一株高产虫草素的白囊耙齿菌株及其培养方法技术

本发明专利技术提供一株高产虫草素的白囊耙齿菌株及其培养方法；是从一株亚香棒虫草的子实体分离纯化并经分子鉴定为白囊耙齿菌Irpex lacteus CHG05。该菌种通过逐级培养，获得菌丝体，经液体发酵培养后，采用高效液相法分别测定孢内、胞外的虫草素、腺嘌呤和麦角甾醇的含量，同时采用蒽酮‑硫酸比色法检测孢内、外虫草多糖，用高碘酸氧化比色法检测孢内、外产虫草酸。经检测发现菌丝体中虫草素含量远高于天然亚香棒虫草，且菌丝体内含有较高的麦角甾醇、虫草多糖、虫草酸和腺嘌呤。

A High-yield Cordycepin-producing White Bladder Rake Strain and Its Culture Method

The present invention provides a white bladder harrowing strain with high cordycepin yield and its culture method; it is isolated and purified from the fruiting body of a Cordyceps militaris and identified as Irpex lacteus CHG05 by molecular identification. The mycelium was obtained by step-by-step culture. After liquid fermentation, the contents of cordycepin, adenine and ergosterol were determined by high performance liquid chromatography, anthrone sulfuric acid colorimetry was used to detect intrasporal and extrasporal cordycepin polysaccharides, and iodic acid oxidation colorimetry was used to detect intrasporal and extrasporal cordycepin acid production. The content of cordycepin in mycelium was much higher than that of natural Cordyceps militaris, and the mycelium contained higher ergosterol, Cordyceps polysaccharide, cordycepin acid and adenine.

【技术实现步骤摘要】
一株高产虫草素的白囊耙齿菌株及其培养方法
：本专利技术属于微生物
，具体涉及一株菌株及其制备方法，特别是一株高产虫草素的白囊耙齿菌株及其培养方法。
技术介绍
：虫草素的功效：虫草素是腺苷类活性物质，化学结构为3-脱氧腺苷，是核苷类抗菌素。有抗肿瘤、抗菌、抗病毒、抗氧化、免疫调节、抑制蛋白激酶活性、重建细胞骨架的作用。虫草素在小鼠S180肿瘤实验中有明显抑制作用，对小鼠的艾氏腹水癌也有同样效果；虫草素对炭疽杆菌、链球菌、出血性败血症菌均有抑制作用；对皮肤致病性真菌也有抑制作用，如小芽孢癣菌、大芽孢癣菌；对人体免疫缺陷型病毒和脑炎病毒的侵染和反转录酶的活性起到抑制作用；虫草素还具有抗白血病、抗炎症和免疫调节作用。虫草素目前主要来源于化学合成、野生虫草和生物发酵三种途径。化学合成的虫草素，副产物多、产率低，反应原料贵且环境污染严重；野生虫草资源有限，虫草素含量低；生物发酵是菌种利用发酵培养基在较温和的条件下转化产生虫草素，可行性较好，菌种的选用是虫草素产量的关键因素之一。因此，因此在寻求高产虫草素的菌种；以亚香棒虫草中组织分离得到的菌株为菌种，经分离纯化培养、筛选、分子鉴定得到白囊耙齿菌IrpexlacteusCHG05。该菌种通过逐级培养，获得菌丝体，经液体发酵培养后，采用高效液相法分别测定孢内、胞外的虫草素、腺嘌呤和麦角甾醇的含量，同时采用蒽酮-硫酸比色法检测孢内、外虫草多糖，用高碘酸氧化比色法检测孢内、外产虫草酸。该菌株高产虫草素，通过逐级培养，获得菌丝体，经检测发现菌丝体中虫草素含量远高于天然亚香棒虫草；具菌丝体内含有较高的麦角甾醇、虫草多糖、虫草酸和腺嘌呤，有较广阔市场前景。该菌种是原生态的、未进行基因操作，发酵转化只是利用基础培养基，未进行发酵培养基和条件的优化，胞内虫草素产率可达到6.83mg/g,胞外虫草素浓度可达12.2ug/ml，为后续培养基和发酵条件的优化，提高虫草素产率奠定良好的基础。
技术实现思路
本专利技术提供一株高产虫草素的白囊耙齿菌株及其培养方法；是从一株亚香棒虫草的子实体分离纯化并经分子鉴定为白囊耙齿菌IrpexlacteusCHG05。该菌种通过逐级培养，获得菌丝体，经液体发酵培养后，采用高效液相法分别测定孢内、胞外的虫草素、腺嘌呤和麦角甾醇的含量，同时采用蒽酮-硫酸比色法检测孢内、外虫草多糖，用高碘酸氧化比色法检测孢内、外产虫草酸。经检测发现菌丝体中虫草素含量远高于天然亚香棒虫草，且菌丝体内含有较高的麦角甾醇、虫草多糖、虫草酸和腺嘌呤。本专利技术公开的一株高产虫草素的白囊耙齿菌株，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCCNO:M2018540，保藏日期，2018年8月14日，保藏地址：中国，武汉，武汉大学，邮编430072。本专利技术所述菌株为高产虫草素的白囊耙齿菌株IrpexlacteusCHG05，NCBI序列号MH890689；所述高产虫草素的白囊耙齿菌株IrpexlacteusCHG05的rRNA基因ITS1-5.8S-ITS4区序列如下：TATTGATATGCTTAAGTTCAGCGGGTAGTCCTACCTGATTTGAGCTCAGATTGTCAAATGATTGTCTCGGCAAGGAGACGGTTCGAAGCATGAACACCATAAATACTTCAACACCACAGCGCAGATAATTATCACACTGAAGGCGATCCGTAAGATTCACGCTAATGCATTTCAGAGGAGTCGACCGACAAGGGCCGACACAACCTCCAAGTCCAAGCCCGCTAAACCTTCATTACAAAAATTTAGGGGTTGAGAATACCATGAGACTCAAACAGGCATACTCCTCGGAATACCAAGGAGTGCAAGGTGCGTTCAAAGATTCGATGATTCACTGAATTCTGCAATTCACATTACTTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGATGCGAGAGCCAAGAGATCCGTTGCTGAAAGTTGTATATAAATGTGTTATACACAGTTGACATTCTATAACTGAAGCGTTTGTAGTAAAACATAAGAAAGAAAAACGGCTTGTTCAACCGAAGACCTCTCGCGAGATCCTGGAAGCTTCCACCATTTTTTTCTCTTACATAAAGTGCACAGAGGTTAAGAGTGGATGAGCCAGGCGTGCACATGCCTCGTGAGAGGCCAGCTACAACCCGTTCAAAACTCGATAATGATCCTTCCGCAGGT。本专利技术的另一目的公开的是一株高产虫草素的白囊耙齿菌株的培养方法，其是以亚香棒虫草中组织分离得到的菌株为菌种，包括如下方法步骤：（1）固体分离培养：培养基选用改良马铃薯葡萄糖培养基，对亚香棒虫草的子实体采用表面消毒，组织分离法接种其到改良马铃薯葡萄糖培养基后培养得真菌，在25-28℃条件下静止培养5-10天；纯化三次；经液体发酵筛选到白囊耙齿菌IrpexlacteusCHG05；然后接种白囊耙齿菌IrpexlacteusCHG05于改良马铃薯葡萄糖培养基中进行斜面培养，在25-28℃条件下静止培养5-10天，得白囊耙齿菌IrpexlacteusCHG05菌丝；（2）种子培养：接种步骤（1）的白囊耙齿菌IrpexlacteusCHG05菌丝至种子培养基中，于25-28℃条件下培养5-10天，得白囊耙齿菌IrpexlacteusCHG05的种子菌液；（3）发酵培养：按5-20%（V/V）接种量接种步骤（2）白囊耙齿菌IrpexlacteusCHG05的种子菌液至基础发酵培养基中，于15-25℃条件下培养7-18天，得白囊耙齿菌IrpexlacteusCHG05的发酵培养菌丝体；（4）抽滤、烘干，制高产虫草素的白囊耙齿菌株：将步骤（3）所得的白囊耙齿菌IrpexlacteusCHG05的发酵培养菌丝体进行抽滤、烘干、捣碎，即制得为高产虫草素的白囊耙齿菌株的菌丝粉产品。所述的一株高产虫草素的白囊耙齿菌株的培养方法，其步骤（1）所述改良马铃薯葡萄糖培养基各组分的组成为：磷酸二氢钾0.03-0.08%，马铃薯15-30%，蛋白胨0.5-1.5%，硫酸镁0.03-0.08%，氨苄青霉素150-250ug/ml，葡萄糖1-3%，琼脂1.5-2.0%。所述的一株高产虫草素的白囊耙齿菌株的培养方法，其步骤（2）所述的种子培养基的各组分组成为磷酸二氢钾0.03-0.07%，马铃薯15-25%，蛋白胨0.5-1.5%，硫酸镁0.03-0.06%，氨苄青霉素150-250ug/ml，葡萄糖1-3%，其余为水，pH自然；控制培养温度为25-28℃，转速为150r/min。所述的一株高产虫草素的白囊耙齿菌株的培养方法，优选的是其步骤（3）所述的发酵培养基包括如下质量组分组成：1)碳源：葡萄糖1-3%，玉米粉1-3%，白糖0.5-1.5%，麸皮0.5-1.5%；2)氮源：酵母浸膏0.1-0.3%，牛肉浸膏0.5-1.2%，豆粕0.5-1.5%，NH4NO30.1-0.3%；3)无机盐：MgSO40.05-0.09%,KH2PO40.03-0.8%,K2HPO40本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株高产虫草素的白囊耙齿菌株，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO: M 2018540，保藏日期，2018 年 8月 28日，保藏地址：中国，武汉，武汉大学，邮编430072。

【技术特征摘要】
1.一株高产虫草素的白囊耙齿菌株，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCCNO:M2018540，保藏日期，2018年8月28日，保藏地址：中国，武汉，武汉大学，邮编430072。2.根据权利要求1所述的一株高产虫草素的白囊耙齿菌株，其特征是所述菌株为高产虫草素的白囊耙齿菌株IrpexlacteusCHG05，NCBI序列号MH890689；所述高产虫草素的白囊耙齿菌株IrpexlacteusCHG05的rRNA基因ITS1-5.8S-ITS4区序列如下：TATTGATATGCTTAAGTTCAGCGGGTAGTCCTACCTGATTTGAGCTCAGATTGTCAAATGATTGTCTCGGCAAGGAGACGGTTCGAAGCATGAACACCATAAATACTTCAACACCACAGCGCAGATAATTATCACACTGAAGGCGATCCGTAAGATTCACGCTAATGCATTTCAGAGGAGTCGACCGACAAGGGCCGACACAACCTCCAAGTCCAAGCCCGCTAAACCTTCATTACAAAAATTTAGGGGTTGAGAATACCATGAGACTCAAACAGGCATACTCCTCGGAATACCAAGGAGTGCAAGGTGCGTTCAAAGATTCGATGATTCACTGAATTCTGCAATTCACATTACTTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGATGCGAGAGCCAAGAGATCCGTTGCTGAAAGTTGTATATAAATGTGTTATACACAGTTGACATTCTATAACTGAAGCGTTTGTAGTAAAACATAAGAAAGAAAAACGGCTTGTTCAACCGAAGACCTCTCGCGAGATCCTGGAAGCTTCCACCATTTTTTTCTCTTACATAAAGTGCACAGAGGTTAAGAGTGGATGAGCCAGGCGTGCACATGCCTCGTGAGAGGCCAGCTACAACCCGTTCAAAACTCGATAATGATCCTTCCGCAGGT。3.根据权利要求1所述的一株高产虫草素的白囊耙齿菌株的培养方法，其特征是以亚香棒虫草中组织分离得到的菌株为菌种，包括如下方法步骤：（1）固体分离培养：培养基选用改良马铃薯葡萄糖培养基，对亚香棒虫草的子实体采用表面消毒，组织分离法接种其到改良马铃薯葡萄糖培养基后培养得真菌，在25-28℃条件下...

【专利技术属性】
技术研发人员：冷桂华，刘紫英，袁斌，王瑞君，吕美云，
申请(专利权)人：宜春学院，
类型：发明
国别省市：江西,36