从多穗石柯叶片中提取根皮苷的方法技术

本发明专利技术公开了一种从多穗石柯叶片中提取根皮苷的方法，将多穗石柯叶片进行研磨，得到叶片粉末；将叶片粉末与乙醇水溶液混合均匀，再放入索氏提取器中，回流提取得到第一提取液，将第一提取液进行过滤，得到滤渣和第一提取液滤液，在滤渣中加入乙醇水溶液，再放入索氏提取器中，回流提取得到第二提取液，将第一提取液滤液和第二提取液混合，得到提取液，浓缩提取液，再冷冻干燥得到干粉；将干粉在第一层析柱中静态吸附，在第二层析柱中静态吸附，用乙醇水溶液对第二层析柱进行冲洗，得到第二洗脱液后进行蒸发，得到根皮苷干粉，本发明专利技术方法采用回流提取有机溶剂提取根皮苷的方式，大大缩短了有机溶剂浸提的时间，降低了后期纯化的难度。

Extraction of Phloretin from the Leaves of Ligustrum multispicatum

The invention discloses a method for extracting phloridzin from the leaves of Ligustrum multispicatum, which grinds the leaves of Ligustrum multispicatum and obtains the powder of the leaves; mixes the powder of the leaves with ethanol aqueous solution evenly, then puts it into Soxhlet extractor, refluxes and extracts the first extract, filters the first extract, and adds ethanol water to the filter residue. The liquid is then put into the Soxhlet extractor, the second extract is obtained by reflux extraction, the filtrate of the first extract and the second extract are mixed, the extract is obtained, the extract is concentrated, and then the dry powder is obtained by freeze-drying; the dry powder is statically adsorbed in the first column, and statically adsorbed in the second column, and the second column is washed with ethanol-water solution, and the second eluent is then processed. The method adopts the method of reflux extraction of organic solvent to extract phloretin, which greatly shortens the time of organic solvent extraction and reduces the difficulty of later purification.

【技术实现步骤摘要】
从多穗石柯叶片中提取根皮苷的方法
本专利技术属于黄酮类化合物提取
，具体来说涉及一种从多穗石柯叶片中提取根皮苷的方法。
技术介绍
根皮苷是根皮素的2'-β-D-葡萄糖苷，为黄酮类中的二氢查尔酮苷。近年，根皮苷在多领域的作用被人们所发现。在医学方面除了用于糖尿病及其并发症的防治以外，对骨质疏松、记忆力减退、肥胖症以及心脑血管病都被证实有不错的防治效果。在化妆品行业,根皮苷可代替熊果苷作为增白剂。更能减缓皮脂的分泌,降低痤疮的发生。此外，根皮苷的甜度为葡萄糖的300倍，可用做天然非糖替代品又因其具有黄酮类的基本性质与功效可作为抗氧剂直接添加到食品中，在化学、食品、医学等领域均有广泛前景。壳斗科植物多穗石柯是一种富含根皮苷的植物，黄酮类化合物含量高达22.2％，其中根皮苷含量占黄酮总量的12.6％，是其他植物含量的数倍，是提取根皮苷绝佳原料。迄今为止根皮苷提取的方法包括了煎煮法，虽成本低廉、设备简单、无毒安全但由于根皮苷不易溶于水，易溶于有机溶剂的特性，会出现提取液中杂质较多，收率较低等问题。微波提取法通过在微波场中，对溶液中的部分组分被选择性加热，从而达到目标产物从基质中被溶解出的目的。目前微波提取还处于起步阶段受限于该微波设备和技术，且根皮苷热稳定性不佳等因素，难以达到预期目的。超声提取在直接打破细胞实现有效成分的溶出的同时，其他杂质也随着溶出加大了纯化的难度，对容器的要求高设备成本高也是超声提取的缺点。醇提法多采用乙醇安全无毒，较高程度上减少水溶性杂质的浸出，而回流提取又能减少有机试剂的用量且对设备的要求不高。目前分离纯化根皮苷的主要方法有:大孔树脂吸附法、聚酰胺层析柱分离法、化学萃取法、絮凝法、高效离心分配色谱法(HPCPC)和高速逆流色谱法(HSCCC)。总体来看，以上方法虽均能达到纯化目的，但各自均有缺点。如絮凝法中PAC的产率较低而壳聚糖纯化效果差，HPCPC与HSCCC设备昂贵，单次样品制备量少，化学萃取与中试剂毒性等问题。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种从多穗石柯叶片中提取根皮苷的方法，该方法尤其适用于实验用途，其采用聚酰胺与大孔树脂联用的分离方法，使粗提物在聚酰胺层析柱实现黄酮的分离后，在通过大孔树脂得到根皮苷，具有操作简单、分离效果好、负载量高、再生处理简单、解吸条件温和、使用周期长、吸附速度快且使用洗脱剂乙醇安全不污染环境成本低廉等优点。本专利技术的目的是通过下述技术方案予以实现的。一种从多穗石柯叶片中提取根皮苷的方法，包括以下步骤：1)将多穗石柯叶片进行研磨，过100～200目筛，得到叶片粉末；2)回流提取：将M1g叶片粉末与V1mL且乙醇体积浓度为70～80％的乙醇水溶液混合均匀，再放入索氏提取器中，回流提取至少4h后得到第一提取液，将第一提取液进行过滤，得到M2g滤渣和第一提取液滤液，在M2g滤渣中加入V2mL且乙醇体积浓度为70～80％的乙醇水溶液，再放入索氏提取器中，回流提取至少4h后得到第二提取液，其中，M1：V1＝1:(10～20)，M2：V2＝1:(10～20)；在所述步骤2)中，所述过滤通过减压抽滤实现。3)冷冻干燥：将步骤2)所得第一提取液滤液和第二提取液混合，得到提取液，浓缩所述提取液，直至除去提取液中的乙醇，再冷冻干燥得到M3mg干粉；在所述步骤3)中，浓缩所述提取液通过旋转蒸发仪实现。4)吸附：用乙醇体积浓度为80～95％的乙醇水溶液浸泡聚酰胺12～15h后，将聚酰胺取出并使用去离子水洗至排出的清洗液为中性，再用15～20wt％的氢氧化钠水溶液浸泡聚酰胺至少8h，将聚酰胺取出后用去离子水冲洗至排出的清洗液为中性；然后再用体积浓度为15～20％的盐酸溶液浸泡聚酰胺至少8h，取出聚酰胺后用去离子水冲洗至排出的清洗液为中性，将聚酰胺灌注到第一层析柱中，在第一层析柱中加入去离子水冲洗至该第一层析柱流出液无白色浑浊为止，将步骤3)得到的M3mg干粉用30～45℃的温水均匀分散成干粉浓度为30～80mg/mL的干粉液体，将干粉液体加入第一层析柱中静态吸附30～50min，其中，灌注到第一层析柱中聚酰胺所占该第一层析柱的体积为V3mL，M3：V3＝(35-90)：1；5)除杂质：用蒸馏水对步骤4)所得第一层析柱进行冲洗至洗脱液澄清；在所述步骤5)中，所述蒸馏水在第一层析柱中的流速为1～2mL/min。6)解吸：用乙醇体积浓度为X的乙醇水溶液，以2～5mL/min的流速洗脱第一层析柱，得到第一洗脱液，将第一洗脱液蒸发至乙醇挥发，得到浓缩液体；在所述步骤6)中，洗脱第一层析柱的所述乙醇水溶液的体积为该第一层析柱容积的至少6倍。7)吸附：用15～20wt％的氢氧化钠水溶液浸泡大孔树脂至少8h，取出大孔树脂后再用去离子水冲洗至排出的清洗液为中性，然后用15～20wt％盐酸溶液浸泡大孔树脂至少8h，取出大孔树脂，用去离子水冲洗大孔树脂直至排出的清洗液为中性，再用无水乙醇浸泡大孔树脂至少12h，取出大孔树脂，将大孔树脂灌注在第二层析柱中，在第二层析柱中加入去离子水冲洗至流出液无白色浑浊为止，将步骤7)所得浓缩液体加入第二层析柱中静态吸附30～50min，其中，灌注到第二层析柱中大孔树脂所占该第二层析柱的体积为V4mL，V3：V4＝1：(0.75-1.25)；8)解吸：用乙醇体积浓度为X的乙醇水溶液以2～3mL/min的流速对第二层析柱进行冲洗，得到第二洗脱液；在所述步骤8)中，洗脱第二层析柱的所述乙醇水溶液的体积为该第二层析柱容积的至少6倍。9)冷冻干燥：将步骤8)所得第二洗脱液进行蒸发，以去除其中乙醇，再冷冻干燥，得到根皮苷干粉，其中，所述X为70～90％。在所述步骤9)中，所述蒸发采用旋转蒸发仪，所述旋转蒸发仪中的挥发物为乙醇。在上述技术方案中，旋转蒸发仪的温度为45～50℃。在上述技术方案中，所述乙醇水溶液的pH为7～8。在上述技术方案中，所述冷冻干燥的步骤为：在-80～-70℃冷冻至少2小时，再于-50～40℃和0MPa的条件下保持至少12h。与现有技术相比，本专利技术的有益效果：1、本专利技术方法采用回流提取有机溶剂提取根皮苷的方式，大大缩短了有机溶剂浸提的时间，又在一定程度上减少了水溶性杂质的混入，降低了后期纯化的难度。提取溶剂乙醇不仅价格低廉，而且还可以在浓缩与冻干(冷冻干燥)的过程中实现回收。且对提取设备要求低、操作简单。2、本专利技术方法采用聚酰胺与大孔树脂联用的方式对粗提产物进行纯化，纯化材料再生后可循环使用，从而降低成本。纯化过程中并未使用高温、高压工艺,在简便操作的同时，也在一定程度上避免了根皮苷的降解。采用乙醇为洗脱液，降低了试验毒性。3、本专利技术方法采用冷冻干燥的方式制备根皮苷，低温的条件减少了根皮苷的损失进而提高产率。4、本专利技术方法多次采用过滤，目的是为了减少提取液中大颗粒对聚酰胺与大孔树脂吸附过程的干扰，提高吸附效率增加根皮苷得率。5、使用本方法提取根皮苷的产率达到5.12-5.5％，纯度达90％以上。具体实施方式下面结合具体实施例进一步说明本专利技术的技术方案。在下述实施例中，乙醇为色谱纯(天津市东天正精细化学试剂厂)，AB-8型大孔吸附树脂(东鸿化工有限公司)，聚酰胺树脂(30-60目，上海摩速科技有限公司)。下述实施例涉及仪器为本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从多穗石柯叶片中提取根皮苷的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将多穗石柯叶片进行研磨，过100～200目筛，得到叶片粉末；2)回流提取：将M1g叶片粉末与V1mL且乙醇体积浓度为70～80％的乙醇水溶液混合均匀，再放入索氏提取器中，回流提取至少4h后得到第一提取液，将第一提取液进行过滤，得到M2g滤渣和第一提取液滤液，在M2g滤渣中加入V2mL且乙醇体积浓度为70～80％的乙醇水溶液，再放入索氏提取器中，回流提取至少4h后得到第二提取液，其中，M1：V1＝1:(10～20)，M2：V2＝1:(10～20)；3)冷冻干燥：将步骤2)所得第一提取液滤液和第二提取液混合，得到提取液，浓缩所述提取液，直至除去提取液中的乙醇，再冷冻干燥得到M3mg干粉；4)吸附：用乙醇体积浓度为80～95％的乙醇水溶液浸泡聚酰胺12～15h后，将聚酰胺取出并使用去离子水洗至排出的清洗液为中性，再用15～20wt％的氢氧化钠水溶液浸泡聚酰胺至少8h，将聚酰胺取出后用去离子水冲洗至排出的清洗液为中性；然后再用体积浓度为15～20％的盐酸溶液浸泡聚酰胺至少8h，取出聚酰胺后用去离子水冲洗至排出的清洗液为中性，将聚酰胺灌注到第一层析柱中，在第一层析柱中加入去离子水冲洗至该第一层析柱流出液无白色浑浊为止，将步骤3)得到的M3mg干粉用30～45℃的温水均匀分散成干粉浓度为30～80mg/mL的干粉液体，将干粉液体加入第一层析柱中静态吸附30～50min，其中，灌注到第一层析柱中聚酰胺所占该第一层析柱的体积为V3mL，M3：V3＝(35‑90)：1；5)除杂质：用蒸馏水对步骤4)所得第一层析柱进行冲洗至洗脱液澄清；6)解吸：用乙醇体积浓度为X的乙醇水溶液，以2～5mL/min的流速洗脱第一层析柱，得到第一洗脱液，将第一洗脱液蒸发至乙醇挥发，得到浓缩液体；7)吸附：用15～20wt％的氢氧化钠水溶液浸泡大孔树脂至少8h，取出大孔树脂后再用去离子水冲洗至排出的清洗液为中性，然后用15～20wt％盐酸溶液浸泡大孔树脂至少8h，取出大孔树脂，用去离子水冲洗大孔树脂直至排出的清洗液为中性，再用无水乙醇浸泡大孔树脂至少12h，取出大孔树脂，将大孔树脂灌注在第二层析柱中，在第二层析柱中加入去离子水冲洗至流出液无白色浑浊为止，将步骤7)所得浓缩液体加入第二层析柱中静态吸附30～50min，其中，灌注到第二层析柱中大孔树脂所占该第二层析柱的体积为V4mL，V3：V4＝1：(0.75‑1.25)；8)解吸：用乙醇体积浓度为X的乙醇水溶液以2～3mL/min的流速对第二层析柱进行冲洗，得到第二洗脱液；9)冷冻干燥：将步骤8)所得第二洗脱液进行蒸发，以去除其中乙醇，再冷冻干燥，得到根皮苷干粉，其中，所述X为70～90％。...

【技术特征摘要】
1.一种从多穗石柯叶片中提取根皮苷的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将多穗石柯叶片进行研磨，过100～200目筛，得到叶片粉末；2)回流提取：将M1g叶片粉末与V1mL且乙醇体积浓度为70～80％的乙醇水溶液混合均匀，再放入索氏提取器中，回流提取至少4h后得到第一提取液，将第一提取液进行过滤，得到M2g滤渣和第一提取液滤液，在M2g滤渣中加入V2mL且乙醇体积浓度为70～80％的乙醇水溶液，再放入索氏提取器中，回流提取至少4h后得到第二提取液，其中，M1：V1＝1:(10～20)，M2：V2＝1:(10～20)；3)冷冻干燥：将步骤2)所得第一提取液滤液和第二提取液混合，得到提取液，浓缩所述提取液，直至除去提取液中的乙醇，再冷冻干燥得到M3mg干粉；4)吸附：用乙醇体积浓度为80～95％的乙醇水溶液浸泡聚酰胺12～15h后，将聚酰胺取出并使用去离子水洗至排出的清洗液为中性，再用15～20wt％的氢氧化钠水溶液浸泡聚酰胺至少8h，将聚酰胺取出后用去离子水冲洗至排出的清洗液为中性；然后再用体积浓度为15～20％的盐酸溶液浸泡聚酰胺至少8h，取出聚酰胺后用去离子水冲洗至排出的清洗液为中性，将聚酰胺灌注到第一层析柱中，在第一层析柱中加入去离子水冲洗至该第一层析柱流出液无白色浑浊为止，将步骤3)得到的M3mg干粉用30～45℃的温水均匀分散成干粉浓度为30～80mg/mL的干粉液体，将干粉液体加入第一层析柱中静态吸附30～50min，其中，灌注到第一层析柱中聚酰胺所占该第一层析柱的体积为V3mL，M3：V3＝(35-90)：1；5)除杂质：用蒸馏水对步骤4)所得第一层析柱进行冲洗至洗脱液澄清；6)解吸：用乙醇体积浓度为X的乙醇水溶液，以2～5mL/min的流速洗脱第一层析柱，得到第一洗脱液，将第一洗脱液蒸发至乙醇挥发，得到浓缩液体；7)吸附：用15～20wt％的氢氧化钠水溶液浸泡大孔树脂至少8h，取出大孔树脂后再...

【专利技术属性】
技术研发人员：王卓，龙月红，邢朝斌，
申请(专利权)人：华北理工大学，
类型：发明
国别省市：河北,13