本发明专利技术是一种海洋解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）BMF01的用途，所述的用途为BMF01菌株与/或其发酵液抑制病原真菌或者作为有效成份制备抑制病原真菌药物的用途，所述的病原真菌选自：食用菌污染菌链孢霉或绿色木霉或者白色念珠菌。本发明专利技术还公开了一种海洋解淀粉芽孢杆菌BMF01的产芽孢发酵培养方法。本发明专利技术针对食用菌栽培过程中链孢霉和木霉污染严重，而食用菌栽培周期短，应用化学药剂控制链孢霉和木霉不仅对食用菌生长有抑制作用，同时导致农药残留引起食品安全问题，发现并验证了解淀粉芽孢杆菌BMF01菌株或者其发酵液对链孢霉和木霉有较强抑制作用，同时对食用菌生长安全。
Application and sporulation method of Bacillus amylolytica BMF01
The invention relates to the use of BMF01 of Bacillus amyloliquefaciens, which is used to inhibit pathogenic fungi or to prepare antifungal drugs as effective ingredients by BMF01 strain and/or its fermentation broth. The pathogenic fungi are selected from: Streptomyces contaminated by edible fungi or Trichoderma viride or Candida albicans. The invention also discloses a sporulation fermentation culture method of Bacillus amylolytica BMF01. The invention aims at the serious pollution of Streptomyces and Trichoderma in the cultivation process of edible fungi, and the short cultivation period of edible fungi. The application of chemical agents to control Streptomyces and Trichoderma not only inhibits the growth of edible fungi, but also causes food safety problems caused by pesticide residues. It is found and verified that Bacillus amylolytica BMF01 strain or its fermentation liquid has strong inhibition effect on Streptomyces and Trichoderma. At the same time, it is safe for the growth of edible bacteria.
【技术实现步骤摘要】
海洋解淀粉芽孢杆菌BMF01用途及产芽孢方法
本专利技术涉及一种菌株的用途，特别是一种海洋解淀粉芽孢杆菌BMF01的抑菌用途。
技术介绍
海洋解淀粉芽孢杆菌（Ｂacillusamyloliquefaciens）BMF01，其保藏号为CCTCCNO：M2017153，是公开号为CN107460145A的中国专利文献所公开的菌株。该文献还公开了BMF01菌株所得到的抗菌蛋白对小麦根腐病菌具有明显抑菌效果。解淀粉芽孢杆菌是重要的农业生防菌之一，可产生一系列抑制细菌和真菌的代谢物。在美国、德国解淀粉芽孢杆菌已商品化，制成不同制剂用于马铃薯黑痣病、黄瓜白粉病和稻瘟病等病害的防治。我国农业部于2013年为解淀粉芽孢杆菌颁发了100亿活芽孢/g的母药和10亿活芽孢/g可湿性粉剂生产许可证，已有产品登记销售。生物防治是一种利用生物多样性控制有害生物的无公害治理方法，可以通过生物或其代谢产物抑制病原菌的发生和传播，安全且对生态环境影响小，能够弥补应用化学药物带来的不足。因此，进一步研发海洋解淀粉芽孢杆菌（Ｂacillusamyloliquefaciens）BMF01的用途具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种新的海洋解淀粉芽孢杆菌BMF01的用途。本专利技术所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本专利技术是一种海洋解淀粉芽孢杆菌（Bacillusamyloliquefaciens）BMF01（下称BMF01或BMF01菌株）的用途，其特点是：所述的用途为BMF01菌株与/或其发酵液抑制病原真菌或者作为有效成份制备抑制病原真菌药物的用途，所述的病原真菌选自：食用菌污染菌链孢霉或绿色木霉或者白色念珠菌。本专利技术所述的用途还可以为BMF01菌株与/或其发酵液作为有效成份制备杏鲍菇种植过程中的抗链孢霉或绿色木霉的药物的用途。本专利技术还公开了一种海洋解淀粉芽孢杆菌（Ｂacillusamyloliquefaciens）BMF01的产芽孢的方法，其特点是：发酵培养基配方为：麦麸0.75%、花生饼粉2.5%、CaCO30.05%；发酵条件为：pH7.0，温度30℃，装液量60mL/250mL，接种量8%，转速200r/min，培养时间54h。发酵培养得到的BMF01菌株发酵液用于作为有效成份制备抑制病原真菌药物，所述的病原真菌选自：食用菌污染菌链孢霉或绿色木霉或者白色念珠菌。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术针对食用菌栽培过程中链孢霉和木霉污染严重，而食用菌栽培周期短，应用化学药剂控制链孢霉和木霉不仅对食用菌生长有抑制作用，同时导致农药残留引起食品安全问题，发现并验证了解淀粉芽孢杆菌BMF01菌株或者其发酵液对链孢霉和木霉有较强抑制作用，同时对食用菌生长安全。本专利技术还研发了BMF01菌株的产芽孢发酵培养方法，为研制BMF01菌株生物制剂提供培养方法以解决食用菌生长过程中化学药剂控制污染的不足。再者，本专利技术针对现有技术白色念珠菌的控制主要用化学药物，且有一些菌株已经产生抗药性的不足，发现并验证了解淀粉芽孢杆菌BMF01菌株或者其代谢产物对白色念珠菌有较强的抑制作用，具有开发抗白色念珠菌药物的潜力。附图说明图1为BMF01菌株发酵液对链孢霉和绿色木霉的抑制作用图；图2为BMF01无菌发酵液对白色念珠菌的抑制作用图。具体实施方式以下进一步描述本专利技术的具体技术方案，以便于本领域的技术人员进一步地理解本专利技术，而不构成对其权利的限制。实施例1，BMF01菌株对食用菌污染菌链孢霉（链孢霉属）、绿色木霉(木霉属)的抑菌效果实验。1材料与方法1.1材料1.1.1供试菌株：BMF01菌株，由淮海工学院实验室从连云港海域中分离获得并保藏。其保藏号为CCTCCNO：M2017153。链孢霉、绿色木霉由淮海工学院海洋微生物实验室从连云港恒润食用菌有限公司菇房污染菌袋中分离纯化获得。1.1.2培养基菌株活化、平板对峙试验培养基及菌落特征观察培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，水1000mL。淀粉水解培养基：牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl5g，可溶性淀粉10g，琼脂20g，1000mL，PH自然。1.2方法1.2.1链孢霉、绿色木霉拮抗菌株实验无菌发酵液的制备：将活化好的BMF01菌株接种到装有60mLPD培养基的250mL三角瓶中，28℃，180r/min振荡培养52h。发酵液于4℃、8000r/min离心，取上清，上清液采用0.22μm的细菌过滤器过滤得到无菌发酵液备用。实验：在PDA平板中央接种活化好的病原菌，在距病原菌15mm处等距离打孔，在打好的孔中添加150μLBMF01菌株的无菌发酵液，以等量PD培养基为对照，28℃恒温培养，观察病原菌生长状况，测量BMF01菌株无菌发酵液对链孢霉的抑菌圈直径和菌株无菌发酵液对绿色木霉的抑菌带宽度，每个菌株为1个处理，每处理3次重复。1.2.2BMF01菌株对杏鲍菇菌丝生长的安全性测定在PDA平板中央接种活化好的杏鲍菇菌苔，在距菌苔15mm处等距离接种活化好的BMF01菌株，28℃恒温倒置培养，观察杏鲍菇生长状况，测量抑菌带宽度，每个菌株为1个处理，每处理3次重复。1.2.3BMF01菌株的种类鉴定形态特征观察将BMF01菌株接种于PDA培养基平板上，28℃培养24h，观察记录菌落形态特征并进行革兰氏染色、芽孢染色、鞭毛然色、荚膜染色。革兰氏染色：取生长16-20h的菌株按照常规染色方法进行制片，滴加结晶紫染液覆盖涂菌部位染色1-2min。缓流水冲洗至无色，用卢戈氏碘液冲去残留水迹，95%，乙醇脱色20-3s，水洗，番红复染液染色2min，缓流水冲洗至无色，晾干后镜检。菌体被染成红色为革兰氏阴性，菌体被染成紫色为革兰氏阳性。芽孢染色：取生长36-48h的菌株按常规方法制片，向载玻片上滴加5%孔雀绿水溶液覆盖涂菌部位，用夹子夹住载玻片在酒精灯上方加热至染液冒蒸汽5min，加热时补充染液，玻片冷却后，用缓流水冲洗至无色，干燥后用番红复染液染色2min，水洗，晾干后镜检。鞭毛染色：取生长16-20h的菌株按照常规染色方法进行制片，向载玻片上滴加鞭毛染色液6-7min，用缓流水冲洗至无色，干燥后用油镜检测荚膜染色：按照常规方法制片，向载玻片上滴加荚膜染色液1min，用缓流水冲洗至无色，用吸水纸吸干残夜，自然干燥，用油镜检测。2结果与分析2.1筛选试验结果表明，BMF01菌株对链孢霉和绿色木霉具有较强的抑制作用。具体实验结果参照图1。2.2BMF01菌株对杏鲍菇菌丝生长的安全性测定结果BMF01菌株对杏鲍菇菌丝生长没有明显的抑制作用，对杏鲍菇生长安全。实施例2，BMF01菌株对白色念珠菌的抑菌效果实验。材料与方法1.1材料1.1.1供试菌株BMF01菌株，由淮海工学院实验室从连云港海域中分离获得并保藏。其保藏号为CCTCCNO：M2017153。白色念珠菌，由淮海工学院实验室保存。1.1.2培养基BMF01菌株和白色念珠菌活化培养基：PDA培养基；BMF01菌株种子培养基：蛋白胨5g/L、酵母膏1g/L、葡萄糖5g/L，水1000mL；BMF01菌株发酵培养基：糊精玉米20g/L，牛肉膏15g/L，硫酸镁1.4g/L。白色念珠菌种子培养基：PD培本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种海洋解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）BMF01的用途，其特征在于：所述的用途为BMF01菌株与/或其发酵液抑制病原真菌或者作为有效成份制备抑制病原真菌药物的用途，所述的病原真菌选自：食用菌污染菌链孢霉或绿色木霉（(Trichoderma viride）或者白色念珠菌。
【技术特征摘要】
1.一种海洋解淀粉芽孢杆菌（Bacillusamyloliquefaciens）BMF01的用途，其特征在于：所述的用途为BMF01菌株与/或其发酵液抑制病原真菌或者作为有效成份制备抑制病原真菌药物的用途，所述的病原真菌选自：食用菌污染菌链孢霉或绿色木霉（(Trichodermaviride）或者白色念珠菌。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的用途为BMF01菌株与/或其发酵液作为有效成份制备杏鲍菇种植过程中的抗链孢霉或绿色木霉的药物的...
【专利技术属性】
技术研发人员：暴增海，李欢，吴海霞，曹雪梅，马桂珍，陈茹，万丹丹，
申请(专利权)人：淮海工学院，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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