三十四碳-（20,23）-二烯酸的提取方法及其应用技术

本发明专利技术公开了三十四碳‑（20,23）‑二烯酸的提取方法，属于医药应用技术领域。包括预处理、提取、浓缩、萃取步骤，其中，在预处理阶段，选用60～100目的银柴胡颗粒，增加提取溶剂与银柴胡的接触面。使用恒温的提取环境，降低物质沸点，提高银柴胡中有效组分的提取效率，提高三十四碳‑（20,23）‑二烯酸得到率。同时，通过定温浓缩及定温萃取，进一步提高三十四碳‑（20,23）‑二烯酸得到率。实验验证，上述方法提取的三十四碳‑（20,23）‑二烯酸在抑制肿瘤细胞生长尤其是在抑制胃癌肿瘤细胞生长中，有着显著的抑制活性，对胃癌肿瘤细胞的抑制率达到50%以上。

【技术实现步骤摘要】
三十四碳-(20，23)-二烯酸的提取方法及其应用
本专利技术属于医药应用
，具体涉及三十四碳-(20,23)-二烯酸的提取方法及其应用。
技术介绍
文献记载，在银柴胡中能够分离得到三十四碳-(20,23)-二烯酸，然而，对三十四碳-(20,23)-二烯酸的药效以及如何从中药材银柴胡中富集提取三十四碳-(20,23)-二烯酸化合物的研究却鲜有报道，现有技术中，从银柴胡中提取分离三十四碳-(20,23)-二烯酸的过程复杂，耗时耗力，且不能保证最终目标化合物三十四碳-(20,23)-二烯酸的得到率。这极大的限制了银柴胡尤其是银柴胡中有效组分三十四碳-(20,23)-二烯酸在药用领域的发展。银柴胡为石竹科植物StellariadichotomaL.var.lanceolataBge的干燥根，味甘、微寒，主产于宁夏地区，是宁夏道地药材，目前约有15万亩的种植面积。文献记载银柴胡具有清虚热，除疳热的功能，用于阴虚发热、骨蒸痨热、小儿疳热等症。银柴胡的基础研究始于上世纪六十年代，目前，已从银柴胡中分离鉴定出发现12种甾醇类、18种生物碱类、13种环肽类、17种挥发性物质和5种酚酸类物质。有文献表明，银柴胡在缓解炎症、抗变态反应、抗动脉粥样硬化以及缓解肿瘤细胞恶化方面有着显著的作用。由于三十四碳-(20,23)-二烯酸含量较少，往往被忽略或者和其他化合物一起被制成混合提取物来研究其医药学性质，这导致在对三十四碳-(20,23)-二烯酸药用价值研究的缺失，不能清楚的表明银三十四碳-(20,23)-二烯酸在治疗病症时的效果以及其表现出的细胞毒性。分离提纯银柴胡中的三十四碳-(20,23)-二烯酸并研究其药用价值将极大推进银柴胡在中药领域的应用。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术公开了一种从银柴胡中提取三十四碳-(20,23)-二烯酸的方法。本专利技术还公开了上述方法提供的三十四碳-(20,23)-二烯酸在防治恶性肿瘤中的应用。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：一种从银柴胡中提取所述三十四碳-(20,23)-二烯酸的方法，包括以下步骤：预处理：清洗中药材银柴胡，并粉碎，筛选其中60目～100目的粉状颗粒；提取：取中药材银柴胡，投入实验室用多功能提取罐中，按预定药液比加入75％乙醇水溶液，在预定提取温度下，提取3h；浓缩：将提取产生的粗液过滤后，在预定浓缩温度下蒸发浓缩，至无醇味；萃取：对浓缩产生的浓缩液用石油醚在预定萃取比和萃取温度下进行萃取，石油醚萃取相浓缩得石油醚部，石油醚萃余相用二氯甲烷在预定萃取比和萃取温度下进行萃取，二氯甲烷萃取相浓缩得二氯甲烷部，二氯甲烷萃余相用乙酸乙酯在预定萃取比和萃取温度下进行萃取，乙酸乙酯萃取相浓缩得乙酸乙酯部，对乙酸乙酯部依次通过常压层析柱、硅胶柱、ODS柱、LH-20凝胶柱色谱及PHPLC进行分离，除杂后得到三十四碳-(20,23)-二烯酸；其中，所述步骤“提取”中，预定药液比为1:10，预定提取温度为65℃～90℃；所述步骤“浓缩”中，预定浓缩温度为55℃～70℃；所述步骤“萃取”中，预定萃取温度为20℃～40℃，预定萃取比为1:3～1:5。如上所述方法提取的三十四碳-(20,23)-二烯酸在防治恶性肿瘤中的应用。由上述技术方案可知，通过对银柴胡清洗粉碎等预处理工作，筛选出60目～100目的银柴胡颗粒，避免由于粒度过大，导致有效组分不能完全从银柴胡中被提取出，避免由于粒度过小，导致银柴胡颗粒水合严重，保证银柴胡有效组分最大程度被提取出。采用恒温的提取环境，使提取状态更加活跃，进一步提高了银柴胡中有效组分的提取效率以及有效组分的得到率。定温的浓缩、定温的萃取以及恒定的萃取比使得保证了提取过程的顺利进行，进一步提高银柴胡中有效组分的提取效率，提高目标化合物三十四碳-(20,23)-二烯酸的得到率。本专利技术还提供了上述方法制备的三十四碳-(20,23)-二烯酸应用于预防或治疗恶性肿瘤，尤其是应用于预防和治疗胃癌，其有益效果是，通过抗癌特性实验可知，在一定剂量下，三十四碳-(20,23)-二烯酸具有良好的抑制肿瘤细胞生长活性，尤其是在抑制胃癌细胞肿瘤的生长中，表现出相当的抑制活性，抑制率均达到50％以上。附图说明图1是三十四碳-(20,23)-二烯酸的基于银柴胡的制备方法流程图。图2是银柴胡乙酸乙酯部分离流程图。图3是三十四碳-(20,23)-二烯酸抑制胃癌肿瘤细胞抑制率柱状图。具体实施方式以下结合具体实施例，对本专利技术的技术方案做进一步说明。三十四碳-(20,23)-二烯酸(n-tetratriacont-20,23-dienoicacid)存在于中药材银柴胡中，其分子式为：C34H64O2，结构式如下：三十四碳-(20,23)-二烯酸白色粉末，溶于氯仿。请参看图3，专利技术人在实验中发现，三十四碳-(20,23)-二烯酸虽在银柴胡中含量较低，但其在抑制肿瘤细胞生长的过程中发挥着积极且有效的作用，实验证明，三十四碳-(20,23)-二烯酸在浓度为5μM～10μM时，具有优秀的抗癌活性，尤其是在作为抑制胃癌肿瘤细胞生长的药物时，其抑制率达到50％，且细胞毒性较弱。三十四碳-(20,23)-二烯酸在银柴胡中的含量较低，在提取富集过程中，需要从各个方面，不断提高三十四碳-(20,23)-二烯酸的提取效率以及最终的三十四碳-(20,23)-二烯酸的得到率。请参看图1，在一较佳实施例中，采用恒温提取氛围，采用定温定萃取比的萃取分离氛围，有效的提高了从银柴胡中提取三十四碳-(20,23)-二烯酸的提取效率，也有效的提高了三十四碳-(20,23)-二烯酸的得到率。例如，采用如下的生产工艺流程：预处理：清洗中药材银柴胡，并粉碎，筛选其中60目～100目的粉状颗粒；提取：取中药材银柴胡，投入实验室用多功能提取罐中，按预定药液比加入75％乙醇水溶液，在预定提取温度下，提取3h；浓缩：将提取产生的粗液过滤后，在预定浓缩温度下蒸发浓缩，至无醇味；萃取：对浓缩产生的浓缩液用石油醚在预定萃取比和萃取温度下进行萃取，石油醚萃取相浓缩得石油醚部，石油醚萃余相用二氯甲烷在预定萃取比和萃取温度下进行萃取，二氯甲烷萃取相浓缩得二氯甲烷部，二氯甲烷萃余相用乙酸乙酯在预定萃取比和萃取温度下进行萃取，乙酸乙酯萃取相浓缩得乙酸乙酯部，对乙酸乙酯部依次通过常压层析柱、硅胶柱、ODS柱、LH-20凝胶柱色谱及PHPLC进行分离，除杂后得到三十四碳-(20,23)-二烯酸；其中，所述步骤“提取”中，预定药液比为1:10，预定提取温度为65℃～90℃；所述步骤“浓缩”中，预定浓缩温度为55℃～70℃；所述步骤“萃取”中，预定萃取温度为20℃～40℃，预定萃取比为1:3～1:5。作为优选，所述步骤“分离”中，常压层析柱的填料为100目～200目，直径为10cm，以二氯甲烷-甲醇系统梯度洗脱，硅胶柱以二氯甲烷-丙酮系统洗脱，ODS柱以60～100％甲醇洗脱，PHPLC流动相为甲醇。作为优选，所述步骤“提取”中，预定提取温度为75℃。作为优选，所述步骤“浓缩”中，预定浓缩温度为55℃。作为优选，所述步骤“萃取”中，预定萃取温度为25℃。作为优选，所述步骤“萃取”中，预定萃取比萃取液:萃取剂依次分别为1:3、1:3、1:4。专利技术人还意外的发现，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种三十四碳‑（20,23）‑二烯酸的提取方法，基于中药材银柴胡，其特征在于，包括以下步骤：预处理：清洗中药材银柴胡，并粉碎，筛选其中60目～100目的粉状颗粒；提取：取中药材银柴胡，投入实验室用多功能提取罐中，按预定药液比加入75%乙醇水溶液，在预定提取温度下，提取3h；浓缩：将提取产生的粗液过滤后，在预定浓缩温度下蒸发浓缩，至无醇味；萃取：对浓缩产生的浓缩液用石油醚在预定萃取比和萃取温度下进行萃取，石油醚萃取相浓缩得石油醚部，石油醚萃余相用二氯甲烷在预定萃取比和萃取温度下进行萃取，二氯甲烷萃取相浓缩得二氯甲烷部，二氯甲烷萃余相用乙酸乙酯在预定萃取比和萃取温度下进行萃取，乙酸乙酯萃取相浓缩得乙酸乙酯部，对乙酸乙酯部依次通过常压层析柱、硅胶柱、ODS柱、LH‑20凝胶柱色谱及PHPLC进行分离，除杂后得到三十四碳‑（20,23）‑二烯酸；其中，所述步骤“提取”中，预定药液比为1:10，预定提取温度为65℃～90℃；所述步骤“浓缩”中，预定浓缩温度为55℃～70℃；所述步骤“萃取”中，预定萃取温度为20℃～40℃，预定萃取比为1:3～1:5。

【技术特征摘要】
1.一种三十四碳-（20,23）-二烯酸的提取方法，基于中药材银柴胡，其特征在于，包括以下步骤：预处理：清洗中药材银柴胡，并粉碎，筛选其中60目～100目的粉状颗粒；提取：取中药材银柴胡，投入实验室用多功能提取罐中，按预定药液比加入75%乙醇水溶液，在预定提取温度下，提取3h；浓缩：将提取产生的粗液过滤后，在预定浓缩温度下蒸发浓缩，至无醇味；萃取：对浓缩产生的浓缩液用石油醚在预定萃取比和萃取温度下进行萃取，石油醚萃取相浓缩得石油醚部，石油醚萃余相用二氯甲烷在预定萃取比和萃取温度下进行萃取，二氯甲烷萃取相浓缩得二氯甲烷部，二氯甲烷萃余相用乙酸乙酯在预定萃取比和萃取温度下进行萃取，乙酸乙酯萃取相浓缩得乙酸乙酯部，对乙酸乙酯部依次通过常压层析柱、硅胶柱、ODS柱、LH-20凝胶柱色谱及PHPLC进行分离，除杂后得到三十四碳-（20,23）-二烯酸；其中，所述步骤“提取”中，预定药液比为1:10，预定提取温度为65℃～90℃；所述步骤“浓缩”中，预定浓缩温度为55℃...

【专利技术属性】
技术研发人员：付雪艳，董琳，郭东燕，陈容，
申请(专利权)人：宁夏医科大学，
类型：发明
国别省市：宁夏,64