一种莲雾多糖及其制备方法和在制备肝脏细胞氧化损伤抑制剂中的应用技术

本发明专利技术公开了一种莲雾多糖及其制备工艺与应用，该莲雾多糖通过超声辅助水提与醇沉工艺制备得到，以摩尔百分比计，该莲雾多糖包括以下单糖：阿拉伯糖35.73～41.78％；半乳糖27.64～33.82％；半乳糖醛酸6.85～9.56％；葡萄糖7.28～9.37％；甘露糖1.89～2.63％；鼠李糖2.97～3.94％；葡糖醛酸3.68～4.45％；岩藻糖1.12～1.48％。该莲雾多糖可显著提升氨基甲酸乙酯诱导损伤的肝脏细胞的存活率、显著降低氨基甲酸乙酯诱导产生的细胞ROS水平、有效降低氨基甲酸乙酯诱导产生的细胞超氧化物阴离子水平等等，因此，可用于制备肝脏细胞氧化损伤抑制剂。

【技术实现步骤摘要】
一种莲雾多糖及其制备方法和在制备肝脏细胞氧化损伤抑制剂中的应用
本专利技术涉及植物多糖的
，具体涉及一种莲雾多糖及其制备方法和在制备肝脏细胞氧化损伤抑制剂中的应用。
技术介绍
莲雾(拉丁名：Syzygiumsamarangense)，又名洋蒲桃，桃金娘科蒲桃属植物，原产于马来半岛，安达曼和尼科巴群岛等地区，在热带、南亚热带地区广泛种植。目前，在中国广东、广西、福建、台湾、海南等地均有栽培。莲雾的种类很多，果色鲜艳，有的呈青绿色，有的呈粉红色，还有的呈大红色。莲雾果实水分含量为92.87％，蛋白质0.35％，碳水化合物5.97％，灰分或矿物质0.21％，粗纤维0.46％，还富含维生素C等多种维生素，还含有钙、磷、钾等矿物质，营养丰富(许彬.莲雾果实采后贮藏生理研究[D].厦门:集美大学,2011)。莲雾性平味甘，具有一定的保健治疗功能，能润肺、止咳、除痰、凉血、收敛，可治肺燥咳嗽等。公开号为CN103349850A的中国专利文献中报道了一种用于提取莲雾中有效成分的方法，其采用石油醚、乙醇为提取剂，提取莲雾中的脂溶性活性成分。公开号为CN106617042A的中国专利文献中提出了一种莲雾提取物的制备方法，其通过大孔树脂吸附，乙醇洗脱的方式制备得到莲雾提取物；然而，所得提取物的成分复杂，且没有经过检测，组分比例亦不确定。公开号为CN102228207A的中国专利文献中公开了采用生物酶解技术，获得莲雾提取物，提取物所截留的是50～100kD的组成，然而此种方法并不能除去莲雾中的脂溶性杂质和蛋白类物质，所获得的是一个组分复杂的混合物。李粉玲等(李粉玲,蔡汉权,洪仰纯.微波辅助提取莲雾多糖[J].食品研究与开发,2013(1):39-43.)利用微波辅助提取莲雾多糖，然而其仅仅使用水提取莲雾粗多糖，没有粗多糖进行除杂和纯化。马善波(马善波,孙阳,孟志强,等.苹果多糖的制备及对脂多糖诱导RAW264.7细胞凋亡的影响[J].中国药师,2016(12):2225-2229.)等采用乙醇除去多酚等醇溶性物质，进一步采用水提，Sevag法除蛋白，过氧化氢脱色，乙醇沉淀、透析等步骤提取苹果多糖；然而，过氧化氢脱色会导致多糖损失及结构变化。目前，尚未发现高纯度莲雾多糖的提取方法。多糖(polysaccharide)是由多个单糖分子缩合、失水而形成的由糖苷键结合的糖链，是一类分子结构复杂且庞大的高分子碳水化合物。由相同单糖组成的多糖称为同多糖，如淀粉、纤维素和糖原；以不同的单糖组成的多糖称为杂多糖。多糖组成与结构十分复杂，不是一种纯粹的化学物质，而是聚合程度不同的物质的混合物，不溶于乙醇和石油醚等有机溶剂。多糖是一类具有广泛生物活性的生物大分子，具有多种药理活性，如抗氧化、抗肿瘤、降血糖、降血脂、抗病毒以及增强免疫力等，具有较高的开发价值。氨基甲酸乙酯(EthylCarbamate，EC)是发酵食物(面包、酸牛奶、酱油、发酵豆制品等)和酒精饮品(葡萄酒、苹果酒、中国黄酒、日本清酒等)在发酵或贮存过程中天然产生的污染物，具有遗传毒性和致癌性。2007年，国际癌症研究机构(IARC)正式将EC归类为2A类致癌物(人类可能致癌物)。啮齿动物的代谢研究表明，EC可通过肝微粒体酯酶水解成乙醇，氨和二氧化碳；EC也可以被细胞色素P450氧化为N-羟基-氨基甲酸乙酯,该物质能够诱导Cu2+调控的DNA氧化损伤，促进细胞内自由基的生成，从而对细胞造成氧化损伤(WeberJV,SharypovVI.Ethylcarbamateinfoodsandbeverages:areview[J].EnvironmentalChemistryLetters,2009,7(3):233-247.)。肝脏是人体生物转化和解毒的重要器官，是EC进入人体后最初的代谢场所。因此，抑制氨基甲酸乙酯对肝脏损伤的物质具有很大的研究意义。
技术实现思路
基于上述技术问题，本专利技术通过超声辅助水提与醇沉工艺制备得到一种组成特殊、高纯度的莲雾多糖，该莲雾多糖可显著提升氨基甲酸乙酯诱导损伤的肝脏细胞的存活率、显著降低氨基甲酸乙酯诱导产生的细胞ROS水平、有效降低氨基甲酸乙酯诱导产生的细胞超氧化物阴离子水平、有效缓解氨基甲酸乙酯诱导产生的细胞线粒体膜电位水平降低、有效减少氨基甲酸乙酯诱导产生的细胞GSH消耗并有效恢复氨基甲酸乙酯诱导产生的细胞核损伤，因此，可用于制备肝脏细胞氧化损伤抑制剂。具体技术方案如下：一种莲雾多糖，其特征在于，以摩尔百分比计，所述莲雾多糖包括以下单糖：多糖是由单糖以一定的连接方式组成的重复结构单元，单糖以一定的糖苷键连接，不同糖苷键的连接的单糖称为多糖的结构单位。以摩尔比计，所述莲雾多糖包括以下结构单位：优选地，所述莲雾多糖的重均分子量为35.78～40.94kDa。本专利技术还公开了所述的莲雾多糖的制备方法，包括如下提取步骤：(1)莲雾鲜果，去皮后经超声辅助水提、醇沉后收集沉淀物，记为粗提物；(2)将所述粗提物溶于水中，除去蛋白类杂质，收集的水相经透析袋过滤截留，滤出液再经真空冷冻干燥，得到所述的莲雾多糖。本专利技术采用超声辅助水提与醇沉工艺，通过对工艺参数的精确调控实现对莲雾多糖中各单糖以及各结构单位的含量的有效调控。步骤(1)中，所述超声辅助水提，超声功率为100～200W，提取温度为70～95℃，时间为1～3h，重复次数为3～5次。所述醇沉，加入体积浓度为70～95％的乙醇。如无特殊说明，本专利技术中一定浓度的乙醇均为乙醇-水溶液。通过醇沉，可以使莲雾多糖沉淀，同时除去其中的脂溶性杂质。步骤(2)中：采用Sevag法除去蛋白类杂质，重复次数为6～8次，可有效除去莲雾多糖中的蛋白类杂质。透析袋截留可以将莲雾多糖中的小分子杂质除去，获得高纯度莲雾多糖，优选地，所述透析袋过滤截留分子量大于3.5kDa的成分。进一步优选：所述超声辅助水提，超声功率为150～200W，提取温度为80～95℃；所述醇沉采用体积浓度为80～90％的乙醇。经试验发现，采用上述进一步优选的工艺条件提取得到的莲雾多糖，以摩尔百分比计，包括以下单糖：以摩尔比计，所述莲雾多糖包括以下结构单位：针对上述特殊工艺提取得到的莲雾多糖进行了一系列的活性测试发现：提取得到的莲雾多糖对氨基甲酸乙酯诱导的肝脏细胞氧化损伤具有保护作用，体现在：1、可显著提升氨基甲酸乙酯诱导损伤的肝脏细胞的存活率；2、显著降低氨基甲酸乙酯诱导产生的细胞ROS水平；3、有效降低氨基甲酸乙酯诱导产生的细胞超氧化物阴离子水平；4、有效缓解氨基甲酸乙酯诱导产生的细胞线粒体膜电位水平降低；5、有效减少氨基甲酸乙酯诱导产生的细胞GSH消耗；6、有效恢复氨基甲酸乙酯诱导产生的细胞核损伤。因此，本专利技术还公开了该莲雾多糖在制备肝脏细胞氧化损伤抑制剂中的应用。具体地，经氨基甲酸乙酯诱导的肝脏细胞氧化损伤。优选地，所述抑制剂中，莲雾多糖的有效剂量为200μg/mL。进一步优选，以摩尔百分比计，所述莲雾多糖包括以下单糖：以摩尔比计，所述莲雾多糖包括以下结构单位：经活性试验发现，上述组成的莲雾多糖在针对由氨基甲酸乙酯诱导的肝脏细胞氧化损伤中具有更显著的抑制作用。与现有技术相比，本专利技术具有如下优点：1、本专利技术采用超声辅助水提与醇沉工艺，通过对工艺参数的精本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种莲雾多糖，其特征在于，以摩尔百分比计，所述莲雾多糖包括以下单糖：

【技术特征摘要】
1.一种莲雾多糖，其特征在于，以摩尔百分比计，所述莲雾多糖包括以下单糖：2.根据权利要求1所述的莲雾多糖，其特征在于，以摩尔比计，所述莲雾多糖包括以下结构单位：3.根据权利要求1或2所述的莲雾多糖，其特征在于，重均分子量为35.78～40.94kDa。4.一种根据权利要求1～3任一所述的莲雾多糖的制备方法，其特征在于，包括如下提取步骤：(1)莲雾鲜果，去皮后经超声辅助水提、醇沉后收集沉淀物，记为粗提物；(2)将所述粗提物溶于水中，除去蛋白类杂质，收集的水相经透析袋过滤截留，滤出液再经真空冷冻干燥，得到所述的莲雾多糖。5.根据权利要求4所述的莲雾多糖的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述超声辅助水提，超声功率为100～200W，提取温度为70～95℃。6....

【专利技术属性】
技术研发人员：陈卫，鲍涛，柯慧慧，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33