薯蓣皂苷在制备抑制血管钙化药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了薯蓣皂苷在制备治疗抑制血管钙化疾病药物中的应用，具体涉及一种天然甾体皂苷类化合物的应用——薯蓣皂苷，其在抑制血管钙化疾病中的应用具有显著效果。具体的，薯蓣皂苷在制备下述各类药物，包括缓解及逆转血管损伤，缓解及逆转血管动脉粥样硬化性病变药物，缓解及逆转血管顺应性降低、僵硬度增加，针对腹主动脉的抗炎，抗氧化，抗DNA损伤以及抗血管平滑肌细胞凋亡以及在制备通过下调Rac1/P66shc信号通路的方式保护并维持血管稳态的药物中的应用。

Application of Diosgenin in the Preparation of Drugs for Inhibiting Vascular Calcification

The invention discloses the application of diosgenin in the preparation of drugs for inhibiting vascular calcification disease, in particular relates to the application of a natural steroidal saponin compound, diosgenin, which has remarkable effect in inhibiting vascular calcification disease. Specifically, diosgenin is preparing the following drugs, including drugs for alleviating and reversing vascular injury, alleviating and reversing vascular atherosclerosis, reducing vascular compliance and increasing stiffness, anti-inflammation, anti-oxidation, anti-DNA damage and anti-vascular smooth muscle cell apoptosis for abdominal aorta, and preparing drugs by down-regulating Rac1/P66shc signaling pathway. The use of drugs to protect and maintain vascular homeostasis.

【技术实现步骤摘要】
薯蓣皂苷在制备抑制血管钙化药物中的应用
本专利技术涉及医药
，具体涉及薯蓣皂苷在制备抑制血管钙化药物中的应用。
技术介绍
血管钙化是发生于动脉粥样硬化性血管处的病变，会导致血管的顺应性降低，僵硬度增加，也存在于糖尿病、慢性肾病、高血压等疾病的病理过程中，是造成心脑血管疾病高死亡率的重要因素。研究表明，多种因素参与血管钙化的发生。血管钙化的关键问题是血管平滑肌细胞在诱导条件下发生表型转化。既往研究认为，血管钙化是钙盐在血管壁处的被动沉积，然而近年来的许多研究显示，血管钙化其实是一个主动的可调节的过程，其形成与骨形成过程有相似之处，那么如何对血管钙化进行干预降低其风险，成了我们亟待解决的问题。薯蓣皂苷是薯蓣科植物中的主要成分，现代药理学认为，薯蓣皂苷在改善动脉粥样硬化、保护血管内皮功能、减少心脑肾的缺血再灌注损伤、降低血糖等方面发挥着重要的作用。但迄今为止，薯蓣皂苷在血管钙化治疗以及血管钙化药物制备应用方面的结果仍未见报道。
技术实现思路
为了探求一种能够缓解血管钙化疾病症状并且能够放缓血管钙化疾病进程的药物，本专利技术研究并公开了一种天然甾体皂苷类化合物的应用——薯蓣皂苷，其在抑制血管钙化疾病中的应用具有显著效果。具体的，对于上文所述的应用是指薯蓣皂苷在制备缓解及逆转血管药物损伤中的应用。具体的，对于上文所述的应用是指薯蓣皂苷在制备缓解及逆转血管动脉粥样硬化性病变药物中的应用。具体的，对于上文所述的应用是所述薯蓣皂苷在制备缓解及逆转血管顺应性降低、僵硬度增加药物中的应用。具体的，对于上文所述的应用是指薯蓣皂苷在制备针对腹主动脉的抗炎，抗氧化，抗DNA损伤以及抗血管平滑肌细胞凋亡的药物中的应用。具体的，对于上文所述的应用是指薯蓣皂苷在制备通过下调Rac1/P66shc信号通路的方式保护并维持血管代谢稳态的药物中的应用。具体的，在LDL受体敲除小鼠中的薯蓣皂苷有效浓度为35-70mg/kg，根据此研究的内容推算，在人体内发挥作用的薯蓣皂苷有效浓度为3.2-9.7mg/kg，每天一次，口服。在本专利技术实施例中，将薯蓣皂苷分别以35mg/kg、70mg/kg的剂量，每天一次给小鼠灌胃给药12周，能够明显缓解甚至逆转HFD+维生素D3(10000U/kg)每天一次给小鼠灌胃给药12周造成的血管壁损伤，且疗效呈剂量依赖性。与单纯HFD+维生素D3(10000U/kg)灌胃造模组相比，薯蓣皂苷能显著性的缓解小鼠腹主动脉血管壁的损伤(结果见图1-2)。薯蓣皂苷应用于血管钙化的治疗保护作用是通过抗炎，抗氧化，抗DNA损伤以及抗血管平滑肌细胞凋亡的作用产生的(图3-5)。此外，薯蓣皂苷在血管钙化的治疗应用中能够通过下调Rac1/P66shc信号通路的方式保护并维持血管的稳态(图5)。附图说明图1.光学显微镜下对腹主动脉切片进行HE、茜素红染色以观察薯蓣皂苷对HFD+维生素D3所致血管钙化模型小鼠腹主动脉的影响。图2.凋亡相关蛋白Caspase3，Caspase9以及Bcl-2表达水平经由蛋白印记检测以观察薯蓣皂苷对HFD+维生素D3所致血管钙化模型小鼠腹主动脉内细胞凋亡的影响。图3.血清SOD，MDA,LDH活性的检测以及血清中ROS的含量的检测以观察的影响薯蓣皂苷对HFD+维生素D3所致血管钙化模型小鼠氧化应激水平的影响。图4.蛋白免疫印记及定量PCR检测β-catenin，PPARγ，αSMA以及OCN以观察薯蓣皂苷对HFD+维生素D3所致血管钙化模型小鼠腹主动脉内钙化的影响。图5.蛋白免疫印记检测Rac1、p66shc以及沉默Rac1与p66shc之后β-catenin、PPARγ和αSMA的蛋白表达水平以观察薯蓣皂苷对HFD+维生素D3所致血管钙化模型小鼠Rac1/p66shc通路抑制的影响。具体实施方式下述非限定性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本专利技术，但不以任何方式限制本专利技术。8周龄无特定病原(SPF)雌性LDLr-/-小鼠：体重20-25g，n＝30；北京大学医学部提供。统计分析结果表示为平均值±SD。所有统计学比较均使用SPSS19.0统计软件(Chicago，IL)进行。所有的数据在不同的组中使用单因素方差分析进行比较，然后进行LSD后测。P<0.05时认为差异有统计学意义。实施例11动物模型建立所有的动物护理和实验程序都是遵循大连医科大学实验动物科学中心的动物管理和使用委员会(IACUC)要求进行的。选取8周龄无特定病原(SPF)雌性LDLr-/-小鼠进行研究。动物房环境设定在(22-25℃)的温度，每天12小时/12小时的白夜循环，动物在笼中可自由汲取水与食物以及，小鼠有一周适应新环境，之后按如下处理持续12周。2血管钙化模型的构建及干预随机将小鼠分为五组：第1组(n＝6)只进行正常饮食普通饲料(空白组)；第2组(n＝6)正常饮食普通饲料，薯蓣皂苷35mg/kg每日灌胃一次(薯蓣皂苷；南京京珠生物科技有限公司)(薯蓣皂苷溶解于0.5％羧甲基纤维素(CMC-Na))；第3组(n＝6)HFD+维生素D3(10000U/kg)每日灌胃一次。第4组(n＝6)HFD+维生素D3(10000U/kg)+薯蓣皂苷35mg/kg每日灌胃一次(薯蓣皂苷；南京京珠生物科技有限公司)(薯蓣皂苷溶解于0.5％羧甲基纤维素(CMC-Na))；第5组(n＝6)HFD+维生素D3(10000U/kg)+薯蓣皂苷70mg/kg每日灌胃一次(薯蓣皂苷；南京京珠生物科技有限公司)(薯蓣皂苷溶解于0.5％羧甲基纤维素(CMC-Na))。12周后，将所有小鼠安乐死。分离腹主动脉用以评估总体形态学，组织学，蛋白质印迹和qRT-PCR分析。通过心脏穿刺收集全血。将末端血样离心(4℃，2000g，10分钟)以获得血清用于后期分析。(其中HFD为高脂肪饮食，是商业制备的小鼠食品，补充有20.0％(wt/wt)可可脂，1.25％(wt/wt)胆固醇，22.5％(wt/wt)蛋白质和45.0％碳水化合物，产于中国上海普路腾生物科技有限公司)3组织学评估小鼠安乐死后，腹主动脉被立即分离。在解剖显微镜下仔细去除所有多余的软组织，以防损伤血管形态。将获取的腹主动脉弓端置于10％福尔马林中固定72小时(24小时后更换一次福尔马林)，然后在10％EDTA中脱钙4周并用石蜡包埋。通过用HE染色以及茜素红染色的连续4μm厚的纵向切片的显微镜检查评估组织形态学变化。图1.血管组织切片染色结果。(A)H&E染色结果作为常用的组织染色方法评估整体形态。(B)茜素红染色切片用以评估血管内膜钙化结节的情况。图1显示了组织学染色所示的不同程度的血管组织的钙化情况。在HFD+维生素D3组中可见血管内膜中橘红色钙化结节明显增多，内膜结构发生改变。橘红色钙化结节(附图1经过灰色处理，为图中深色)含量随着对小鼠应用的薯蓣皂苷计量的提高而逐渐减轻。图2A中HE染色显示了薯蓣皂苷对小鼠的大致情况，在以70mg/kg的高剂量作用时，如切片中血管内膜的完整程度趋于正常组(2B)。4氧化损伤相关标志物及抗氧化剂活性测定使用检测试剂盒(南京建成生物工程研究所)按照生产商的方案检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)，丙二醛(MDA)，乳酸脱氢酶(LDH)的活性以及本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.薯蓣皂苷在制备治疗抑制血管钙化疾病药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.薯蓣皂苷在制备治疗抑制血管钙化疾病药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述薯蓣皂苷在制备缓解及逆转血管药物损伤中的应用。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述薯蓣皂苷在制备缓解及逆转血管动脉粥样硬化性病变药物中的应用。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述薯蓣皂苷在制备缓解及逆转血管顺应性降低、僵硬度增加药物中的应用。5.根据权利要求1所述的应用，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙慧君，耿仲亮，彭金咏，王长远，马晓东，孟强，刘琦，刘志浩，吴敬敬，
申请(专利权)人：大连医科大学，
类型：发明
国别省市：辽宁,21