋白酶和料液比为1:4g/ml的Tris-HCL缓冲液（pH=6），在50℃条件下恒温酶解6h，将酶解物料投入高压反应釜中，按料液比1:25g/ml加入水，氮气加压，设置磁力搅拌速率为200r/min，在提取压力0.7MPa，温度120℃的条件下提取0.5h，提取完毕后过滤，取滤液、滤渣备用；滤液在45℃条件下真空浓缩至原体积的10%，加入体积比为1:20的无水乙醇，静置3h待沉淀完全，过滤，收集沉淀物和乙醇滤液；沉淀物在60℃条件下真空干燥0.5，粉碎，即得葛根多糖提取物；（3）将步骤（2）中提取后得到的滤渣投入提取罐中，按料液比1:15g/ml加入水和1:20g/ml加入步骤（2）收集的乙醇滤液，在微波功率100W、超声功率50W的条件下提取0.5h，过滤，取滤液；将滤液与步骤（2）收集剩余的乙醇滤液混合，在45℃条件下减压浓缩成浸膏状，在60℃条件下真空干燥，粉碎，即得葛根总黄酮提取物；（4）将步骤（2）和（3）制得的葛根多糖提取物与葛根总黄酮提取物混合30min，得葛根总黄酮及多糖提取物，提取物收率29.2%。【实施例2】一种葛根总黄酮及多糖提取物的制备方法，包括如下步骤：（1）挑选合格的葛根进行切片、粉碎至30目得到葛根粉，备用；（2）向葛根粉中加入2.5%的木瓜蛋白酶和料液比为1:4g/ml的Tris-HCL缓冲液（pH=6），在60℃条件下恒温酶解4h，将酶解物料投入高压反应釜中，按料液比1:30g/ml加入水，氮气加压，设置磁力搅拌速率为200r/min，在提取压力1.0MPa，温度100℃的条件下提取1h，提取完毕后过滤，取滤液、滤渣备用；滤液在45℃条件下真空浓缩至原体积的15%，加入体积比为1:30的无水乙醇，静置5h待沉淀完全，过滤，收集沉淀物和乙醇滤液；沉淀物在60℃条件下真空干燥1.0h，粉碎，即得葛根多糖提取物；（3）将步骤（2）中提取后得到的滤渣投入提取罐中，按料液比1:20g/ml加入水和1:30g/ml加入步骤（2）收集的乙醇滤液，在微波功率120W、超声功率50W的条件下提取1h，过滤，取滤液；将滤液与步骤（2）收集剩余的乙醇滤液混合，在45℃条件下减压浓缩成浸膏状，在70℃条件下真空干燥，粉碎，即得葛根总黄酮提取物；（4）将步骤（2）和（3）制得的葛根多糖提取物与葛根总黄酮提取物混合30min，得葛根总黄酮及多糖提取物，提取物收率30.4%。【实施例3】一种葛根总黄酮及多糖提取物的制备方法，包括如下步骤：（1）挑选合格的葛根进行切片、粉碎至30目得到葛根粉，备用；（2）向葛根粉中加入2.5%的木瓜蛋白酶和料液比为1:4g/ml的Tris-HCL缓冲液（pH=6），在55℃条件下恒温酶解5h，将酶解物料投入高压反应釜中，按料液比1:25g/ml加入水，氮气加压，设置磁力搅拌速率为200r/min，在提取压力1.0MPa，温度120℃的条件下提取1h，提取完毕后过滤，取滤液、滤渣备用；滤液在45℃条件下真空浓缩至原体积的10%，加入体积比为1:20的无水乙醇，静置4h待沉淀完全，过滤，收集沉淀物和乙醇滤液；沉淀物在60℃条件下真空干燥0.5h，粉碎，即得葛根多糖提取物；（3）将步骤（2）中提取后得到的滤渣投入提取罐中，按料液比1:20g/ml加入水和1:20g/ml加入步骤（2）收集的乙醇滤液，在微波功率110W、超声功率50W的条件下提取1h，过滤，取滤液；将滤液与步骤（2）收集剩余的乙醇滤液混合，在45℃本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种葛根总黄酮及多糖提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）挑选合格的葛根进行切片、粉碎至30目得到葛根粉，备用；（2）向葛根粉中加入木瓜蛋白酶和Tris‑HCL缓冲液恒温酶解4～6h，将酶解物料投入高压反应釜中，加入水，设置磁力搅拌速率为200r/min，氮气加压提取，提取完毕后过滤，取滤液、滤渣备用；滤液在45℃条件下真空浓缩至原体积的10%～15%，加入无水乙醇，静置待沉淀完全，过滤，收集沉淀物和乙醇滤液；沉淀物在60℃条件下真空干燥0.5～1.0h，粉碎，即得葛根多糖提取物；（3）将步骤（2）中提取后得到的滤渣投入提取罐中，加入水和步骤（2）收集的乙醇滤液，超声‑‑微波辅助提取，过滤，取滤液；将滤液与步骤（2）收集剩余的乙醇滤液混合，在45℃条件下减压浓缩成浸膏状，在60～70℃条件下真空干燥，粉碎，即得葛根总黄酮提取物；（4）将步骤（2）和（3）制得的葛根多糖提取物与葛根总黄酮提取物混合30min，得葛根总黄酮及多糖提取物。

【技术特征摘要】
1.一种葛根总黄酮及多糖提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）挑选合格的葛根进行切片、粉碎至30目得到葛根粉，备用；（2）向葛根粉中加入木瓜蛋白酶和Tris-HCL缓冲液恒温酶解4～6h，将酶解物料投入高压反应釜中，加入水，设置磁力搅拌速率为200r/min，氮气加压提取，提取完毕后过滤，取滤液、滤渣备用；滤液在45℃条件下真空浓缩至原体积的10%～15%，加入无水乙醇，静置待沉淀完全，过滤，收集沉淀物和乙醇滤液；沉淀物在60℃条件下真空干燥0.5～1.0h，粉碎，即得葛根多糖提取物；（3）将步骤（2）中提取后得到的滤渣投入提取罐中，加入水和步骤（2）收集的乙醇滤液，超声--微波辅助提取，过滤，取滤液；将滤液与步骤（2）收集剩余的乙醇滤液混合，在45℃条件下减压浓缩成浸膏状，在60～70℃条件下真空干燥，粉碎，即得葛根总黄酮提取物；（4）将步骤（2）和（3）制得的葛根多糖提取物与葛根总黄酮提取物混合30min，得葛根总黄酮及多糖提取物。2.如权利要求1所述的一种葛根总黄酮及多糖提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中木瓜蛋白酶添加...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨鑫，
申请(专利权)人：杨鑫，
类型：发明
国别省市：福建,35