一种对四种人体体液来源进行鉴定的方法和系统技术方案

本发明专利技术提供一种对四种人体体液来源进行鉴定的方法和系统。该方法包括如下步骤：1)提取待鉴定的人体体液样本中的RNA，其中，人体体液样本的可能来源包括外周血、月经血、精液或唾液；2)对RNA中的体液特异性miRNA进行逆转录，并对得到的逆转录产物进行扩增，获得相应的扩增结果，其中，体液特异性miRNA包括miRNA214、miRNA451、miRNA144、miRNA888、miRNA891和miRNA205，同时，对内参基因进行逆转录，并对得到的内参逆转录产物进行扩增，获得内参扩增结果；3)根据扩增结果和内参扩增结果，确定所述人体体液样本的来源。采用上述方法，能够实现对人体体液样本组织属性来源的鉴定，并保证鉴定结果的准确性和可靠性。

A Method and System for Identification of Four Human Body Fluid Sources

The invention provides a method and a system for identifying four sources of human body fluids. The method includes the following steps: 1) extracting RNA from human body fluid samples to be identified, in which the possible sources of human body fluid samples include peripheral blood, menstrual blood, semen or saliva; 2) reverse transcription of humoral specific microRNAs in RNA, and amplification of the obtained reverse transcription products to obtain the corresponding amplification results, in which humoral specific microRNAs include microRNA214 and microRNA4. 51, microRNA 144, microRNA 888, microRNA 891 and microRNA 205. At the same time, the internal reference genes were retrieved, and the internal reference reverse transcription products were amplified to obtain the internal reference amplification results. 3) According to the amplification results and the internal reference amplification results, the source of the human body fluid samples was determined. The method mentioned above can identify the origin of tissue attributes of human body fluid samples and ensure the accuracy and reliability of the identification results.

【技术实现步骤摘要】
一种对四种人体体液来源进行鉴定的方法和系统
本专利技术涉及一种对四种人体体液来源进行鉴定的方法和系统，属于法医学物证鉴定

技术介绍
在犯罪现场遗留的人源性样本，如外周血、月经血、唾液、精液等，获知其准确的组织属性来源，对于案件定性或重现案发现场意义重大。因此，对犯罪现场生物检材进行组织来源推断一直是法医物证学重要的研究内容。目前针对人体体液样本组织属性来源的鉴定方法相对较多，包括传统的基于酶促反应或免疫学检测的生化鉴定方法和光谱学鉴定法等。随着分子生物学基础理论及检验技术的迅速发展，研究人员尝试用分子生物学的手段来解决组织来源鉴定问题，以进一步提高检测结果的准确性。目前常用的分子标记物包括信使RNA(messengerRNA，mRNA)、微RNA(MicroRNA，miRNA)、DNA甲基化等。miRNA是一类广泛存在于真核细胞中、约由18-25个核酸组成的内源性非编码小分子RNA，具有组织特异性高、分子小且不易降解的特点，即便在极端温度、强酸、强碱条件下，其含量和分子结构均无明显变化，满足检测降解检材的需求，成为继mRNA之后的用于解决法医学关注的热点。但是目前采用miRNA作为分子标记物以鉴定人体体液来源的技术还不成熟，特异性较低，影响了检测结果的准确性和可靠性。因此，如何提供一种准确的鉴定方法和系统，以判断人体体液来源成为有待解决的问题。
技术实现思路
本专利技术提供一种对四种人体体液来源进行鉴定的方法，通过甄选多种miRNA作为体液异性标记，根据上述体液特异性miRNA在不同人体体液中的相对表达量高低，实现对外周血、月经血、精液和唾液这四种人体体液样本组织属性来源的准确鉴定。本专利技术还提供一种对四种人体体液来源进行鉴定的系统，通过该系统能够实现对于人体体液样本组织属性来源的合理准确鉴定。本专利技术还提供一种检测体系，该检测体系能够准确获得待鉴定人体体液中体液特异性miRNA经逆转录和扩增后的扩增结果。本专利技术还提供一种检测试剂盒，包括上述检测体系。本专利技术提供一种对四种人体体液来源进行鉴定的方法，包括以下步骤：1)提取待鉴定的人体体液样本中的RNA，其中，该人体体液样本的可能来源包括外周血、月经血、精液或唾液；2)对上述RNA中的体液特异性miRNA进行逆转录，并对得到的逆转录产物进行扩增，获得扩增结果，其中，上述体液特异性miRNA包括miRNA214、miRNA451、miRNA144、miRNA888、miRNA891和miRNA205，同时，对内参基因进行逆转录，并对得到的内参逆转录产物进行扩增，获得内参扩增结果；3)根据上述扩增结果和内参扩增结果，确定人体体液样本的来源。本专利技术从多种miRNA中甄选出上述6条体液特异性miRNA作为四种人体体液：外周血、月经血、精液和唾液的特异性标记，以鉴定人体体液样本的组织属性来源。其中：miRNA451和miRN144作为血液的特异性标记，用于推断人体体液样本是否来源于血液；miRNA214作为月经血的特异性标记，以进一步推断来源于血液的人体体液样本是否来源于月经血；miRNA888和miRNA891作为精液特异性标记，miRNA205作为唾液特异性标记，用于进一步推断并非血液来源的人体体液样本是否来源于精液。通过对上述6条体液特异性miRNA进行逆转录及扩增结果的综合判断，实现对人体体液样本组织来源的准确判断。本专利技术对于步骤1)中如何提取待鉴定的人体体液样本中的RNA不做特别限定，可采取本领域常规的技术手段进行。在本专利技术具体实施过程中，首先提取待鉴定的人体体液样本中总的RNA，然后去除基因组以对其进行纯化，最后对其进行完整性检测及定量，比如控制RNA的浓度为100ng/μL以用于逆转录。可以理解，选用合理的逆转录引物及扩增引物，能够确保miRNA的高表达效率，保证鉴定结果的准确性和可靠性，在本专利技术优选的实施方式中，在步骤2)中：采用与上述6条体液特异性miRNA(即miRNA214、miRNA451、miRNA144、miRNA888、miRNA891和miRNA205)一一对应的6个逆转录引物对体液特异性miRNA进行逆转录，并分别得到相应的6个逆转录产物(即cDNA)，其中，逆转录引物为序列表中SEQIDNo.1至SEQIDNo.6的核苷酸序列；采用与上述6个逆转录产物一一对应的6对扩增引物分别对该逆转录产物进行扩增，并获得相应的扩增结果，比如Ct值(CycleThreshold)，其中，扩增引物为序列表中SEQIDNo.7至SEQIDNo.18的核苷酸序列。本专利技术对于步骤2)中所用的内参基因不做特别限定，可采用本领域常用的内参基因。在本专利技术具体实施过程中，步骤2)中所采用的内参基因为RNU6b，采用序列表中SEQIDNo.20的核苷酸序列对内参基因RNU6b进行逆转录，得到内参逆转录产物；采用序列表中SEQIDNo.19和SEQIDNo.20的核苷酸序列对上述内参逆转录产物进行扩增，得到内参扩增结果。本专利技术提供的与6条体液特异性miRNA对应的优选逆转录引物和内参基因RNU6b所对应的内参逆转录引物序列如表1所示。表1本专利技术所提供的与体液特异性miRNA对应的优选扩增引物序列和内参基因RNU6b对应的内参扩增引物序列如下表2所示，其中F代表上游引物，R代表下游引物。表2本专利技术对于上述步骤2)中逆转录及扩增反应的具体工艺不做特别限定，可采用本领域常规的技术进行。在本专利技术具体实施过程中，逆转录采用去核酸的水替代反转录酶设置阴性对照；扩增反应采用实时荧光定量(RealTimePCR)技术进行，具体采用荧光定量PCR仪，比如在QuantStudioTM7FlexReal-TimePCRSystem(AppliedBiosystems，美国)进行扩增反应，反应体系为10μL，包括Ct值在内的扩增结果通过QuantStudioTMReal-TimePCRSoftwarev1.3(ThermoFisherScientific，美国)输出。专利技术人通过对PCR扩增结果进行研究分析，发现：采用上述与体液特异性miRNA对应的逆转录引物和扩增引物，能够使各个体液特异性miRNA具有较高的表达效率，保证了鉴定结果的合理性和有效性。在本专利技术具体实施过程中，步骤3)具体是根据扩增结果，即根据各个体液特异性miRNA在待鉴定人体体液样本中的相对表达量，以确定人体体液样本的来源。上述步骤3)可通过人工判断，也可通过计算机程序实现。在本专利技术具体实施过程中，还可以联合其它法医学相关的人体体液组织来源鉴定技术，以更精确的获得鉴定结果。本专利技术还提供一种对四种人体体液来源进行鉴定的系统，包括：检测体系和推断体系，其中：检测体系用于对从人体体液样本中提取的RNA中的体液特异性miRNA进行逆转录，以及用于对得到的逆转录产物进行扩增，并获得扩增结果，其中，上述体液特异性miRNA包括miRNA214、miRNA451、miRNA144、miRNA888、miRNA891和miRNA205，检测体系还用于对内参基因进行逆转录，以及用于对得到的内参逆转录产物进行扩增，并获得内参扩增结果；推断体系用于根据上述扩增结果和内参扩增结果，确定人体体液样本的来源。上述检测体系具体用于：采用与上述本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种对四种人体体液来源进行鉴定的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)提取待鉴定的人体体液样本中的RNA，其中，所述人体体液样本的可能来源包括外周血、月经血、精液或唾液；2)对所述RNA中的体液特异性miRNA进行逆转录，并对得到的逆转录产物进行扩增，获得相应的扩增结果，其中，所述体液特异性miRNA包括miRNA214、miRNA451、miRNA144、miRNA888、miRNA891和miRNA205，同时，对内参基因进行逆转录，并对得到的内参逆转录产物进行扩增，获得内参扩增结果；3)根据上述扩增结果和内参扩增结果，确定所述人体体液样本的来源。

【技术特征摘要】
1.一种对四种人体体液来源进行鉴定的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)提取待鉴定的人体体液样本中的RNA，其中，所述人体体液样本的可能来源包括外周血、月经血、精液或唾液；2)对所述RNA中的体液特异性miRNA进行逆转录，并对得到的逆转录产物进行扩增，获得相应的扩增结果，其中，所述体液特异性miRNA包括miRNA214、miRNA451、miRNA144、miRNA888、miRNA891和miRNA205，同时，对内参基因进行逆转录，并对得到的内参逆转录产物进行扩增，获得内参扩增结果；3)根据上述扩增结果和内参扩增结果，确定所述人体体液样本的来源。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤2)中，采用与所述体液特异性miRNA一一对应的逆转录引物对其进行逆转录，分别得到相应的逆转录产物，其中，所述逆转录引物为序列表中SEQIDNo.1至SEQIDNo.6的核苷酸序列；采用与所述逆转录产物一一对应的扩增引物对其进行扩增，并获得相应的Ct值，其中，所述扩增引物为序列表中SEQIDNo.7至SEQIDNo.18的核苷酸序列。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述内参基因为RNU6b，采用序列表中SEQIDNo.20的核苷酸序列对其进行逆转录，得到所述内参逆转录产物；采用序列表中SEQIDNo.19和SEQIDNo.20的核苷酸序列对所述内参逆转录产物进行扩增，得到所述内参扩增结果。4.一种对四种人体体液来源进行鉴定的系统，其特征在于，包括：检测体系和推断体系，其中：所述检测体系用于对从人体体液样本中提取的RNA中的体液特异性miRNA进行逆转录，以及用于对得到的逆转录产物进行扩增，并获得扩增结果，所述体液特异性miRNA包括miRNA214、miRNA451、miRNA144、miRNA888、miRNA891和miRNA205，所述检测体系还用于对内参基因进行逆转录，以及用于对得到的内参...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙启凡，季安全，李冉冉，李彩霞，
申请(专利权)人：公安部物证鉴定中心，
类型：发明
国别省市：北京,11