一种骆驼奶抗氧化多肽的制备方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种骆驼奶抗氧化多肽的制备方法及其应用，该方法是由骆驼鲜奶为原料，在温度4℃离心除奶油，采用传统的等电点法沉淀、透析袋、浓缩、冷冻干燥得到总酪蛋白，用胰蛋白酶水解，利用冷冻干燥精制而成抗氧化多肽，再通过超滤膜、凝胶柱子和高效液相分离纯化，得到具有比较强的抗氧化活性的三种骆驼奶抗氧化多肽。其氨基酸一级解构通过高分辨质谱与液质连用色谱技术相结合确定为三个多肽：RLDGQGRPRVWLGR(1665.94Da)，TPDNIDIWLGGIAEPQVKR(2122.13Da)和VAYSDDGENWTEYRDQGAVEGK(2489.09 Da)。该多肽具有增强体液免疫及全身免疫的功能，富含人体易消化和吸收的纯天然蛋白质、18种氨基酸，更适合作为老年人和婴幼儿的理想乳品。

【技术实现步骤摘要】
一种骆驼奶抗氧化多肽的制备方法及其应用
本专利技术涉及一种骆驼奶抗氧化多肽的制备方法及其应用。
技术介绍
经过近20年的发展，2016年我国的乳制品产量为2782.5万吨，2017年上半年1466.3万吨，乳制品工业成为关系国计民生的重要产业。但是与此同时，产品结构不合理、同质化现象严重、企业利润下滑等也成为行业继续前行的障碍。骆驼在全世界许多国家的人们生活中扮演着重要的角色，特别是在那些干旱地区。除了骑乘、驮运、拉车、犁地等功能外，骆驼还能提供乳和肉，在人们的经济生活和食品来源方面做出贡献。据联合国粮食与农业组织统计，现在全世界约有骆驼1900万峰，其中大约有1500万峰产于非洲，400万峰产于亚洲。另据估计，其中单峰驼约1700万峰，主要作为乳用；双峰驼约200万峰，主要供役用和绒用。中国、蒙古等双峰驼的泌乳期是14-16个月，母驼平均日产奶量为5kg左右，个别个体高达20kg，通常有2kg被人所用，其余为幼驼所食。骆驼奶不仅营养丰富，而且具有很好的保健功能。通过对国内外大量文献资料比对，全面综述了骆驼奶在营养和保健方面的功能，以期为骆驼奶的推广和深加工提供一些理论依据。骆驼奶在阿拉伯地区被称为“沙漠白金”，其口味微甜，比牛奶的营养价值更高，是当地的常见饮品。驼奶所含的维生素C和铁分别是牛奶的3倍和10倍，不饱含脂肪酸、蛋白质、镁、钙等含量也高于牛奶，1L驼奶含52单位胰岛素，远高于牛奶的0.016单位，驼奶富含牛奶所缺少的具有杀菌和强化人体免疫力的乳铁传递蛋白的溶解酵素，而脂肪含量则低于牛奶。因此，驼奶具有强身健体、提高人体免疫力、抗癌、治疗糖尿病等功效。哈萨克人民长期以来就用驼奶治疗肺结核病。2009年新疆医科大学第二附属医院经临床研究发现，在不接受正规治疗的情况下，部分乙肝患者饮用了一段时间骆驼奶后实现了乙肝转阴。骆驼奶具有滋阴壮阳的功效，俄罗斯、哈萨克斯坦、印度等国医生更是将骆驼奶作为帮助病人康复的处方药，饮用骆驼奶有助于水肿、黄疸、脾脏疾病、肺结核、小船、贫血和痔疮等患者的康复。非洲一些国家的艾滋病患者被建议服用骆驼奶，索马里人坚信骆驼奶有治病功效。以色列和德国的比较生理学研究表明，骆驼奶具有明显的抗糖尿病特征。引用骆驼奶可帮助I型糖尿病患者大幅度减少胰岛素注射量。从国内看，骆驼奶原来是农牧民自挤自饮和在家招待客人的饮品，极少对外销售，骆驼奶产量常年保持在4万t左右，仅占世界总产量的0.74％。但是今年牛奶业问题频发，而骆驼奶因其独特的成分和功效成为一种新的高端饮品，引用骆驼奶正成为一种新时尚。国内市场上的骆驼奶主要产自新疆，消费人群主要是哈萨克群众、康复人士、老人、医务工作者和教师等。目前，北京、上海、福建、浙江、江苏、河北、黑龙江、重庆、香港、台湾、等地开始销售骆驼奶，并且有了一定的知名度。骆驼奶身价不菲，一瓶180g的业态驼奶售价48元，一罐300g的骆驼奶粉售价588元，但销售依然很好，供不应求，骆驼奶在内地城市销售空间已经初步打开，前景光明。骆驼奶是骆驼用其生命来演绎的营养物质，纯天然、绿色。骆驼奶除了具有高营养价值以外，还可以辅助治疗糖尿病，同时还可以补铁，属于天然的多功能乳品。最新研究表明，每天摄入约500毫升的骆驼奶，可以有效降低血液中葡萄糖水平，减少人体对于胰岛素的需求量。相关人士指出，骆驼奶含有类胰岛素因子，可以辅助降糖，可用于糖尿病的治疗。
技术实现思路
本专利技术目的在于，提供一种骆驼奶抗氧化多肽的制备方法及其应用，该方法是由骆驼鲜奶为原料，在温度4℃离心除奶油，采用传统的等电点法沉淀、透析袋、浓缩、冷冻干燥得到总酪蛋白，用胰蛋白酶水解，利用冷冻干燥精制而成抗氧化多肽，再通过超滤膜、凝胶柱子和高效液相分离纯化，得到具有比较强的抗氧化活性的三种骆驼奶抗氧化多肽。其氨基酸一级解构通过高分辨质谱与液质连用色谱技术相结合确定为三个多肽：RLDGQGRPRVWLGR(1665.94Da),TPDNIDIWLGGIAEPQVKR(2122.13Da)和VAYSDDGENWTEYRDQGAVEGK(2489.09Da)。该多肽具有增强体液免疫及全身免疫的功能，富含人体易消化和吸收的纯天然蛋白质、18种氨基酸(含人体必须但自身不能合成的全部8种氨基酸)、铁、维生素B和维生素C等营养元素，更适合作为老年人和婴幼儿的理想乳品。本专利技术所述的一种骆驼奶抗氧化多肽的制备方法，按下列步骤进行：a、将骆驼鲜奶在温度4℃，转速为10000r/min，离心20min，重复2次，除奶油，合并上清液；b、将步骤a上清液用1mol/L的HCl溶液调pH4.0-4.5，在温度4℃冰箱放12个小时，使骆驼奶酪蛋白沉淀；c、将步骤b中的沉淀部位在温度4℃，转速为10000r/min，离心20min后，将沉淀物加入蒸馏水溶解，并用1mol/l的HCl调pH值为7.0，再用磁力搅拌器搅拌完全溶解；d、将步骤c中的溶液用蒸馏水透析48h脱盐，将已脱盐的酪蛋白浓缩，经冷冻干燥机温度-80℃，压力9.8Pa，冻干24h，所述的透析袋规格是1000Da；e、将步骤d中的酪蛋白通过电泳测抗氧化活性，测蛋白含量，其中电泳分离胶为体积15％的丙烯酰胺；f、将步骤e中得到的酪蛋白，加入蒸馏水使蛋白溶解，调节溶液质量浓度为50g/L，再用浓度为1mol/L的NaOH调节溶液pH值至8.0，于温度37℃水浴锅中溶解，当溶液无明显颗粒且pH值无明显变化时，加质量比为1.0％的胰蛋白酶，于恒温水浴锅中用浓度为1mol/L的NaOH维持酪蛋白水解液pH值至8.0并缓慢搅拌酶解4h，并于温度100℃沸水浴中灭酶10min，自然冷却值室温；g、按体积比1:3将步骤f中的总多肽中加入乙醇，在温度4℃冰箱放12个小时，使大分子蛋白沉淀；h、将步骤g中的溶液在温度4℃，转速为10000r/min，离心20min，除分子量大的蛋白质，用旋转蒸发器浓缩，冻干，得到分子量小的总多肽；i、将步骤h中的总多肽通过3000Da的超滤膜分离，得到分子量小于3000Da的标记为Ⅰ和分子量大于3000Da的标记为Ⅱ；j、将步骤i中得到的分子量小于3000Da的部位Ⅰ通过凝胶柱子分离，得到Ⅰa和Ⅰb两个部位，比较该两个部位的抗氧化活性，其中凝胶柱使用的缓冲溶液为体积0.1％的三氟乙酸；k、将步骤j中得到的部位Ⅰb再次通过梯度为25-70％乙腈0-40min，流速为2.5mL/min的高效液相色谱分离得到Ⅰb-1，Ⅰb-2，Ⅰb-3三个骆驼奶抗氧化多肽。所述方法获得的骆驼奶抗氧化多肽在制备保健品的用途。所述方法获得的骆驼奶抗氧化多肽在制备食品中的用途。所述方法获得的骆驼奶抗氧化多肽在制备食品添加剂中的用途。本专利技术所述的一种骆驼奶抗氧化多肽的制备方法及其应用，通过该方法得到的骆驼奶抗氧化多肽分子量因氨基酸序列不同而有较大差异。骆驼奶酪蛋白含量高，可提高婴幼儿免疫力和抗病力，可满足婴幼儿生长发育的营养需要。骆驼奶的核苷酸比牛奶、人奶含量都高，对婴幼儿大脑发育增强智力十分有益。骆驼奶酪蛋白因其均衡的氨基酸组成、生物利用率高和抗营养因子低而被作为蛋白的重要来源，也是获得生物活性肽的很好资源。该方法以骆驼鲜奶为原料，经脱脂，采用传统的等电点法沉淀提取总酪蛋白，然后通过胰蛋白酶水本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种骆驼奶抗氧化多肽的制备方法，其特征在于按下列步骤进行：a、将骆驼鲜奶在温度4℃，转速为10000r/min，离心20min，重复2次，除奶油，合并上清液；b、将步骤a上清液用1mol/L的HCL溶液调pH 4.0‑4.5，在温度4℃冰箱放12个小时，使骆驼奶酪蛋白沉淀；c、将步骤b中的沉淀部位在温度4℃，转速为10000r/min，离心20min后，将沉淀物加入蒸馏水溶解，并用1mol/l的HCl调pH值为7.0，再用磁力搅拌器搅拌完全溶解；d、将步骤c中的溶液用蒸馏水透析48h脱盐，将已脱盐的酪蛋白浓缩，经冷冻干燥机温度‑80℃，压力9.8Pa，冻干24h，所述的透析袋规格是1000Da；e、将步骤d中的酪蛋白通过电泳测抗氧化活性，测蛋白含量，其中电泳分离胶为体积15%的丙烯酰胺；f、将步骤e中得到的酪蛋白，加入蒸馏水使蛋白溶解，调节溶液质量浓度为50g/L，再用浓度为 1 mol/L 的 NaOH 调节溶液 pH 值至8.0，于温度37℃水浴锅中溶解，当溶液无明显颗粒且pH 值无明显变化时，加质量比为1.0%的胰蛋白酶，于恒温水浴锅中用浓度为1 mol/L的 NaOH维持酪蛋白水解液 pH值至 8.0并缓慢搅拌酶解 4 h，并于温度100℃沸水浴中灭酶10 min，自然冷却值室温；g、按体积比1:3将步骤f中得到的水解液加入乙醇，在温度4℃冰箱放12个小时，使大分子蛋白沉淀；h、将步骤g中的溶液在温度4℃，转速为10000r/min，离心20min，除分子量大的蛋白质，用旋转蒸发器浓缩，冻干，得到分子量小的总多肽；i、将步骤h中的总多肽通过3000Da的超滤膜分离，得到分子量小于3000Da的标记为Ⅰ和分子量大于3000Da的标记为Ⅱ；j、将步骤i中得到的分子量小于3000Da的部位Ⅰ通过凝胶柱子分离，得到Ⅰa 和Ⅰb两个部位，比较该两个部位的抗氧化活性，其中凝胶柱使用的缓冲溶液为体积0.1% 的三氟乙酸；k、将步骤j中得到的部位Ⅰb再次通过梯度为25‑70%乙腈0‑40 min，流速为2.5 mL/min的高效液相色谱分离得到Ⅰb‑1，Ⅰb‑2，Ⅰb‑3三个骆驼奶抗氧化多肽。...

【技术特征摘要】
1.一种骆驼奶抗氧化多肽的制备方法，其特征在于按下列步骤进行：a、将骆驼鲜奶在温度4℃，转速为10000r/min，离心20min，重复2次，除奶油，合并上清液；b、将步骤a上清液用1mol/L的HCL溶液调pH4.0-4.5，在温度4℃冰箱放12个小时，使骆驼奶酪蛋白沉淀；c、将步骤b中的沉淀部位在温度4℃，转速为10000r/min，离心20min后，将沉淀物加入蒸馏水溶解，并用1mol/l的HCl调pH值为7.0，再用磁力搅拌器搅拌完全溶解；d、将步骤c中的溶液用蒸馏水透析48h脱盐，将已脱盐的酪蛋白浓缩，经冷冻干燥机温度-80℃，压力9.8Pa，冻干24h，所述的透析袋规格是1000Da；e、将步骤d中的酪蛋白通过电泳测抗氧化活性，测蛋白含量，其中电泳分离胶为体积15%的丙烯酰胺；f、将步骤e中得到的酪蛋白，加入蒸馏水使蛋白溶解，调节溶液质量浓度为50g/L，再用浓度为1mol/L的NaOH调节溶液pH值至8.0，于温度37℃水浴锅中溶解，当溶液无明显颗粒且pH值无明显变化时，加质量比为1.0%的胰蛋白酶，于恒温水浴锅中用浓度为1mol/L的NaOH维持酪蛋白水解液pH值...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿布力米提·伊力，艾合米丁·外力，阿吉艾克拜尔·艾萨，高彦华，
申请(专利权)人：中国科学院新疆理化技术研究所，
类型：发明
国别省市：新疆,65